i****e
发帖数: 1527 | 1 PCR好多样品，96空板加样的时候需要集中注意力，就是这样，有的时候还会出错。
请问各位有什么好的小窍门，能够加样快又不会出错呢？
多谢！ |
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Z******5
发帖数: 435 | 2 可能我表述的不完整，不清楚，还是重新说一次。
两个样品--实验组&对照组， 两对引物--目的基因和内参， 假设每个只做一管，不用
做重复，那么最后是4管反应体系。加样顺序有两种：
1，分别加一个2x的 实验组cDNA，qPCR MIX, Dye，H2O 和 对照组cDNA，qPCR MIX，
Dye，H2O， 然后再分别分装成两管，最后分别加引物。
2，分别加一个2x的 目的基因引物，qPCR MIX, Dye，H2O 和 内参引物，qPCR MIX，
Dye，H2O， 然后再分别分装成两管，最后分别加cDNA。
我觉得1更合理，但是很多kit的protocol上是最后才加cDNA。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 3 大家都过虑了。
模板（样品、cDNA）加得一致不一致，其实没那么重要。精益求精当然好，但RT-PCR是
个非常敏感的实验，duplicates或triplicates之间Ct值互相吻合的程度很低（相对于
其他定量试验而言，比如ELISA）。一般情况下，duplicates的Ct值相差0.5就可以容忍
（有的实验室可能要求0.2，我在此致用0.5来举例）。那么这个0.5是个什么概念呢？
那就是2^0.5，或者说根号2，也就是1.4。这两个duplicates，其中一个比另一个高40%
，这样都可以容忍。
你加模板的时候，假设加5ul。140%就相当于7ul。你想想看，谁加样的技术能差到这个
地步？所以说，模板加得是不是一致，并不重要。Ct值的偏差来自于其他试验条件。
那么引物啊、buffer啊、原料啊（dNTP）、酶啊等等的重要程度如何呢？我不想展开太
多。简便起见，我只说说引物和master mix（就是buffer，原料、酶、荧光染料的混合
物）。在对数扩增曲线（LOG VIEW）中，模板的多少主要影响x轴截距；引物的多少主
要影响平台的高度；master mix的特性主要影响斜率（... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 4 在 triplicate里面加1 ul cDNA, 加样误差影响比较大. 如果加1 ul primer, 误差其
实没啥影响.
40% |
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c******r
发帖数: 3778 | 5 我觉得先加样容易cross contaminate啊？ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 有人可以更加明确的告诉我假设加样非常准确的话
最后加引物和最后加模板两个到底有什么不一样么？ |
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f*********r
发帖数: 1233 | 7 cDNA的量直接影响x轴截距，也就是Ct值。当然影响大了。引物只影响平台的高低，跟
Ct值没有直接关系。当然就是没啥影响了。
1ul，不要说试验人员的加样技术不行，就连枪都不一定过关。唉！厂家建议的50ul，
被鸡贼的PI改成25ul，后来不断改成15，甚至10。做人不能太贪心。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 8 LC480系统上一直用20，后来新来的博后建议改成10，测试了一下效果也还能接受，就是
SD明显大了不少，尤其是实验员负责加样的结果，经常惨不忍睹。后来换成了机器人情况
就好多了。对自己的枪和手比较有信心的话，10ul体系确实没什么问题 |
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b******n
发帖数: 4225 | 9 PCR的话可以考虑搞一些indicator
比如很多master mix里面有loading dye（绿色的）
你可以搞无色的master mix，
然后单独搞那种dye溶解在水里，用这种含dye的水去溶解你的DNA样品
加样的时候哪个变绿色了一看就知道 |
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q*******8
发帖数: 768 | 10 本科在遗传实验室做过一段时间，他们没有排枪，加样速度那个叫快！！！速度是要练
的，至于防止出错一般就用左手手指盖住前一个管子这样，反正PCR，不是蛋白质，也
不是LCMS，手指盖盖也没什么大问题，另外就是那个LS大家说的枪头盒对应。。。我现
在做PCR还是延续这个方法，不过他们最后加TAQ好像，就点在管壁上，然后用石蜡油一
举冲下去。。。这条被我遗弃了 |
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q**********0
发帖数: 335 | 11 请大家推荐一个用于96孔板的加样并作系列稀释的仪器，主要由于快速的药物筛选试验
。谢谢！ |
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h******t
发帖数: 10 | 12 我做过，96 孔板每个孔的primer 和 template 都不一样，不能上排枪，加的想撞墙。
我一般都是先一次加template，加完了再加 primer，然后别的。 比如加template 的
时候都加在每个孔的左下方，加完了看一下，然后primer 加在右下方。如果东西太多
，加过一轮就把液体弄到板子的底部去。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 13 假设两次加模板的量分别是X1和X2，得到的Ct值分别是Ct1和Ct2，
那么delta Ct= log（X1/X2，2）
假设加模板的误差是1%，简单点，就是你一管加了5ul，另一管加了4.95ul， 那么
delta Ct就是0.0145， 这个误差肯定是可以接受的；
但是假设加模板的误差是1/10，就是你一管加了5ul，另一管加了4.5ul，那么delta Ct
就是0.152，这个误差还是不算小，但也还算可以接受。
我想即使对于菜鸟而言，加模板的误差也不应该比1/10再大了，所以我还是收回我的问
题算了，不过很感谢各位的讨论。
我还是菜鸟，自己勤快一点，早算一算就好了。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 14 大家做qRT-PCR的时候，一般是最后加模板还是最后加引物？
我觉得为了使定量准确，应该先加模板，然后分装，再分别加引物。
因为决定Ct值的是模板量，引物是过量的，先加模板分装后再加引物能够保证内参和目
的基因所使用的模板量差异达到最小。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 做相对定量的话当然先加引物，否则的话，PCR的条件就很不一致了，产生的
曲线斜率也不一样（这个和过量已否无关）就很难在不同的模板之间比较了。
而且我不理解你这个先加模板的说法，因为我们一般都是比较不同模板的，
怎么可以先加模板呢？除非你是要做同一个模板里面不同基因的绝对定量，才有
这个选项。 |
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M****m
发帖数: 2142 | 16 我是引物相同的都先混在同一个1.5 ml管子里，其实也就是俩管子，一个是
housekeeping gene another one is the target gene，然后按模板在分出来，一般
technical control，就是同一个模板3个重复，96 well也就是32个小管，16 each for
the two genes，然后模板加3 ul，但是一般是做4份的量，因为分装第三个总会不够
，所以要多作出来一份。我是10 ul体系，所以就是做40 ul （36 ul master mix+4 ul
template），还有这样你模板不会只加1 ul，相对而言加的量更精确些。不知道说明
白没有。。。【 在 Zifeng85 (Zifeng85) 的大作中提到: 】 |
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Z******5
发帖数: 435 | 17 我也分特了，我的意思是比如定对照组中基因G和GAPDH的量时，应该先把模板，mix之
类的加到一起，最后分装之后再加引物。 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 18 都非常准确了,还有差别?可能就是省不省事的差别,比如样品多,扩的基因少,就先加引
物;样品少,扩的基因多,就先加模板,这样就比较省事. |
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c******r
发帖数: 3778 | 19 应该可以做multiplex reaction
GAPDH是可以做所谓的internal control的。就是说，在同一个pcr中，同时run两个甚
至两个targets，其中一个是control，另外一个是要测的基因。
这个internal control的目的有两个，一个是quality control，就是保证这个
reaction没有忘掉任何东西，没有加错任何东西等等。另外一个目的是loading
control，assumption就是两个sample中的GAPDH是不变的，换句话说，要测量的是在同
样量的GAPDH下，要测的基因在处理前和处理后有无变化。
为了达到这个目的，最好是run multiplex。这样才能保证测到的GAPDH和G之间是来自
确定的同一个loading量。
另外一个run multiplex的原因是统计的原因。如果分开run GAPDH和G，那么
triplicate之后会得到三个G的量，和三个GAPDH的量，而这六个量之间没有一一对应的
关系。就是说不能用G1/GAPDH1，G2/GAPDH2。。。。而只能用G的平均值/GAPDH的平均
值。但是... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 20 无论如何不建议使用1ul这样小的模板量，误差太大，我这里用机器人上样误差都有20-
30%，我猜想手工加之会更多吧
一般20ul的PCR体系，模板我使用4ul/以上（cDNA的话可以稀释），如果是sybr的话我
甚至用8ul，基本上模板造成的误差在10%以内了，再有triplicates基本上就消除影响了 |
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Z******5
发帖数: 435 | 21 用比较细的marker笔分别在第三列后面、第六列后面、第九列后面和第四排下面划线，
将平板分成8个区域。然后上样的时候对应上枪头的位置，这样一般都不会错了。
其实厂商完全可以在出场的时候用黄色塑料标价一下这些地方。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 22 同学，你这个连term都乱用啊
模板是说template，就是你的cDNA。
你的例子中必须按2做，1有systematic error，你看不出来？
你的目的是比较Con和Tre的中以GAPDH做reference时候G的区别。所以是比较模板的区
别。
因此你需要把没差别的东西都一同混合，减少因为这些东西差别引起的系统误差。这里
面包括：MasterMix，Dye，水，所有primers等等，就是除了你的cDNA之外的所有东西
。然后分装到PCR plate上。然后把cDNA直接加到你的plate上，这样你的每一个well直
接的差别就是你的cDNA的差别，不是primer的差别。
另外，其实，你可以做one-step RT-PCR，定量更准确。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 23 可是他明显不是那个意思啊，他是想把template 先加上去，然后再加不同的
primer. 所以他这个不是为了做3-replicate |
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Z**********g
发帖数: 222 | 24 sun姐可能误解了LZ的意思了，LZ是说对于同一模板（比如control的cDNA）,假设要扩3
个基因，又假设每个基因3个replica，就是9管，这样先配9倍体积的1X mix,包括
Mastermix,dye,H2O,cDNA,然后分装成9管，每三管分别加入1个基因的primer；同样对
treated的cDNA也一样。
然后有人说这样就产生了由引物带来的系统误差。我的问题是如果最后加入模板，由
pipeting所产生的误差叫什么误差？如果由引物带来的系统误差都足够大到不能忽略的
话，那么可以想象，由最后一步加入模板所产生的这种误差会大到何等程度。这样反而
最后加引物更为准确了。
不过如果最后加引物，对于同一模板同一扩增基因的replica而言，似乎就没什么意思
了，感觉这种replica目的是要测由所加引物所带来的差别。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 25 同意你这个说法，哈哈。 我就是要检测对照组和实验组中10几个基因的差别，所以就
先加模板了。 |
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d*******j
发帖数: 64 | 27 周围实验室有robot可以借用的话，可以考虑用robot加 |
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q*******8
发帖数: 768 | 28 好吧 我知道这样是不严谨 （当然手套还是要带的），，，不过样品都加到底部，也不
会有液体翻到上面来。。。而且即便是盖子，从口袋里抓出来的时候也不能保证不碰到
手套么。。。 |
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N******n
发帖数: 3003 | 29 [37;1m【 以下文字转载自 [+green]shelly2003 [+black]的blog 】
【 原文由 [+green]shelly2003 [+black]所发表 】[+reset]
【 以下文字转载自 [+green]S_LifeScience [+black]讨论区 】
【 原文由 [+green]Thrush [+black]所发表 】[+reset]
一、前言
原先我是准备等到毕业的那一天，痛痛快快地哭过了之后，一口气写掉这篇文章的。其实
一直在零散时间打腹稿，差不多已经煲熟了。刚才有同样读博士读得凄凄惨惨切切的师兄
表示期待，于是一横心决定现在就写了。何况，早点让更多还没上博士这条船的弟妹们看
到，提醒他们读博要谨慎谨慎再谨慎，能多挽救一个像我们哥俩这样不是读博的料的孩子
，也好。
文章原先是分八篇发表的，现整理为一整篇，每一部分加上原先的标题。
有几点要说明的：
1.或许有人嫌太长了不想看，或许我的观点片面甚至偏激，或许我的经历太特殊而不具备
代表性。但是无论如何，请点进来看的每一位想要读博士的朋友，还包括尚未高考的小朋
友和他们的爸妈们，切记，在做出选择之前做... 阅读全帖 |
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b*********s
发帖数: 5382 | 30 ☆─────────────────────────────────────☆
dexter22 (dexter22) 于 (Tue Jan 4 13:13:12 2011, 美东) 提到:
先试试能不能贴上图
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dexter22 (dexter22) 于 (Tue Jan 4 13:22:01 2011, 美东) 提到:
粉底的正宫永远是CPB，用过CPB后，啥粉底都素浮云
春夏秋是光润，秋冬偏干的时候就上亮润
光润基本上是最接近完美状态的粉底，老版其实更好，清透，遮瑕，关键是持妆持久，
越出油越自然。老记得08年除夕第一次用光润，刚上脸时没觉得有什么特别还以为被骗
了。出去吃完年夜饭拍全家福时，整张脸上光彩照人啊....
新版的旋转光润稍差一点点，但就是稍差一点还是可以傲视其他任何品牌的粉底。CPB
是也是我用过的唯一不会暗沉的粉底。
现在亮润用得比较多，秋冬它比光润要保湿。其实用它来搭配CPB的隔离更好，润白持
久绝对不会脱妆，越用皮肤状态越好，但CPB的隔离极白而且偏干，要求在... 阅读全帖 |
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t******n
发帖数: 2939 | 31 ☆─────────────────────────────────────☆
smoll (winter) 于 (Mon Aug 29 23:14:36 2011, 美东) 提到:
表弟大学毕业， 刚工作两年，自己才五万块人民币存款，月工资7500， 谈了一个女友
，有半年了， 正在谈婚论嫁。 其父母（ 我姨和姨夫）对女方没啥太深入了解。
他们家里早就在运作托人买一套优惠房，能便宜20万。 建筑面积110 平米，110万整。
房子挺好，精装修。但必须全款付清
他家老两口全部存款也就不到一百五十万。这次正赶上觉着孩子也快到了结婚年龄了，
就准备把这房子买下来
现在问题来了，我姨和姨夫的意见是户主写他们老两口的名字， 房子给儿子做婚房。
女方代表女方家长提出房本上要写我表弟和女友的名字。说这样省了以后赠与时候的税
费。而且给女方安全感。他们表示婚礼和家电的钱女方家里出。
我姨和姨夫考虑了好几天决定拒绝这个要求，还是准备房本上只写老两口名字。于是闹
开了，我表弟女友说三道四，甚至要作势和表弟分手。我表弟也和父母赌气。竟然试图
搬弄我父母去劝说我姨和姨夫 ， 他不知道我父母更是反对... 阅读全帖 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 32 ☆─────────────────────────────────────☆
timeonly (圆满) 于 (Thu Dec 23 15:28:05 2010, 美东) 提到:
发信人: desesperado (Estoy), 信区: Military
标 题: 方舟子谈蜂蜜：基本上是高浓度的糖
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 23 12:11:10 2010, 美东)
http://discover.news.163.com/10/1223/10/6OJ4ABLE000125LI.html
核心提示：方舟子认为用人工的方法，可以制造出一种与蜂蜜一模一样成分的东西。其实蜂蜜并不神秘，基本上就是高度浓缩的糖。蜂蜜除了水分，剩下的几乎都是各种各样的糖。蜂蜜的成分会有变化，但大同小异。
中青在线-中国青年报12月23日报道 什么是蜂蜜呢？这个问题似乎很简单，是蜜蜂采集花蜜酿造出来的甜味物质。蜜蜂把花蜜吸到它的第二个胃 ——“蜜胃”里面，在那里进行消化（让花蜜中的蔗糖大部分转化成果糖和葡萄糖），回到蜂巢吐出来，让水分蒸发、浓缩，这样，原来
含水分大约 80%）... 阅读全帖 |
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p***y
发帖数: 18037 | 33 Otafuku 三样美味莫错过
世界日报 文∶郑丽园
●谈到日本料理，人们脑海里立刻浮现几片刀工完美无暇的美丽生鱼片、及颇能启动味
蕾的各款寿司，但难道日本料理就只有这些吗？就以日本著名酱料公司Otafuku为名的
小吃店Otafuku为例，就至少能吃到有别于生鱼片及寿司的另外三样美味呢！
位于E 9th St的Otafuku，店面袖珍有如曼哈坦的鞋盒，三名穿著T恤式制服的员工，很
有效率地挤在狭窄厨房内，围著烹烤章鱼烧(takoyaki)的模具，忙得不可开交，由于它
烘烤费时，再加上客人们亲眼见到这三名说日文的厨子现点现做，就是想快也快不起来
，约莫七、八分钟后，终于等到一份六个的热腾腾章鱼烧丸子，外皮脆脆的，咬下去内
馅软绵绵，再加上柴鱼薄片及Otafuku最在行的酱料，口感可谓一极棒，难怪队伍就是
再长，也有人愿意耐著性子苦等。对了，别忘了在章鱼烧上加柴鱼及酱料哟！可惜
Otafuku只有立食空间，门口又只有一张寂寞的小凳子，若不在乎形象，就加入大夥，
站在路边囫囵吞好了(以它的美味，值得放下身段啦！)，要不，像孩提时代边走边吃，
又何妨。
店里的第二样美味叫Yakisoba— |
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s********n
发帖数: 26222 | 34 http://www.shianwei.com/pages/products/WO.html
上海派坤生物工程有限公司出品
食用植物油经高温加热和反复使用后将会产生某些极性物质（如丙稀酰胺、多环芳烃
、醛基和羰基等物质）。地沟油中这些物质的含量很高，并且化学结构与原植物油相近
，一般提炼处理方式不太容易将这些物质清除出去；同时，地沟油熬制和精炼过程中也
会产生某些极性物质，因此极性物质能较真实和全面的反映油脂的劣变程度（劣质油）。
地沟油中存在的极性物质不是指某一种物质, 而是指具有一定极性的一类物质, 确
切地讲应称其为极性物质组合（统称为地沟油极性标志物），这些极性标志物在“高效
薄层色谱”中会表现为明显的拖尾斑。当测量某一油品有明显极性组分“拖尾”现象时
，即可判断其为劣质油，可根据进一步调查取证来确定其是否是煎炸过的油，或经过提
炼仍未能将极性组分清除干净的地沟油。
地沟油立可读系应用“高效薄层色谱法”原理构建的食品安全检测试剂盒，属于“
立可读”类型现场检测产品，针对地沟油极性标志物进行定性检测。具有操作简单、方
便、快速等特点，并可通过肉眼直接判读结果，... 阅读全帖 |
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h****d
发帖数: 1420 | 35 不少在哭求美国干涉军啊。打酱油的也不少。 哈哈
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Barack Obama
557 comments
陈学峰's profile photo
陈学峰 - 这是什么东东？
11:12 AM
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Turbidsoul Chen - sofa?
11:12 AM
yuming xie's profile photo
yuming xie - wow
11:13 AM
叶子义's profile photo
叶子义 - 沙发
11:13 AM
童漢令's profile photo
童漢令 - 前排吗
11:13 AM
Rugger Ducky's profile photo
Rugger Ducky - So it is clearly going to be Obama/Biden eh?
11:13 AM
Hai Yan's... 阅读全帖 |
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G**W
发帖数: 1865 | 36 女儿惨遭杀害 佛力加持重轮回到母亲身边的见证 ZT
文章原名：心如凄冷风吹叶，身似苦海雨打萍—— 我见证的轮回
作者：佚名 请知情者請告知原作者
芸芸众生在出生的那一刻就注定了死亡的结局。因而，死亡便成了司空见惯的常事：人
们往往对不相干的生命的死熟视无睹；对自己挚爱、亲朋的死虽曾心痛，而后仍旧是麻
木，直至忘却；等到自己面对死神狰狞的面孔，虽感措手不及、惊心动魄，却也无能为
力。黄泉路上无老幼，生命无常——不知道自己什么时候死，在哪里死，也不知道将以
怎样的方式死。
这是我在不满九岁的女儿突然惨遭不幸猝然离世后，才有的最切肤的体验。
也就是从那时起，我猛然醒悟，从而走上了寻求解脱的路。
或许是宿世的善缘成熟，一九九一年几乎是在没有任何外缘影响的情况下，我突然萌发
了皈依信仰佛法的强烈愿望。我对六道轮回有着与生俱来的信奉，而那时我所能理解的
佛，是局限在我身心之外具有诸多功德的，从其可以获得庇护的圣哲和最高级的神灵。
但我始终坚定地承认他的存在。
从当时仅能读到的《觉海慈行》和《礼敬佛陀》两本小册里，我了解到佛法的最大殊胜
是引导众生脱离轮回。佛法可以使死亡变成一件轻松的事，这使我产... 阅读全帖 |
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s**g
发帖数: 264 | 37 生活舒适加浪漫？海外生活被严重误读八件事(图) Local Access打往中国电话卡1.3
￠/分种
文章来源: 新华网 于 2010-11-05 09:15:08
敬请注意:新闻取自各大新闻媒体，新闻内容并不代表本网立场！
生活舒适加浪漫？海外生活被严重误读八件事(图) 新华网
近期，国内又掀起了一轮移民热，甚至有人比较在北京买房和移民海外哪个值的问
题，感觉目前海外生活的层面有些是被严重误读了。比如说：
1、国外工作机会一大把。
现在很多人让孩子在大学阶段出国留学，很大原因是因为国内大学生目前的就业难
问题。但是看目前美国加拿大的就业机会一样不容乐观，尤其是国际学生就业更是难上
加难。感觉过去我们学政治课说资本主义经济危机的周期性，现在有切身的体会。在经
济危机的情况下，特别多的人会失业。有些中坚力量如果是在国内工作，不管是国企还
是外企，基本都不会受到失业的打击，但是国外就不一样，很多人在一辈子的工作经历
中会有多次的失业机会。这一点，没有足够的心理准备是不行的。
2、国外老百姓都很有钱。
最早人们对于海外生活的印象，就是遍地是黄金。我不知道几十年前美国是不是这
样，... 阅读全帖 |
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z**********e
发帖数: 22064 | 38 我之所以被邀请到这里来讲话，可能是因为我以前写过一篇文章：《中国人应该首
先学好中文》。那是2008年，为了迎奥运，媒体大肆宣传学外文。打开电视，在记者的
诱导下，街头各行各业的百姓似乎都在积极学外文，连在公园晨练的老大妈也说学了外
文便于出国探亲云云。与此同时，电视的字幕充满错别字，广告乱改成语成风，所谓“
历史剧”中半通不通的对话，人物的称谓混乱：称对方父亲为“家父”，自己的妹妹为
“令妹”，把自己家叫做“府上”等等，不一而足，惨不忍睹。所以我有感而发写了那
篇文章。
现在似乎忽然走到另一个极端，强调学中文、弘扬传统文化了，就要压缩外文，在
高考中降低外文的分量。似乎学中文和学外文互不相容。我必须首先声明，我主张学好
中文绝不是与外文相对立，也与现在以传统文化抵制所谓的“西化”无关。更不赞成那
种让小孩子穿着古装读《弟子规》、《三字经》之类的做法。现在讲讲我对学中文的看
法，并且与大家分享一下我自己学中文的经历。
中国人为什么要学好中文？
我们每个人都是用母语思考的。一个人的文化底蕴和他的母语的程度有很大关系。
一个中国人除非生长在外国，从小就学那一国文字，自然就以那一国的文字为母... 阅读全帖 |
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Y**u
发帖数: 5466 | 39 ☆─────────────────────────────────────☆
shaoshao1 (shaoshao) 于 (Wed May 2 08:36:23 2012, 美东) 提到:
再说一个秘密，就是在上面那个基础上，继续往下破！
（要先破上面的链接疑问）
那众生和众生界都是俺的业力化现，也就是俺的妄念化现，那那那，难道这个世界就只
有俺一个人？？？
难道，诸法有我？？？？有俺这个“上帝”？？？？
来了来了，别急：
“我”也不存在！！！！诸法无我！！
“我”也是因缘众生的无明妄念！！！！！
（注意到没！！！前面唠嗑唠的是因缘众生是业力幻化，是俺自性化现，现在倒过来说
俺是因缘众生的妄念加持出来的。因为有这样的因缘众生，才有这样一个我，这种互相
依存的关系，就是空性！！！！
所以海涛法师在许多视频里在反复的说空性就是我和众生一体我和众生互相联系，不是
独立的存在。由于海涛法师一般是在讲世间法，所以他每次都只是轻轻一语带过，几乎
注意不到噢。（海涛法师是天台宗四十七代衣钵法脉，天台宗是什么宗？天台宗是最早
的禅宗！！！海涛法师是个接衣钵的人，他怎么可能不懂这些，他那... 阅读全帖 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 40 ....不是纠结这个测不测序的问题
不知道是不是我原帖没有写清楚
我还提了细菌X的endogenous plasmid，有这个origin的
提的质粒跑胶确认过
还是一样P不出来
或者说P完了以后只有加样孔里有东西
不加酶的control跑胶加样孔里干净的
同样的master mix PCR别的东西（primer template不一样）则跑胶正常，加样孔没东
西，扩
增条带在它该在的地方
有没有遇到过这种情况的？ |
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k*******i
发帖数: 5067 | 41 不光美国白人， 很多在美国收教育的其他国家人， 数学也很差的。
实验要用20ml 试剂。 我叫我的tech 配。她是9岁来美国的越南人。 基本只会讲英文
。 我说你配好后， 放冰上， 我吃过饭就来加样，你多配10%， 因为加样过程中有损
耗。 说完， 我就走了。 等吃好饭， 喜滋滋的走进实验室， 一看冰上面没有管子。
隔壁台子上面， 我的tech 低着头在写什么。她看到我进来， 马上就拿着一叠纸头和
计算器走了过来。 样子很痛苦的告诉我： “20ml 比较容易配， 但是多出来的10%，
我算了快一个小时了， 不知道怎么配啊， 你看看怎么配？” 当场我就昏倒了。
还有一次， 我在店里买鞋子。 儿子3岁， 第一次自己去挑鞋子， 看上了一双是出样
的， 没有新的了。15 美金。 最后一双。 我去结账。 我问收银：“ 这个最后一双
了， 没有了， 这个是出样的。 我愿意买， 你看能不能给我打10% 的折？”收银一听
， 马上摇头， 说：“ 店里规定， 我不可能给打10% 的折。 太多了。 我最多最多只
能给你便宜5美金。 ” 我当场蒙了， 很委屈的点了点头， 说：“算了， 那就这样算
吧。”... 阅读全帖 |
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F******e
发帖数: 3967 | 42 【 以下文字转载自 NewYork 讨论区 】
发信人: patsy (patsy), 信区: NewYork
标 题: Otafuku 三样美味莫错过
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 3 11:26:02 2009, 美东)
Otafuku 三样美味莫错过
世界日报 文∶郑丽园
●谈到日本料理，人们脑海里立刻浮现几片刀工完美无暇的美丽生鱼片、及颇能启动味
蕾的各款寿司，但难道日本料理就只有这些吗？就以日本著名酱料公司Otafuku为名的
小吃店Otafuku为例，就至少能吃到有别于生鱼片及寿司的另外三样美味呢！
位于E 9th St的Otafuku，店面袖珍有如曼哈坦的鞋盒，三名穿著T恤式制服的员工，很
有效率地挤在狭窄厨房内，围著烹烤章鱼烧(takoyaki)的模具，忙得不可开交，由于它
烘烤费时，再加上客人们亲眼见到这三名说日文的厨子现点现做，就是想快也快不起来
，约莫七、八分钟后，终于等到一份六个的热腾腾章鱼烧丸子，外皮脆脆的，咬下去内
馅软绵绵，再加上柴鱼薄片及Otafuku最在行的酱料，口感可谓一极棒，难怪队伍就是
再长，也有人愿意耐著性子苦等。对了， |
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w****2
发帖数: 12072 | 43 【 以下文字转载自 Mao_and_Deng 俱乐部 】
发信人: wlwl12 (戒网), 信区: Mao_and_Deng
标 题: "满天乌云了千年，乌云散了您却要加罪于雷霆”
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 20 00:46:17 2013, 美东)
悲惨世界 第一卷
十 主教走访不为人知的哲人
在迪涅附近的一个乡村里住着一个与世隔绝的人。那人曾经当过……让我们立即说
出他
那不中听的名称：国民公会代表。他姓G．。 (国民公会成立于一七九二年九月二十一
日，
是由人民大众选举产生的。会议宣布法兰西共和国的成立，判处国王路易十六和王后
玛丽•安东尼特死刑。)
在迪涅那种小天地里，大家一谈到国民公会的那位G．代表，便有谈虎色变之感。
一个
国民公会代表，那还了得！那种东西是大家在以“你”和“公民”①相称的年代里存在过
的。那个人就差不多是魔怪。他虽然没有投票判处国王死刑，但是已相去不远。那是个
类似
弑君的人。他是横暴骇人的。正统的王爷们回国②后，怎么会没有人把他告到特别法庭
里去
呢？不砍掉他的脑袋，也未尝不可，我们应当宽大，对的；... 阅读全帖 |
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a*****a
发帖数: 286 | 44 他说对我们的offer很感兴趣，加了这个就给我们了，一直push 我们加这个。
我们还是坚持有＂inspection contingency"的，不想承担房子有大问题的风险。可我
们自己的agent说"take it as is"不是remove inspection contingency，还是可以
inspection，不满意还是可以walk away.
这不是矛盾吗？ take it as is不就是买时啥样就啥样的意思吗？
第一次买房，不懂。请教一下大家。加了这个＂take it as is＂，我们到底少了什么
right，多了什么风险？ |
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s*******1
发帖数: 191 | 45 再说一个秘密，就是在上面那个基础上，继续往下破！
（要先破上面的链接疑问）
那众生和众生界都是俺的业力化现，也就是俺的妄念化现，那那那，难道这个世界就只
有俺一个人？？？
难道，诸法有我？？？？有俺这个“上帝”？？？？
来了来了，别急：
“我”也不存在！！！！诸法无我！！
“我”也是因缘众生的无明妄念！！！！！
（注意到没！！！前面唠嗑唠的是因缘众生是业力幻化，是俺自性化现，现在倒过来说
俺是因缘众生的妄念加持出来的。因为有这样的因缘众生，才有这样一个我，这种互相
依存的关系，就是空性！！！！
所以海涛法师在许多视频里在反复的说空性就是我和众生一体我和众生互相联系，不是
独立的存在。由于海涛法师一般是在讲世间法，所以他每次都只是轻轻一语带过，几乎
注意不到噢。（海涛法师是天台宗四十七代衣钵法脉，天台宗是什么宗？天台宗是最早
的禅宗！！！海涛法师是个接衣钵的人，他怎么可能不懂这些，他那是大慈悲心发现跟
众生讲东西，要先讲一般高兴有兴趣的）
那我执是什么？？？
就是俺把俺和众生分裂开！！！这样的话，就不空性了呀！
同体名大悲！！听过的八？？？？）
（快来一个疑问，众生是幻，法门是幻，既然一... 阅读全帖 |
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k*********2
发帖数: 4 | 46 是啊，我们实验室就用的SYBR safe，具体牌子没注意
非常方便啊，就是有些贵，好像一盒胶就十几二十个要快100欧元，明天去实验室看看
牌子和价格。
有一个小机器相当于电泳槽，胶是预制的一块块塑料板，各种浓度都有。
每次用的时候打开包装，把塑料胶板卡在小机器的槽上（不加buffer），去掉梳子直接
加DNA样品（不用加蓝），就可以跑了。跑的时候可以用它的uv背光直接看，跑得差不
多会自动终止（没有跑丢的危险，我喜欢）。拿板子直接照相，不会有水滴的到处都是
~~~~
最方便的是如果要回收DNA时不用胶回收试剂盒。有一种有两排上样孔的胶版，上面加
样下面加水，DNA快跑到下面那个孔时，用背光看着，当DNA跑进去的时候吸出来，真的
超方便，不小心跑过的话还能往反方向跑，哈哈
我们实验室是这个系统和传统的胶都用，这个虽然贵很多，但如果大家经常要胶回收的
话，用这个就省了回收试剂盒了。 |
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s******n
发帖数: 518 | 47 【 以下文字转载自 History 讨论区 】
发信人: shaodian (有熊), 信区: History
标 题: zz 包产到户四十年，中国农村到底变成啥样了？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Oct 21 22:23:39 2018, 美东)
包产到户四十年，中国农村到底变成啥样了？
2018-10-19 17:01
218
原作者: 许准 来自: 人民食物主权
食物主权按：
10月13日，在美国霍华德大学经济系任教的许准老师为我们带来了一场讲座，题为“包
产到户四十年，中国农村怎样了？”。本文是对许准老师讲座的文字整理。讲座中许准
老师通过批判性地分析传统官方话语对这段历史的叙述，尝试为我们还原包产到户政策
实行以来的历史真相：
★ 包产到户这个名词是怎么来的？
★ 包产到户有没有为农业生产力的提高做出贡献？
★ 包产到户是不是农民的自发运动？
★ 包产到户发生的国内国际背景是怎样的？
★ 为什么包产到户这场巨大的改革没有像国企改革一样遭遇大规模的反抗？
自1978年小岗村的十八个农民按下手印时算起，包产到户至今已有四十年的历史，但它
并没有离我们远去，它依旧对中... 阅读全帖 |
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c********i
发帖数: 638 | 48 在美国呆的时间长了后，吃上严重退化，脑袋空空不知道吃啥，而且竟然也不馋了，坐
中餐馆看着油腻劲也兴奋不起来。每天就那几样，孩子不爱吃了，现在天天要求SALAD
三明治了。天天吃生的小的受的了，大人受不了。
想想我脑子里面就这几样，不辣的是：
爆炒土豆丝，分加醋不加醋的，一定要用花椒炝锅。
煸炒四季豆
炖豆腐
煎豆腐
炒荷兰豆
炖白菜（洋白菜）
炒豆苗
韭菜鸡蛋
炒菜花
炖冬瓜
红烧萝卜
芹菜炒豆干
肉炒西葫芦
醋爆炒西葫芦
韭菜馅饺子
西葫芦馅饺子
馅饼
茄子大人偶尔蒸下凉拌，小的不吃
青蒜炒肉
糖醋白菜
肉片爆炒油菜
菜好像就这些了，如果菜一周重样两次，小的第二次午饭盒肯定不大动带回来。
带怪味的茼蒿空心菜什么的小的都不吃。
肉吗，能放肉的菜放点肉，有时偶尔给一老一小炖个鸡肉。
红烧肉孩子不爱吃，也就不做了太麻烦。
偶尔做点酱牛肉。
偶尔给爷俩做红烧鱼，煎鱼，多年没做过豆腐炖鱼了。
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网友贡献我们家也吃的：
炒饭
炒面
火锅
蒜蓉鸡翅
=======================... 阅读全帖 |
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h***e
发帖数: 20195 | 49 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: pronick (八戒～和ziwen幸福), 信区: Military
标 题: 左派的发言：全球两极分化下的中国时局——韩德强答孟加思
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 16 16:31:35 2012, 美东)
全球两极分化下的中国时局——韩德强答孟加思
来源： 大学网 作者：韩德强 时间：2012年5月16日 08:57
2012年5月4日上午，英国驻华大使馆政治处一等秘书孟加思先生前来访谈，问及当前的
中国时局及中国思想界的一些情况，我谈了自己的看法。现由赵芳老师将谈话记录整理
出来，以供关心同样问题的朋友参考。
2012年5月8日
孟加思：中国应该选择什么样的政治模式，你们左派有很丰富的研究。我想了解你们的
观点以及怎么实现这些主张?在此我想向你提三个问题。
第一个问题：你个人怎么形容自己?我最近跟杨帆老师见面，他好像把张宏良形容为“
极左派”。我估计你个人不适用于这个词。你能不能给我介绍一下张勤德、杨帆、韩毓
海、张宏良?你怎么形容这些专家的特点?他们有什么不一样?
第二个问题：乌有之乡... 阅读全帖 |
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h***e
发帖数: 20195 | 50 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: pronick (八戒～和ziwen幸福), 信区: Military
标 题: 左派的发言：全球两极分化下的中国时局——韩德强答孟加思
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 16 16:31:35 2012, 美东)
全球两极分化下的中国时局——韩德强答孟加思
来源： 大学网 作者：韩德强 时间：2012年5月16日 08:57
2012年5月4日上午，英国驻华大使馆政治处一等秘书孟加思先生前来访谈，问及当前的
中国时局及中国思想界的一些情况，我谈了自己的看法。现由赵芳老师将谈话记录整理
出来，以供关心同样问题的朋友参考。
2012年5月8日
孟加思：中国应该选择什么样的政治模式，你们左派有很丰富的研究。我想了解你们的
观点以及怎么实现这些主张?在此我想向你提三个问题。
第一个问题：你个人怎么形容自己?我最近跟杨帆老师见面，他好像把张宏良形容为“
极左派”。我估计你个人不适用于这个词。你能不能给我介绍一下张勤德、杨帆、韩毓
海、张宏良?你怎么形容这些专家的特点?他们有什么不一样?
第二个问题：乌有之乡... 阅读全帖 |
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