x******8
发帖数: 350 | 1 本人比较菜，作GV3101的电转感受态细胞。懒，先过夜小培养5ml LB，在第二日下午扩
大培养又过夜，第三天早上开始作感受态，没有测od值。用10%甘油洗3次，最后重悬。
结果用一质粒验证，电转2kv，25UF，200欧密嘎，4.4ms电击时间。最后发现一个转化
子都没有。不知问题在哪？大家都是怎么作的啊？求指点，谢谢。 |
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x******8
发帖数: 350 | 2 自己上来更新下。
我重新设置了对照，使用了一个小的质粒7k左右，验证我的感受态细胞是没有问题的，
效率还可以；但是我的目的质粒是11k多点，这样的话，就很难转进去了。同一批次的
感受态，转对照没有任何问题，也就是大家说的'转农杆菌很容易‘的说法。但是我的
大质粒是很难转进去，即使转了有几个克隆长出来，效率是很低了。大家展开说说转大
质粒有什么方法吗？楼上的一个说转20k的，你作的如何？ |
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a**o
发帖数: 53 | 3 脓杆菌电转感受态很简单，过夜的菌液，很浓，不需在意OD，用冷水洗5遍，（10%甘油
洗一下），10%甘油重悬。10毫升菌液可以最后重悬在500ul里。电转2.5kv, 400欧，~
7ms. 加1ml培养基，复苏2小时。对于质粒转化，涂1ul就可以得到很多colony. |
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b******s
发帖数: 1089 | 5 正在构建几个带ccd的质粒。我们实验室的DH3.1以前都是用来转化构建好的质粒。转连
接产物效率好低！谁能给我一份比较好用的protocol做高效的DB3.1感受态细胞，谢谢
！ |
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j****n
发帖数: 3370 | 6 应该可以 时间长了 可能影响效率
以前实验室只有-20度的 也没出啥问题
就是2年要重新保存 感受态大概可以放3-6个月 |
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n******t
发帖数: 1281 | 7 FYI:
http://www.bacillusbbs.com/
Bacillus subtilis strain with inducible super-competence.
Zhang, X. Z. and Y. H. Zhang. 2011. Simple, fast and high-efficiency
transformation system for directed evolution of cellulase in Bacillus
subtilis. Microb. Biotechnol. 4:98-105. PMID: 21255377 read online
枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
1) 将菌种接种在LB平板上37 ℃培养过夜。
2) 用接种环接一环菌苔于5mL GM I 溶液，在30 ℃慢摇床（125 r/min）振荡培养
过夜。
3) 次日取2 mL转接到18 mL GM I 中，37 ℃快摇床（250 r/min）培养3.5 h。
4) 再取10 mL上一步骤的培养液转接到90 mL GM II 中，37 ℃慢摇床培养9... 阅读全帖 |
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q********g
发帖数: 10694 | 8 Sobereva
Department of Chemistry, University of Science and Technology Beijing,
Beijing 100083, China
前言：本文主要介绍过渡态、反应路径的计算方法，并讨论相关问题。由于这类算法极
多，可以互相组合，限于精力不可能面面俱到展开，所以只介绍常用，或者实用价值有
限但有启发性的方法。文中图片来自相关文献，做了一定修改。由于本文作为帖子发布
，文中无法插入复杂公式，故文中尽量将公式转化为文字描述并加以解释，这样必然不
如公式形式严谨，而且过于复杂的公式只能略过，但我想这样做的好处是更易把握方法
的梗概，有兴趣可以进一步阅读原文了解细节。对于Gaussian中可以实现的方法，文中
对其在Gaussian中的使用进行了一些讨论，希望能纠正一些网上流传的误区。虽然绝大
多数人不专门研究计算方法，其中很多方法也不会用到，但多了解一下对开阔思路是很
有好处的。
文中指的“反应”包括构象变化、异构化、单分子反应等任何涉及到过渡态的变化过程
。“反应物”与“产物”泛指这些过程的初态和末态。“优化”若未注明，... 阅读全帖 |
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d******a
发帖数: 32122 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
P836 (大同利益) 于 (Wed Jul 4 01:41:42 2012, 美东) 提到:
回国出差两周，顺带休假两周，停留了北京上海和几个二线城市，接触了体制内从副部
级到处级，体制外从刚毕业一年到公司的工程师到私企老板，感受只有一个：现在国内
人没有几个信tg了，也没有多少人关心这个国家和民族的命运和前途了，大家向往的就
是赶快捞钱跑路，对目前的中国模式多数不抱希望。
以前屁歪说中国doomed了，我不敢完全赞同。但是说tg doomed了，我看此话不离谱。
1.体制内的人，从北京某国家机器部门的官员到某省45岁的x改委主任，再到某厅的处
长和处级巡视员，都在打听如何将子女送出国读高中大学，都在感叹富豪们纷纷移民准
备后路。我跟他们开玩笑说“难道你们不是在准备后路吗？” 大家都承认随着经济的
发展，中国是越来越腐败了。某特权部门官员，公开给我说，他的妹二婚，他送了一套
住房，广东某特区城市。按他的正常收入，他一辈子也没钱买那里的房子。
2.大家都对中国的发展模式抱怀疑态度，都认为现在这种... 阅读全帖 |
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H****s
发帖数: 301 | 10 如果你确定你的BAC质粒和电转参数没有问题的话，买商业化的电转感受态细胞（DH10B
之类的）。我当时做一个220kb的BAC质粒，一直转不进去（用的是自己做的感受态）。
买了商用电转感受态细胞后，一次就转进去了。
cre |
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Y*****e
发帖数: 230 | 11 10月份中入的2014MDX AWD +Tech pkg，在这之前没开过什么好车，90年代的Camry开了
几年，所以开新车当然是样样好的。
因为每天上下班要开60miles，其中70% highway，开了这一个月下来也渐渐对这辆车的
各方面有所熟悉。
首先要表个态，车是好车，买了没后悔。
但好车也有掉链子的时候，新车到手时里程是4miles，基本属于是刚沾地的。所以我就
很开心的拿下了，但开了没几天就出了一个错误警告，Forward Collision Warning (
FCW) system和Lane Departure Warning (LDW) system同事出毛病不工作了，这两个功
能的工作性质：
FCW是在前车急刹车而自己的车没有及时制动而快速接近前车时给一个画面和声音的警
告，提醒你及时刹车。
LDW是在行驶过程中如果车辆开偏压线了或者变道时没打方向灯，给一个画面和声音的
警告。
从工作原理来说应该是中间后视镜背后的一个摄像头负责扫描前方路面，如果有情况就
发出相应的警告。
但是现在看来这个摄像头似乎工作的不太正常，从刚开始的几天罢工一次，到最后几乎
10次里有8次... 阅读全帖 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 13 我觉得省钱挺好的
不能因为钱不是你的就乱花
我们实验室现在的花钱习惯我就有点不适应
除了我都没有人自己配SDS-PAGE
都是买
我只有需要Gradient胶或者结果比较重要的时候才用买的
平时自己配一下没什么麻烦的；
他们每次表达蛋白的时候重新转质粒都用invitrogen买来的感受态细胞
一个反应一管
太tmd浪费了
要我说感受态细胞完全可以自己做
不放心的话ligation的时候用买来的好了；
连LB plate都没有人自己倒
全用买的；
一个LB还要买现成混好的粉末，
价钱贵了快一倍，
实验室明明几样原料都有。。。。。。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 14 以感受态细胞为例
买一盒TOP10，十管的，要$200
你做一次感受态细胞，可以TOP10,DH5alpha，BL21都做上
用一天
就算你是postdoc，这一天的工作至少够实验室用一年的了
要说什么盯着点去离心
做生物实验的这样很平常吧
我的意思就是说，如果有钱，实验室无所谓，老板无所谓，那就随便花呗
但是养成了习惯，以后如果自己开实验室，甚至自己开公司，再或者忽然一夜之间经费
紧张了，那很
难改过来吧
我也不是说什么都要home made
就是有些随手能省的，比如配个LB，称3次而不用只称一次的配好的mix，好习惯的话就
随手省了呗
再比如如果实验室里什么药品快没了，提前定起来；几个公司的东西一起定；而不是到
了临头要求
rush order，overnight shipping，长久下来很多shipping的钱就省下来了，用这个多
买点
药品多做些实验不好么
sigh，也许我是从个比较节俭的实验室出来的，习惯了
掉了 |
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b******n
发帖数: 4225 | 15 因为你是熟练工啊
你招一个老美小本试试
教的人和做的人都得花无数精力进去
如果一个实验室一年要花20管的量，你就知道这个合不合算了
比如说LB，你就觉得称3次（不知道你算不算上加琼脂）比买现成平板好
那是因为你做的量少，你试试看一天做200个平板的工作量看看
我非常不喜欢忙活了三四个小时只得到小山似的平板们的感觉
只是我现阶段经常得这么做，真想买来现成的直接用
再说了，你给全实验室都做了感受态
他们会在paper的acknowledgment里面说感谢某某的感受态细胞？
我不反对节省
但是如果精力都花在节省上了你好好一个博士博后PI就成了技术员了
老板对你的最大期望是data，你generate一大堆data才是正经事情
我对于这些省钱的招数的态度是知道有这么回事
但是具体是否用得看实际情况
时间是很宝贵的，宁可多看文章多规划规划下一步（实验，工作或者生活） |
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C*******e
发帖数: 4348 | 16 就像你说的，要具体情况个别分析
我没一杆子打翻一船的人
实验室一年就用20管感受态，那当然是买划算
如果像我们这种三天两头要买感受态，一个月大概要花$1000在这上面的呢？
如果你要一天200个平板，定得更make sense
（我说称重是说LB培养液哈，和那种premix的LB Broth Powder比）
我说的是有时候随手就能省的事情，可以多做做
假如有一天谁要海归，没那么多经费的时候，是不是也会采用这样的策略呢 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 17 还好吧，他家的XL1-Blue和BL21一盒也就一百多刀，我一盒可以用很久了。我每个
transformation最多用20ul的感受态细胞，反正最后只需要一个单菌落。。。
自己做感受态细胞太麻烦了，做少了划不来，做多了又觉得浪费，用不了放-80吧，放
久了自己也不放心用，万一转化不成功也不知道是哪里出的问题，还是用新制备的或者
新买的放心。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 18 PCR扩增出一个基因的片断，1200bp, 电泳，胶回收，连接到TA载体上，然后转化感受
态细菌，却得不到白色菌斑，都是蓝色载体自连的。
可能原因：
1）胶回收试剂盒大约1年半前买的，并被断断续续用过，是否过旧？但是QG buffer的
颜色没有变化，感觉应该没有问题
2）后来检测了一下胶回收后的DNA片断浓度和质量，浓度为15ng/ul,0D260/280=1.73,
OD260/230=0.03； 感觉浓度还可以，260/280也行，但是为何260/230那么低呢？ 看图
发现230处吸收特别高。这是什么原因？用的电泳胶不好，还是胶回收的试剂盒有问题？
3）用的载体连接是invitrogen的TOPO TA cloning kit, 感受态细菌也是他家的Top
10F. 载体是08年底的，有三年多了，会不会是时间久了自连的比较多？
大家分析下，问题出在哪里？ 全都换掉有些浪费。 |
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j*****q
发帖数: 82 | 19 这个问题最近ms有点更严重了。因为其他的plasmid里也出现了这样的情况。试了重新
划板，还是有。如果是其他plasmid污染，这个plasmid是在transformation前就混在我
转的plasmid里的呢还是就已经存在在感受态里的呢？我现在很怀疑感受态也给污染了。
再问个基础的问题，两个plasmid能同时transform到一个bacteria然后都复制下来吗？ |
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d**********9
发帖数: 981 | 20 多谢大家帮忙了，我在发帖之前自己也试过很多办法，但是都没有解决问题：
1.我试过在作1500bp片断连T载体的同时，作500bp片断的连接，没有问题，是不是
1500bp片断还是很难连很多？
2.本身我的酶切位点外多５个核苷，应该直接酶切没有问题
3.试过不同公司的ligase，但是transform之后都没有克隆
4。试过不同公司的感受态细胞，但是都没有克隆，对于单纯的质粒，能长克隆，可见
感受态细胞和LB板应该没有问题
5.没有试过不用CIP,接下来要试试
虽然所有的试剂都是到了新的实验室刚买的，但是也都是以前一直用着的。原来觉得实
验很简单，但是一直没有出东西，郁闷！ |
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q*******8
发帖数: 768 | 21
感受态的敏感性是不一样的，要检测感受态是否有功能，你要做的不只是阳性对照，还
要把你阳性对照里的质粒梯度稀释。
RESTRICTION ENZYME 也有讲究，NEB官网上对每个酶切位点都有评论，有的酶切位点就
是不好连。。。
另外TOPO TA真的很好用，超级快效率超级高，如果可以的话果断用TOPO的。 |
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S*******s
发帖数: 13043 | 22 http://blog.renren.com/share/245193400/14026251027
一个喜欢研究交通规则的80后开车人，根据自己开车感受总结的各种经验教训
来源： 顾玉芝的日志
1. 白色车，安全系数最高。
澳大利亚研究者新近发布调查报告，黑色汽车在白天与黑夜的事故率均高居榜首。在白
天，黑色汽车比白色汽车事故率高12%，在黎明前和黄昏后则高47%。
特别是傍晚的时候，远处跑来一辆黑色轿车，总感觉像穿了隐形衣，我还是比较喜欢白
色车，总是很显眼。在民间还有一种说法，白色汽车油耗低，原因是车身反射能量，节
约空调油耗，不过这个说法未得到权威证实。当时，我买白色捷达，除了安全因素考虑
外，还有一个原因：白色车便宜。
2. 安全带，必须扎，无论前排还是后排。
福建有个青年，带着父母、老婆孩子外出旅行，在高速公路上发生了追尾，四死一伤，
五人均未系安全带，司机平时安全意识就不高，还使用了安全带卡扣，追尾时，司机直
接飞出车外，当场死亡！
据统计：30%的事故伤亡，与不系安全带有关。
我上车，第一件事先系安全带，不管谁坐我的车，我都提醒大家系上安全带，无论前排
还是后排，我父母... 阅读全帖 |
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g******t
发帖数: 11249 | 23 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人： blacklv(嘿嘿), 信区： Returnee
标题： 美国求学执教的见闻和感受（转载）
发信站： BBS未名空间站(Thu Sep 21 09:10:09 2017,GMT)
现在我想简述一下我在美国七年求学执教的一些第一手见闻和感受。一是希望起到抛砖
引玉之效，二是给自己总结一下，为自己回国工作后和人侃教育整理一下材料。
几点说明：
1 我在21世纪初在北京某大学A学习，之后来美留学读博士（涉及学校 B C），再往后
在美国执教（大学D）。我对国内本科硕士，国外本科博士等阶段的基础科学教育（包
括学习和教学）都有一定体会，在我的系列中也会对中美的大学做一些对比。
2 我的专业方向属于纯数学（以及相当程度的理论物理）。我对实验类学科或工科了解
很少，故无法涉及这些方向。但我教过不少数学课（大学里学生最杂的课），这使得我
能大范围接触全校各个专业学生并由此感知他们的数学水平。
3 我求学的学校各自代表了中美的最高水平，我执教的也是老牌藤校。一方面我感觉到
了一流大学确有过人之处，另一方面我也看到了一些令我大跌眼镜的现象。我... 阅读全帖 |
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e****t
发帖数: 17914 | 24 【 以下文字转载自 Hardware 讨论区 】
发信人: higerg (higerg), 信区: Hardware
标 题: T530初步感受
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Sep 9 18:01:40 2012, 美东)
几天前收到t530，跟大家分享一下初步感受。
8月末下的单，半个月收到。i5-3210m,4g单条内存，1600x900屏幕，集成显卡，6芯电
池。硬盘是基本配置，自己换的ssd。税后800+（官网订购，shareholder program，用
的amazon的付款，好像30左右手续费，这个还没核实，早知道直接刷卡了）
外观，做工
手头有台t420，去年买的，做工差别不大。屏幕铰链很好，松紧度度适中。屏幕闭合状
态时，有一点松动。电池也有一点松动，其他部分很好。尺寸和重量差别也挺明显的。
键盘
跟之前的键盘还是有差别，孰优孰劣看个人感受。个人认为手感不错，比同样是巧克力
的苹果要好点。
散热
主要用途上上网，office，风扇基本没有噪音，机体相当凉爽。
屏幕效果
总体比去年的t420好，柔和很多，但是色彩有失真，可能是显卡没有调好，还在解决中。... 阅读全帖 |
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h****g
发帖数: 11365 | 25 几天前收到t530，跟大家分享一下初步感受。
8月末下的单，半个月收到。i5-3210m,4g单条内存，1600x900屏幕，集成显卡，6芯电
池。硬盘是基本配置，自己换的ssd。税后800+（官网订购，shareholder program，用
的amazon的付款，好像30左右手续费，这个还没核实，早知道直接刷卡了）
外观，做工
手头有台t420，去年买的，做工差别不大。屏幕铰链很好，松紧度度适中。屏幕闭合状
态时，有一点松动。电池也有一点松动，其他部分很好。尺寸和重量差别也挺明显的。
键盘
跟之前的键盘还是有差别，孰优孰劣看个人感受。个人认为手感不错，比同样是巧克力
的苹果要好点。
散热
主要用途上上网，office，风扇基本没有噪音，机体相当凉爽。
屏幕效果
总体比去年的t420好，柔和很多，但是色彩有失真，可能是显卡没有调好，还在解决中。
运行速度的直观感觉
i5速度比t420的i7双核要快点。还没加内存，单挑4gb目前够了。ssd硬盘是直接从420
上拿下来的，插上就能开机，只需更新驱动，速度很快。换ssd之前，用原装的机械硬
盘式了下，速度不如人意，特别是开机。
其他
3... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 26 《爸爸去哪儿》第二季再度回归，将在6月20日晚上22点在湖南卫视播出。参与的阵容到底是哪五家一直备受关注，目前官方已经证实新一季的五家分别是吴镇宇父子、黄磊父女、陆毅父女、曹格和儿女、杨威父子。图为《爸爸去哪儿2》最新拍摄照。
备受期待的湖南卫视《爸爸去哪儿》第二季即将于今晚（6月20日）22:00拉开神秘面纱，在此之前，为其预热的五场粉丝见面会活动已经为节目赚足了人气，新加盟的星爸吴镇宇、黄磊、陆毅、曹格、杨威来自不同地域、领域。有很多人会担心第二季模式会和第一季太类似而缺乏新鲜感，甚至有网友断言：“绝对不会有第一季那几个人好玩。”但据6月18日长沙看片会反馈及之前几场见面会表现，绝大部分媒体与观众都对《爸爸》第二季持肯定态度，均表示笑点更多更好玩，精彩程度超越第一季。总导演谢涤葵也信心满满，称节目组精心策划多点改革，绝对会让观众耳目一新。凤凰娱乐经过梳理，为您独家解析《爸爸去哪儿》第二季创新杀手锏，精彩看点不容错过。
节目气氛：更好笑更感人
搞怪宝贝萌翻天宠物情缘最催泪
嘉宾的选择是一个真人秀节目成功的关键，第一季《爸爸去哪儿》之所以能够大火，也与其中的真性情的爸爸们与可爱的孩子们... 阅读全帖 |
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l******3
发帖数: 293 | 27 布里斯班的第三场比赛，体育场周边早早就涌动着红色的海洋，我努力要将眼睛看到的
一切都刻在脑海里，多年后再追忆，会存留些什么呢？记忆一定会有磨损，比如如今再
想起2004年8月7日中国亚洲杯决赛，我耳边似乎还能清晰地想起比赛行将结束时，耳机
里急促的叮嘱，接收失败很难吗？未必，就看输给谁，在哪儿输，以怎样的方式输。
2015年1月22日，输给东道主，在阔别125个月的亚洲国家队顶级赛事的淘汰赛中输掉比
赛，以拼尽全力的方式没能挽回败局，我们应该坦然接受这一结局，没有一句抱怨，暂
且将疑问和不解包裹起来，此时不是战术复盘的最佳时刻。我们可以安慰自己，这不是
个最好的结束方式，但可以是中国队再度出发的最佳起点，这份收获在出征澳大利亚前
，在战胜乌兹别克斯坦前，都是断然不敢奢望的。
当我走进布里斯班大球场时，大门还未向球迷打开，场地内空空荡荡，前一天铺撒的绿
色小颗粒将原本斑驳的球场装点得生机勃发。场地内正在彩排球队入场，《义勇军进行
曲》昂然奏响，我在看台上用手机记录着这一瞬间，算计着中国队缺席这一时刻到底已
经多久，真会出现大家普遍期待的转折时刻或是蚕变时刻吗？还会继续高歌猛进吗？我
是悲... 阅读全帖 |
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m*********1
发帖数: 307 | 28 十一假期左右回去了20多天的时间,在出国前工作过的魔都转机顺便呆了一天多,在我老
家南方省会二线城市住了十多天,然后去公婆家西南方的四线小县城呆了一个星期。
行：
魔都的地铁开到了11条，其中二号线连通两大机场让我们受益颇多。也不贵。拥挤的状
态没有改变。打车的起步费自09年涨了两块，要14块，其中含了一个什么燃油费。交通
还是很方便的，地铁和的士相结合。
二线省会城市在大修地铁，预计很快会有2条线开通。的士开车非常勇猛，因为工地很
多，在部分开车不方便的地方经常有人反向开车，看得我们瞠目结舌，但是当地人很习
惯了。黑车，摩托车的士也很多，我还体验了一下摩的，很惊险。可能是自己的心态发
生了变化吧，总觉得没带头盔穿梭在车流中很危险。
四线小县城的出行完全靠摩托车了，因为是山地，自行车不流行。小车也多了很多，车
的数量跟道路状况完全不匹配。到处都在鸣笛，非常堵，灰尘满天。据说要修建到省会
城市的高速公路，届时到机场的时间将由现在的三个多小时缩减到50分钟。
食：
似乎没有印象中的那么好吃了。可能是因为自己总是望梅止渴，把国内的食物想象得过
分美好。也没有觉得多贵。
魔都一茶一坐两个人吃了... 阅读全帖 |
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m*********1
发帖数: 307 | 29 十一假期左右回去了20多天的时间,在出国前工作过的魔都转机顺便呆了一天多,在我老
家南方省会二线城市住了十多天,然后去公婆家西南方的四线小县城呆了一个星期。
行：
魔都的地铁开到了11条，其中二号线连通两大机场让我们受益颇多。也不贵。拥挤的状
态没有改变。打车的起步费自09年涨了两块，要14块，其中含了一个什么燃油费。交通
还是很方便的，地铁和的士相结合。
二线省会城市在大修地铁，预计很快会有2条线开通。的士开车非常勇猛，因为工地很
多，在部分开车不方便的地方经常有人反向开车，看得我们瞠目结舌，但是当地人很习
惯了。黑车，摩托车的士也很多，我还体验了一下摩的，很惊险。可能是自己的心态发
生了变化吧，总觉得没带头盔穿梭在车流中很危险。
四线小县城的出行完全靠摩托车了，因为是山地，自行车不流行。小车也多了很多，车
的数量跟道路状况完全不匹配。到处都在鸣笛，非常堵，灰尘满天。据说要修建到省会
城市的高速公路，届时到机场的时间将由现在的三个多小时缩减到50分钟。
食：
似乎没有印象中的那么好吃了。可能是因为自己总是望梅止渴，把国内的食物想象得过
分美好。也没有觉得多贵。
魔都一茶一坐两个人吃了... 阅读全帖 |
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j*******i
发帖数: 2424 | 30 【 以下文字转载自 NJU 讨论区 】
发信人: usca (路过), 信区: NJU
标 题: FW: 回国感受
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 8 12:59:15 2011, 美东)
这次回国呆的时间比较长，一个半月左右。北京上海一线城市和重庆，苏州这些二线城
市都跑了。
人
人多，乌央乌央的人，尤其是北京，地铁高峰期咱就不说了，几次都是10点多了上
地铁人都跟相片似地，地铁工作人员最后都来帮忙把人往门里面塞。
吃
不多说了，基本上每天都在馆子里，往往装修很好的店菜品味道反而一般，都是朋友同
学老同事带着去他们认为比较好的馆子，往往能大饱口福，美食在民间一点不假，不过
在国内的男性同学朋友几乎都是脂肪肝和高胆固醇，这个是国内吃的爽的代价吧。
穿
国内的款式更符合亚洲人的体型，款式非常多，国内的女性非常会打扮，但穿的成本和
十几年前已经不可同日而语了。除非你只考虑野店和路边小摊，只要是进了稍微像样的
服装店，最好做好心理准备。 出国前在Outlet买的$80 CK的小风衣在重庆解放碑的大
都会卖到了￥2600,回国穿的一双Clarks的牛皮鞋($60)在解放碑的... 阅读全帖 |
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y**u
发帖数: 741 | 31 我回国两年多了，作为过来人我想谈一点回国的感受，希望对想回国发展的朋友有点帮
助。我在美国呆了十多年，公司呆了6年。回国后感觉既没有想象的那么好，也没有像
论坛上所渲染的那样差。中国各界还是有很多优秀的人才在支撑着这个国家，这些人还
是很值得佩服的。回国的期望不要太高，要放低身态，要像当年出国时那样踏踏实实学
习。要学会适应社会，少抱怨，多努力，千万不要摆出一副高人一等的样子。回国前，
千万不要太草率，要精心准备，目标明确，要知道在美国多一手准备，在国内会省很多
精力。定位好自己的位置，设定自己的目标，不要盲目。国内白天的工作环境比较差，
受干扰的事情太多，要做好晚上加班的准备。国内工作计划性很差，你的日程随时会被
打乱，要做好随机应变的准备。国内还是需要很多人，但比以前更挑剔了。你要是没有
准备好，会很快不被重视。对每一位从国外来的人期望都挺高，但不会给你很多时间。
国内更希望短期效应。这就需要你手里有绝活很快能站住脚，一旦站住脚了你就建立了
信誉，工作就好开展了。国内机会很多，但不一定属于你的。但一旦你把握住了一个机
会，其它机会就会跟着来。国内都喜欢做锦上添花的事情，绝不会雪中送... 阅读全帖 |
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x*******3
发帖数: 395 | 32 之前也看到一些帖子说找工作的感受，当时感觉不是很深刻，现在发现真的是。
在家找工作快一个月了每天上网投简历，但是回音很少。本来以为有身份找工作会好点
，可能经验有限吧，去年毕业刚工作了一年多的loan mortgage processor.现在很苦恼
，发现network的重要性，后悔当初在学校怎么没有好好利用资源。
刚去健身房跑了下步，看到索契冬季奥运会，受了点启发：找工作难是一定的，摆正心
态，一定能找到！人家运动员4年才能参加一届奥运会，还不一定能当冠军呢！
说来我自己也算很自豪了，国内大学读的是2本，上UTD已经很知足了 （学霸们就不要
笑了）。以前4级英语考了3次才过，雅思2次过，到这边英语正常交流没问题，主要脸
皮够厚。一个学期后就开始打工赚钱，有时候打2份（学校一份，外面一份）再也没往
家里要一分钱。
去年毕业找到一份工作（loan mortgage processor),和男朋友领证了，生活开始朝着2
个人的方向努力。
给自己制定今年计划就是：找到一份正式的工作，再努力练习英语，锻炼好身体，回国
看爸妈！加油，希望和我一样再找工作的人，一起共勉！ |
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b*******d
发帖数: 32 | 33 我想这里有两点误解. 我确实有4年没回过国. 更要紧的是我不是个惯于投入生活的人,无论在美
国还是中国,这是个性格问题. 而且讲述感受时, 我在尽量使得自己的态度客观点,虽然
不成功.
我佩服你的是他们给你讲师你也能接受. 我承认我做不到. 当然也许你去的学校比较好.
另外, 我不是很同意你说的"本来回国就是很正常，很天经地义的事情", 否则也不会回
国的人并不占多数.
不过这些话没什么意义. 有意义的是能给也想回去的人一些参考, 自己能为国家的教育
,科研做点点可能的事(不是标榜, 我绝不是高尚的人,最多只能算是个正直的人).
地方探险一样
像是个外人。
说，
态一直下去并不利于事业发展。 |
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a****t
发帖数: 7049 | 34 所以可以留下那么点点属于上帝的东西。我说上帝而不是主观，因为主观是高级神经状
态了，依靠的东西应该还是宏观的，应该远在测量极限之上。 |
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w*******d
发帖数: 761 | 35 去年年底，当薄熙来已彻底倒台，确定不可能翻身后，彭真之子、李庄的老板、北京康
达律师事务所主任傅洋，透露了一个关键信息：早在李庄案沸沸扬扬、重庆模式还如日
中天的两年前，习近平就特意到北京的律师事务所调研，“显示前所未有的重视”----
换言之，早在那个时候，习就出手了。众所周知，李庄案是薄熙来、王立军的“滑铁卢
”。当时人们疑惑的是，区区一李庄，就算再加上一傅洋，有何能耐搬动薄熙来这座大
山？现在一切都清楚了：习的出手，才是重庆模式由盛转衰的关键。其时机选择之妙、
切入之准，令人叹为观止！
习出手的奥妙在于，以他的身份，不需要大张旗鼓，不需要疾言厉色，他只是用一种含
蓄的方式，表明了自己的态度，让他选择的一些人看到了他的这种态度，让那些愿意传
播的人自去传播，结果就在官方、民间齐齐吹响了“倒薄”的“集结号”。
就民间而言，或因为观念，或因为利益，不少人“苦薄久矣”。但薄当时是一座大山，
以其份量之重，在中国还没有过被体制外的力量推倒的先例（文革时除外）。“恨薄”
的人，对薄亦无可奈何，只能骂几声出气。现在，储君的态度让大家看到了希望，情绪
性的“骂”，就转变成谋定后动的“倒”。“倒薄... 阅读全帖 |
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l******0
发帖数: 150 | 36 1）酶切产物不纯，run胶后切胶回收，转染细胞，如果是细菌的话直接做感受态，如果
是植物用农杆菌，用电击，用PEG，动物细胞可以用基因枪、电击和PEG
2）检测表达部位可以使用GFP或者GUS标记，筛选细胞使用PCR、Real-time、DNA测序、
Southern、Western blot，检测产物可以用GC-MS，HPLC，LC-MS，GC-Tof等，高通量的
可以使用Microarray，办法有很多，因需要而异
3）不明白什么是跑出来？跑出细胞核？出来还怎么表达？ |
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d**e
发帖数: 2420 | 37 “ 多基因复合性状的转基因作物是未来发展的一个方向，可以拥有耐多种除草剂、多
种害虫以及其他胁迫环境的性状，这些材料的种植，将为农民提供更多选择，降低杂草
和害虫的抗药性风险。转基因作物生物技术除草、防虫、抗环境胁迫的终极目标是尽量
微弱地影响生态、和周围环境在和谐统一中不断发展。因此，发扬光大中华农耕文明的
精华，恰到好处地将转基因技术运用于现代农业之中，对于今人和来者，善莫大焉。”
说说转基因作物近期这点事 中国农业大学罗云波
http://blog.sina.com.cn/s/blog_98ed75b501019qzs.html?tj=1
偶尔上微博，执着的反转@扑面而来，我的反应一来就是生气这些先生女士们不仔细看
文献，抓住只言片语如获至宝，脱离上下文就迫不及待为反转所用，不遗余力广为宣传
；二来在佩服反转人士对反转事业执着和热诚的同时，检讨自己态度上的相形见绌，在
转基因安全问题的风险交流中没有足够的耐心，因为精力所限也没有全身心地投入；三
则倍感加强基础生物学的科普教育，增进公众了解基因工程为核心的现代生物技术势在
必行。
尽管那些热心反转的朋友存在着一则以喜，不那么冷清，... 阅读全帖 |
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b**********l
发帖数: 431 | 38 其实最深层的也不是什么崇洋媚外，而是国内内心里都想显摆自己，都想做老大、做皇
帝的传统思想。夸洋妞漂亮的心态就是一是想泡她、二是显摆自己的英语水平、三是今
后有在同事面前夸口的借口；最深层的隐式心态就是老子最牛了，都能跟洋妞搭上话。
偶最有本事了、偶最能做皇帝了，嘿嘿！介个跟国内的封建王朝几千年统治有关，几千
年以来多少皇帝原来都不过是普通的农民而已，谁有本事谁就能当皇帝，嘿嘿！介个心
态一直延续至今，当然不是什么当皇帝了，而演变成一种暗含在内心深处的想显摆自己
、显摆自己有本事。有时屁大一点的官，逢人都要显摆的自己是一把手说了算的，嘿嘿
！介个完全是一种心态而已，不必上纲上线到心底深处的崇洋媚外，嘿嘿！ |
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j****c
发帖数: 19908 | 39 干嘛那么在意你的老美同事对中国的看法？生怕别人看不到你的成就？依然一幅弱国心
态啊
好见 |
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y*****s
发帖数: 2028 | 40 我从来没觉得上了P大就高人一等。不过这段经历确实激励我什么时候都要以严格的态
度要求自己，每件事都要做到最好。
只是没想到自己一路打拼过来，最好发现别人弯道超车，心里非常不是滋味。 |
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i*****9
发帖数: 3157 | 41 不是别人弯道超车，是你自己选了一条弯道。
说实话跳EE坑的我能理解，跳生物坑的是高中的时候太和社会脱节了吧？我们高中搞生
物竞赛保送的大学都不会选生物，这都十几年前了。
：我从来没觉得上了P大就高人一等。不过这段经历确实激励我什么时候都要以严格的态
：度要求自己，每件事都要做到最好。 |
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c*********d
发帖数: 9770 | 42 荒猫牛不耕微信号laoniu003005
功能介绍
好文分享
来源：荒猫之舞
作者：荒猫
中美贸易战告一段落，毫不意外地，咱们又赢了。不过与以往不同的是，这次美国也赢
了，是双赢。据报道，咱们答应了美国减少贸易逆差的要求，所以美国赢了；而因为要
减少贸易逆差，中方将大量增加自美购买商品和服务，这样可以满足咱们不断增长的消
费需求和促进高质量经济发展，所以咱们也赢了。
但让我感觉不可思议的是，这么好的事情，为什么一直不做呢？为什么要在美国政府的
逼迫下去做呢？是因为没有想到？那岂不是说那些人能力低下？是因为想到了而不做，
那岂不是证明了那些人很坏？
而且在美国高调启动贸易战之初，咱们是抱着多大的决心，宁为玉碎不为瓦全，一定要
打赢的，一定要粉碎美国人阻挡咱们大国崛起的阴谋的。当美国提出500亿的清单时，
咱们针锋相对；当美国提出1000亿的清单时，咱们继续应战；而当美国把清单的总价提
高到2000亿的时候，一夜之间，美国就不是阻挡咱们大国崛起，而是有利于咱们大国崛
起了。美国的要求原来是有利于咱们的发展，而不是遏制咱们的发展了。我恍然大悟：
原来以前的针锋相对，是用的激将法，是为了刺激美... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 43 日本知道自己啥都不是 所以是个感受态细胞 transfection 最容易
而中国自己文化太多 历史太璀璨了 就像一个盘长的满满的细胞 再也转不进去了 |
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发帖数: 1 | 44 而每次subculture的时间是200-300年
subculture 完的细胞就会生机勃勃，处于感受态，可以接受新鲜质粒转染，不断适应
外界变化，
最近一次接受的质粒叫做伪社会主义 表达载体是科学社会主义，但是overexpress 出
来的却是麻痹的封建专制官僚资本主义
生物的同学说对吗，
我发现这世界上万事万物都是相同的 |
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发帖数: 1 | 45 发信人: lubbock12 (非老非小将), 信区: Biology
标 题: 中华文明这盘细胞的生命力就在于可不断地subculture (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 17 22:04:07 2018, 美东)
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: lubbock12 (非老非小将), 信区: Military
标 题: 中华文明这盘细胞的生命力就在于可不断地subculture
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 17 22:03:29 2018, 美东)
而每次subculture的时间是200-300年
subculture 完的细胞就会生机勃勃，处于感受态，可以接受新鲜质粒转染，不断适应
外界变化，
最近一次接受的质粒叫做伪社会主义 表达载体是科学社会主义，但是overexpress 出
来的却是麻痹的封建专制官僚资本主义蛋白
生物的同学说我说的对吗，
我发现这世界上万事万物都是相同的 |
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f******t
发帖数: 7283 | 46 Camaro V8版本的自动档版本还有一个比较unique的功能，就是假如ECU判断当前行车状
态不需要太多功率的时候，会自动deactivate其中4个气缸，这时候车子就相当于用一
个4缸的发动机来驱动。当你要急加速或者ECU判断需要增大很多功率来行车的时候，会
自动重新activate那4个汽缸，车子这时候就是真正地用V8发动机来驱动。
这个功能的目的是为了省油。但代价是它比手动档的V8要小26马力和10 lb-ft的扭矩。
自动档的发动机代号是L99，手动档发动机的代号是LS3。自动档的发动机红线仪表板上
来看是6200到6300转那样子，但实际上你去不到那里。用1档来试就会发现到6000转的
时候ECU就会自动断油，所以就算你floor gas，也是6k rpm就自动换档的。
当恒速前进的时候，你突然踩油门急加速的时候，车子会有一下很猛的jerk；当你
floor gas加速之后松掉油门的时候，车子也会有一下同样很猛的jerk，以至于让坐在
副驾上的dealer在这些时候身子都要比较大幅度地晃动一下（他不肯靠在椅背上）。这
让人觉得不是很完美。我觉得原因之一是transmiss |
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a***g
发帖数: 2761 | 47 人家估计也是挺费劲才能争取到这个offer
大家说能给她mathc的package，可是人家认可不认可，这是各人认可的问题。再说
google如何如何烂，不能否认就是它确实是不少人的dream offer
而且这种事搞大了，也未必是第一份工作这么简单。所以要往外捅的筒子最好站短问问
yy1987mm的意见。
再恶意一点猜想，万一mm的offer黄了，难道还真指着版上给match她的offer啊，人家
心里不知道可能要有多煎熬。
大家快意恩仇了，yy1987mm要是觉得受了无妄之灾，这也是很不好的。
这事其实还得在意一下yymm的感受，比较好。 |
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d********0
发帖数: 3743 | 48 不不不，可能我没说清楚，并不是觉得被名人传记愚弄了，名人传记看完以后确实是小
时候模仿，长大
仰慕，然后觉得世界上有这些事，这些人，成功的人多有相似，失败的人各有不同，开
阔下视野，蛮好
的！区别只是小时候把自己看进去了，长大以后更多的是个旁观者～
我说的是那本育儿书的模式，从小就看这种模式的书，有点像思想品德的课本，呵呵。
比如说主题，要
做个拾金不昧的好孩子，具体事例就是来了个三好学生，少先队员啥的，捡到钱，交给
老师，老师表
扬，然后告诉大家，他是好孩子，要向他学习。这是给小孩看的，简单易懂啊，便于模
仿，我能理解。
但是育儿书不是给家长看的吗，那就刨析一下这些表面现象之下的东西。比如小孩的动
机，小孩的心
态，以及小孩得到表扬的心理活动可能等等等等啦～ |
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m********3
发帖数: 132 | 49 先说个人基本情况
男27岁，来美四年（2年master+2年工作），今年年初归魔都一MNC,石化行业，基本工
资四十万，在美国的时候是中部农村，工资加奖金8万多刀，无绿卡，中国国籍
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1. 回国手续。魔都办理教育部学历认证总耗时2个月，据说北京办只要1个月。办理落
户耗时半年，需要的材料不复杂，流程也简单但是就是要等，申请的人实在太多，每次
去服务中心都要排队3小时左右，后来直接是50元叫快递去排队等号差不多到了自己才
去。外面有中介可以包办所有程序，号称只要2个月，收费5000，没有尝试。
2. 住。公司在人民广场附近，租了离人民广场8站地铁的小区内一套小两室，75平米左
右，租金4200。小区环境不错，有健身房游泳馆等等（当然没有后院花园麦田），走路
到地铁5分钟。每天地铁时间20分钟，door to door大概30分钟，1号线早上八点半以前
很挤，过了8点半基本无压力，好在公司时间灵活，10点之前到都可以。房价依然很高
，中环以内35000往上，外环周边基本也要30000，再远的没有看过。我租的这个小区
32000左右一平米，地面产权车位25-3... 阅读全帖 |
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