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z**********8
发帖数: 766 | 2 谢谢各位参与讨论!
我用我浅薄的遗传学知识为大家解释一下突变的问题.
大家说的PCR致突变大都是指做克隆时发生的点突变,做克隆时PCR酶可以导致点突变,连
接后单克隆挑出再提质粒后再测序,如果有突变,大多是这种情况.
寻找病人的基因突变不是这样的,因为每个病人做克隆是不现实的,而且很多突变不是纯
合,杂合突变如果去做克隆,没法选择挑几个克隆才合理或有可能的得到那个突变.所以
筛选病人突变时,不能用克隆的方法,而多用PCR产物直接测序,或者为了更省钱,设计好
PCR再酶切的方法去筛.
我因为是用PCR产物直接测序,这是个混合物,即时有些bp突变,不可能所有片段的那个bp
都突变,所以这就保证只有真正的突变才能被测序出来.因此,质疑PCR的朋友请不必再回
帖了.
回到问题,我有些奇怪的猜测,希望遗传朋友或懂测序的朋友指点.
1)有无可能有些肿瘤细胞出现三倍体? 有些细胞仍正常.
2)若突变细胞只是所有细胞一部分,会否导致缺失突变被测序时,两条链高低不等? 可相
差几倍吗? 一般的概念是等峰,我有些突变是这样.可还有些总是测序FASTA峰值差很多.
是否是因为突变的细胞比例低所致?
谢谢! |
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y******y
发帖数: 107 | 3 一个plasmid (A) 里面混有gapped plasmid (B)，A和B的序列完全一样，A 和 B的唯一
不同是B一条链上有一个 50bp的gap，A和B都是100 ng左右，希望比较干净的除去B （
只要切断单链区域就行了），然后做PCR扩增A （扩增区域含有B的gapped
region）。目的是希望PCR模板是从A来的，而不是B来的，谢谢。
酶切可以吗？什么酶可以专一切断gapped plasmid中的单链区域？ |
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e****s
发帖数: 1125 | 4 如果我是你，先检查下面2个问题再考虑Protease的问题。Protease也不会切得干干净
净，你应该在胶上看到略小的带才是。
1.tag有没有切下来？
Ni-column用咪唑洗一下，跑跑看柱子上挂的是不是只有小tag.
2.没Tag了，蛋白是不是沉淀了？
酶切前后的样品高速离心一下，上清和pellet都测一下。
70aa |
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b*******6
发帖数: 39 | 6 我4个月前硕士毕业来德国
一个挺好的大学 拿的是老板给的奖学金 不是国家奖学金
老板是我们这行的大牛 说实话 人也不错
刚开始的课题1个是克隆，把一个蛋白加上不同的tag插到pQE8或者pQE60的载体里面去
载体选的位点是BamH1和Hind3，片段的酶切位点用的是Bgl2（因为片段里面有BamH1位
点）和Hind3，因为要在N段和C段加上10+aa大小的tag，所以一般引物都很长，50-80bp
本来想用pQE9而不是pQE8，但实验室里面没有9，BamH1和Hind3在8里面中间就隔了1个
碱基
第二个课题是用Dpn1酶构建不同的突变株
用pQE8的那个载体死活折腾不出来，前前后后大概4个月，另外2个倒是很顺利
第一次和老板谈活是在来这边3个月后，他说我是来读博士的，不应该在克隆这种小事
上折腾，应该很简单；第二次，就是昨天，他看到我pQE8最后一次克隆的结果：仅有几
个克隆，送过去测序，要做的8个构建株里面只有一个对的，其他基本上都是在Bgl2那
一段的引物地方要么有突变要么就是缺失。然后就发火了，叫我2个月以内结束实验室
课题走人。
来这边4个月，除了开始阶段适应外，基本上... 阅读全帖 |
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n********k
发帖数: 2818 | 7 仅有几
个克隆，送过去测序，要做的8个构建株里面只有一个对的，其他基本上都是在Bgl2那
一段的引物地方要么有突变要么就是缺失。
well, could you start with these wrong ones now and just do some mutagenesis
, like you did with dpn1 ones...it would be much easier if it were due to
digestion/ligation etc...but it won't solve the problem if your fragments
are toxic or have too many repeats etc...It is a bit strange that it only
happen to your primer region in all the constructions though...if it is
toxic or due to recombination, it could happen to any regions or... 阅读全帖 |
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s********8
发帖数: 619 | 8 有道理,刚才看了看sequence,可以用的酶挺多的,还是加酶切位点吧.一开始没加是因为
想做TA克隆来着,结果没做出来,一查发现TA克隆大片段效率也是比较低的.唉唉,从一开
始就打错了算盘,还是没经验呀! |
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z*******o
发帖数: 1794 | 9 在单酶切，并且是vector不去磷酸化的情况下，多加PCR产物肯定没有问题。但这样的
条件谁也不会去做连接，vector自连的风险太高了，就算运气好进去了还有一个正反的
问题。如果是两个酶totally digested呢？原则上说vector将不会存在自我连接的风险
，同时这样的连接无论vector还是insert都是定向的高效连接。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 10 我在网上查到一些办法，比如cold PCR富集啥的。
自己试过构建野生型和突变型质粒，然后按照1:1000到1:100梯度稀释，用sybgreen扩
增检测Tm值，然后做标准曲线。 扩增片段80bp，要检测的位点在中间。 发现A到G的突
变Tm值升高了0.5度。G到T的突变Tm值没变化。 然后用梯度稀释的比例值与Tm值做回归
，能得到R方0.95的回归曲线。但是如果加上bar值，各组Tm之间其实根本没有统计差别
。同时又由于用的是ABI7500，又是不饱和染料sybgreen，分辨率也就0.5度，这个方法
也就作罢。
后来尝试在突变位点附件做定点突变PCR，制造出酶切位点（野生型能切，突变型不能
切），结果神奇的发现药物处理第二代后，细胞中积累的突变就有50%至高了，完全不
想一开始自己想象的千分之一、万分之一。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 11 LZ please try below (I) to (IV) four strands overlap PCR
your target 7kp=2kp(I)+2kp(II)+2kp(III)+1kp(IV)
if you did not know downstream any conservative sequence information
your 3' RACE can use ligation-anchored PCR
就是用内切酶
//en.wikipedia.org/wiki/Restriction_enzyme
对应的人工引物锚定long mRNA 的3'端 做人工锚定引物
i.e. by NotI it should be inserted to 3'端 5'GC---GGCCGC
from
//en.wikipedia.org/wiki/Restriction_enzyme
Enzyme Source Recognition Sequence Cut
NotI Nocardia otitidis
5'GCGGCCGC
3'CGCCGG... 阅读全帖 |
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x*****o
发帖数: 441 | 12 我之前也是用一个师兄留下的质粒,在ecoli里面怎么也不表达,测序也是对的.
后来就酶切,发现那个质粒很小,不是普通的,在ecoli里面用得pET. 后来我就把那个片
段切下来,连到pET上面,再筛选,就表达了.
不过你切下来又连的也不行应该跟我的问题不一样. 测序试试吧.
有的人走之前就是会留下很多烂东西......... |
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x*****e
发帖数: 309 | 13 haha,dATP 会不会和片段竞争T，我想也许会，但是不用担心，T4连接酶不会作用在那
种 Vect-T=dATP结构上。 我做Cloning还算顺利，有2个经验供参考：
1.只要条带单一我都是用2倍体积乙醇沉淀回收DNA，吹干后10ul溶解（用kit怎么也得
30ul洗脱，而且跑胶什么的对3'-a 多少有些影响,当然有杂带还是得跑胶回收，最后大
体积洗脱后在用乙醇沉淀浓缩一下).
2.尽可能少的加Vector片段，用高效率的感受态细胞（XL1-blue: stratgene Cat.
200249, >10e8, 如neverthink所说20 ul一个反应就足够了）, 最后也许长出的clone 少，但是阳性率很高，蓝白斑我不用好多年了。
其实，纯粹克隆基因直接加酶切位点，克隆到载体上就行，无须TA克隆。trouble shooting很痛苦，以前有段日子做克隆不顺，后来通过做各种control，发现是新换的Golden View DNA染料的问题，那东西能和单链核酸结合！！！
ditch
many |
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j*****q
发帖数: 82 | 14 酶切的plasmid不算多啊，1个微克左右。
刚开始也是觉得是没切彻底，但是有个对照的plasmid，序列很相似的，但是却切的很
干净。所以觉得是污染，但是每次都是这个位置，然后量也不算少，就怀疑是菌给污染
了，明天做个control，先把菌污染给排查一下。再看看是不是buffer2时间太长了。 |
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H*******i
发帖数: 196 | 15 质粒里面没有BsaI位点得话，可以用末端酶切BsaI构建（当然也可以尝试其他同类型酶
），这样不会引入多余序列。
如果有得话可以用bsaI方法构建包含你promoter的片段，然后用各种方法和其他部分连
起来
另外promoter不长得话也可以直接合出来然后用PCR和原来部分连起来（有些时候不太
容易，promoter 或者重复序列repeat次数超过需要，不过一般换换条件啥的总能挑到
对的） |
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x*****e
发帖数: 309 | 16 应该可以，你可以查查buffer成分，其实差不多. |
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p*****u
发帖数: 191 | 17 我是按照他们的配方配的，一下就能配个100ml |
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n****0
发帖数: 696 | 19 谢谢。不过他们buffer的成分都有点小差别，可能影响也不大，我试试看 |
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v**********m
发帖数: 5516 | 21 你是摸金校尉还是发丘中郎将？看你倒了好些个斗，粽子都被你发出来了。 |
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q***7
发帖数: 144 | 23 我建议他应该第一次用GEL回收，这样第一步就去除了绝大多数的GENOMIC DNA，然后后
面看情况。如果还是有很多的杂带，还是要用胶回收，然后再做PCR。
另外，找你wildtype allele上有但KI allele上没有的酶切位点的那个酶消化一下的
PCR产物，胶回收后再做PCR，这样去除了wildtype allele信号。
如果PCR产物不纯，肯定测不出东西来。信号就乱套了。我曾经测过不纯的质粒，都有
测序引物结合点，结果什么信号都没有（很弱的杂信号）
另外，你说的BLAST一堆位点，这可以提高一下退火温度就基本上可以解决。因为他们
是部分binding。 |
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H*******i
发帖数: 196 | 24 LZ你这么笼统的问，有问题的可能性多了去了，你应该详细写出你的步骤（包括片段
酶 载体 这些细节），现象
比如你上面提到转质粒能长，长了多少？ 效率是10^8还是10^9/ug
没有克隆是怎样没有，长出来很多都是假阳性/空载体还是什么都不长
这些你都不写谁知道啥问题啊，都只能猜，有多少步骤就能猜多少可能性出来。
另外1.5K很好连，尽管我不做TA克隆，不过3-5K的片段正常连接我也没遇到过什么大问题
你提到500做出来了，长了多少？阳性率怎么样？至少提一下吧。
要么你就用上面提到的不用酶切连接的几种策略，拿到引物后第二天晚上/第三天早晨
也足够拿到克隆了。你怕操作不熟练就用上面有人提到的infusion kit这种商业化试剂
盒也可以。这个理论上只要你的PCR没问题，转化没问题（包括你的片段载体构建不会
杀死细胞）就能做出来。 |
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H*******i
发帖数: 196 | 25 按照楼上方法
可以用BsaI或者同类酶设计酶切位点，这样对你的基因功能没有影响。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 26 这个说的在理
不过primer方面好像并没有能省什么
如果只是一个insert片段，的确两种方法区别不算大
但如果是好多个片段首尾相连，Gibson Assembly优势显而易见
特别是vector还有最终construct都比较大，很难选择restriction enzyme的时候（要
不就是要买新的很不常见的酶，要不就是某些fragment要先做mutation PCR去除要用的
酶切位点）
Scar
assembly
exonuclease |
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h*****9
发帖数: 4028 | 27 一个氨基酸的突变就可能导致受体失去功能。就别说昆虫和人E-cadherin的差别有多大
了。
Bt蛋白只是一个protoxin,要经过昆虫gut protease酶切后才有毒性。哺乳动物GI
track一是没有这个酶，二肠道没有Bt蛋白受体(无文献报道)，这是Bt对哺乳动物肠道
包括多数昆虫无毒的根本原因，而不是你说的酸降解。酸降解只是进一步导致其对人
有害的可能趋近于无。最后Bt蛋白在大米种子中的表达量仅为2-3微克/g种子重量。第
三代转基因作物含量Bt蛋白在大米种子基本不表达。有毒没毒当然要看剂量。国家标准
规定饮用水中亚硝酸盐的含量为每克水中不高于1微克。亚硝盐对人毒性比Bt恐怕远远
大于。严格测试转基因作物安全性当然是应该的。向那些无脑反转Bt的还不如去反饮用
水去。
protein |
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s******r
发帖数: 2876 | 28 张启发要是带头放弃专利，无偿贡献给广大农民种子，
那就可以让他试试。
一个氨基酸的突变就可能导致受体失去功能。就别说昆虫和人E-cadherin的差别有多大
了。
Bt蛋白只是一个protoxin,要经过昆虫gut protease酶切后才有毒性。哺乳动物GI
track一是没有这个酶，二肠道没有Bt蛋白受体(无文献报道)，这是Bt对哺乳动物肠道
包括多数昆虫无毒的根本原因，而不是你说的酸降解。酸降解只是进一步导致其对人
有害的可能趋近于无。最后Bt蛋白在大米种子中的表达量仅为2-3微克/g种子重量。第
三代转基因作物含量Bt蛋白在大米种子基本不表达。有毒没毒当然要看剂量。国家标准
规定饮用水中亚硝酸盐的含量为每克水中不高于1微克。亚硝盐对人毒性比Bt恐怕远远
大于。严格测试转基因作物安全性当然是应该的。向那些无脑反转Bt的还不如去反饮用
水去。
protein |
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e**e
发帖数: 166 | 29 25个克隆 最后一个总是有问题 不是突变就是空质粒。
问一下 KapI BamHI双酶切的质粒可以冻在－20 反复用吗？好像旧的很容易自连。
另外， KOD 和Phusion总有突变。 大家还有更好的Taq酶吗？
接着做。 我就不信筛1000个没有一个对的。 |
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w******n
发帖数: 767 | 30 完全不需要补缺口，如果总长度在2k以内，用两端引物直接批就行了，大于2k,在中间
找个酶切位点再加一对引物。看看基因合成拼接，批不出来，换换酶。
NICK |
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l*******e
发帖数: 170 | 31 那里能招博后的PI通常都是很senior的，实验室也很大（5-7人）。对，5-7人在
biopharma就算大实验室了，小实验室2人。一个实验室博后最多2人，基本1人。在
genentech做博后的最大好处是那里资源丰富，比如你做个质粒，肯定不要自己酶切酶
联，有中心就给你做了，或者在外面买。显微镜，筛选，大数据处理，都有专门的中心
。资金压力也小。运气好还有sra给打下手。博后的项目进展肯定比学术圈快。去那做
sra就算了，sra是个master级别的职位，只不过现在phd太多，genentech面试sra的都
是phd了，但一旦做上sra就被打上了technician的烙印，基本是career deadend. |
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x**e
发帖数: 163 | 32 正在做一个植物的cDNA文库构建，用的clontech的smarter infusion试剂盒，但是发现
infusion的效率极低，不知各位有没有用过这个试剂盒的经验？
另，后改用sfiI双酶切，企图连接到载体上，发现cDNA上的sfiI切点似乎也切不开，
sfiI位点序列是正确的，上到T载体上后仍然切不开。求问可能原因及如何解决？
有没有更合适的建库方法？
谢谢！ |
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n*******d
发帖数: 41 | 33 我九楼的内容指的是我在八楼提到的克隆方法的应该注意的点。
此法仅靠菌神做重组就可以，不需要额外加重组酶，不需要酶切连接步骤！
我个人本是非常enjoy实验的，只可惜目前跟ap老板观点总相左，正被老板疏远中！
：模板确实是个关键因素。Q5不喜欢太多的模板，而Taq忍耐性更强一点。不过楼主PCR
似乎没有问题。
： |
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C*******4
发帖数: 400 | 34 你PGL3酶切以后有小片段出来和跑胶纯化没有？PCR引物在5端有没有留足够的碱基？有
些要3个才能有效切开。
Q5扩增很猛，可能你3K的片段在和Vector混合的比例不对。
T4LIGASE或者它的BUFFER 里的ATP没了都有可能造成转化不出克隆。
酶切点是甲基化不敏感类型吗？ |
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发帖数: 1 | 35 楼主，我有一个不懂 的地方，可能是common sense，但是我正好不懂，不要见笑。
1.一般来说Ago蛋白C端加tag，无论是来自于那个物种，蛋白就没有活性了，主要由Ago
蛋白自身结构folding决定。文中用的几个construct，好像只有1-2个C端是没有tag的
。那么，用C端带tag的Ago作出的实验，是否有意义呢？当然，不能够排除NgAgo本身特
殊，能够tolerate C端tag，只是从预测的结构上讲，可能性很小。
有没有paper报道在Ago蛋白的C端加tag会使其活性消失或者降低？最好在这里列几篇参
考文献。因为我以前对于好几个蛋白质在C端加FLAG,GFP，都不会影响蛋白的功能，对
于Ago家族的蛋白，我不了解。
2.Ago催化酶切的核心domain实际是一个RNaseH fold，催化cleavage时应该结合双链（
无论DNA或RNA），而双链其中一个是guide，另外一个是target。我无法想象gDNA
guided NgAgo是如何切割双链DNA的。文章开始用2个guide，也许还有些道理（说不定
细胞DNA会有瞬时的单链状态）；后来直接上一个gu... 阅读全帖 |
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y****m
发帖数: 37 | 36
楼主，我有一个不懂 的地方，可能是common sense，但是我正好不懂，不要见笑。
1.一般来说Ago蛋白C端加tag，无论是来自于那个物种，蛋白就没有活性了，主要由Ago
蛋白自身结构folding决定。文中用的几个construct，好像只有1-2个C端是没有tag的
。那么，用C端带tag的Ago作出的实验，是否有意义呢？当然，不能够排除NgAgo本身特
殊，能够tolerate C端tag，只是从预测的结构上讲，可能性很小。
有没有paper报道在Ago蛋白的C端加tag会使其活性消失或者降低？最好在这里列几篇参
考文献。因为我以前对于好几个蛋白质在C端加FLAG,GFP，都不会影响蛋白的功能，对
于Ago家族的蛋白，我不了解。
----见上
2.Ago催化酶切的核心domain实际是一个RNaseH fold，催化cleavage时应该结合双链（
无论DNA或RNA），而双链其中一个是guide，另外一个是target。我无法想象gDNA
guided NgAgo是如何切割双链DNA的。文章开始用2个guide，也许还有些道理（说不定
细胞DNA会有瞬时的单链状态）；后... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 37 理论讲解：
1、基因编辑技术及发展历史（ZFN，TALEN，CRISPR，NgAgo）
2、NgAgo基因组编辑系统
实验操作：
1、靶基因选择
2、ssDNA设计合成
理论讲解：
1、基因转染技术（脂质体转染，电转，病毒转导）
2、NgAgo系统转染策略
实验操作： ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 38 独家专访：面对质疑的韩春雨
原创2016-10-18 陈晓雪、李晓明 知识分子
►韩春雨任教的河北科技大学门口。摄影：陈晓雪
内文提要：
独家专访：面对质疑的韩春雨
韩春雨NgAgo论文可重复性争议考验科学界
编者按：
5月初，《知识分子》以国际科学媒体的标准，第一时间报道依据国际科学同行
评议的学术刊物上发表的韩春雨论文以及当时多位科学家评论，并说明其是发展了荷兰
科学家的工作。此后，国内媒体和单位纷纷跟进，因为没有新的工作进展，《知识分子
》未继续报道。从网上开始有声音质疑韩春雨文章结果，《知识分子》一直保持追踪国
内外学术界最新的动态，但不依据私下匿名来源为主作报道，直到13位中国科学家公开
实名发言后，《知识分子》才有可以较为完整、公开的事实可以报道。
NgAgo实验的可重复性争议历经数月之久，至今虽有多方表态，但仍然没有迹象显示很
快会得到解决。如何在学术规范下寻找解决之道，是摆在中国科学界面前的重要挑战。
10月10日晚，12位科学家实名呼吁调查（后增加一名科学家），《知识分子》
当晚连线韩春雨，并于第二日中午赶赴河北科... 阅读全帖 |
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g*****x
发帖数: 3283 | 39 C-C bond稳定性很高，如果有能直接切C-C的酶，基本上就见啥杀啥了。 |
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g*****x
发帖数: 3283 | 40 C-C bond稳定性很高，如果有能直接切C-C的酶，基本上就见啥杀啥了。 |
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发帖数: 1 | 41 因为脂肪链不想蛋白质或者核酸有序列，没有序列就没必要有特定的内切酶 |
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t*****z
发帖数: 1598 | 43 这位朋友说得很好。克隆如绣花，没有精钢钻揽不了瓷器活。高手和菜鸟差距是大大地
。就说最简单设计酶切位点，菜鸟也能查酶的名字，但是菜鸟知道BamHI和BglII的粘端
是匹配的不？没一定经验不可能往这方面想吧？
homologous
的。 |
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b*******g
发帖数: 1309 | 44 浓缩应该用处不大。。。
主要是你要的那段 sequence 可能由于某种原因就是 酶切不到，或者容易丢失
所以可以试试其他的酶 |
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m****s
发帖数: 18160 | 45 2016年5月2日，英国《自然》杂志子刊《自然 生物技术》刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文，论文负责人的英文署名是"Chunyu Han"，这篇论文在华人生物界获得广泛赞誉。论文发表的第二天，韩春雨的名字和论文在一个名为"生物艺术全球生物医学交流"的微信群里得到了热烈讨论。生命体从受精卵开始，经过不断分裂，可分化出大约60兆亿个构建人类身体的细胞，每个细胞都含有全部生命遗传信息的基因组，所谓基因组编辑技术，就是人为来调整、改变、插入、去除、修改个体或物种的基因组序列。
http://tv.cctv.com/2017/05/20/VIDEBZRf7rQNg2Y1ExpBhpQM170520.shtml
一、学界和媒体的热议Mitbbs.com
一年前，英国《自然生物技术》杂志刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文。论文的负责人"一鸣惊人"，得到了学界和媒体给予的无限荣光。在《自然》杂志社的所属期刊上发表论文，通常表明，该科研成果走在了世界科学研究的最前沿，并有可能对未来科学的发展起到关键性作用。此消息一经媒体爆出，在站内引起站内相关专业人士的热议。
国内科研水平不得了了，河北科技大学在... 阅读全帖 |
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m****s
发帖数: 18160 | 46 2016年5月2日，英国《自然》杂志子刊《自然 生物技术》刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文，论文负责人的英文署名是"Chunyu Han"，这篇论文在华人生物界获得广泛赞誉。论文发表的第二天，韩春雨的名字和论文在一个名为"生物艺术全球生物医学交流"的微信群里得到了热烈讨论。生命体从受精卵开始，经过不断分裂，可分化出大约60兆亿个构建人类身体的细胞，每个细胞都含有全部生命遗传信息的基因组，所谓基因组编辑技术，就是人为来调整、改变、插入、去除、修改个体或物种的基因组序列。
http://tv.cctv.com/2017/05/20/VIDEBZRf7rQNg2Y1ExpBhpQM170520.shtml
一、学界和媒体的热议Mitbbs.com
一年前，英国《自然生物技术》杂志刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文。论文的负责人"一鸣惊人"，得到了学界和媒体给予的无限荣光。在《自然》杂志社的所属期刊上发表论文，通常表明，该科研成果走在了世界科学研究的最前沿，并有可能对未来科学的发展起到关键性作用。此消息一经媒体爆出，在站内引起站内相关专业人士的热议。
国内科研水平不得了了，河北科技大学在... 阅读全帖 |
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l******0
发帖数: 150 | 47 1）酶切产物不纯，run胶后切胶回收，转染细胞，如果是细菌的话直接做感受态，如果
是植物用农杆菌，用电击，用PEG，动物细胞可以用基因枪、电击和PEG
2）检测表达部位可以使用GFP或者GUS标记，筛选细胞使用PCR、Real-time、DNA测序、
Southern、Western blot，检测产物可以用GC-MS，HPLC，LC-MS，GC-Tof等，高通量的
可以使用Microarray，办法有很多，因需要而异
3）不明白什么是跑出来？跑出细胞核？出来还怎么表达？ |
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c******n
发帖数: 16666 | 48 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: mitbbs (未名空间), 信区: Biology
标 题: Mitbbs水平挺高的，纯从科学家角度质疑韩春雨
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 21 23:40:17 2017, 美东)
2016年5月2日，英国《自然》杂志子刊《自然 生物技术》刊载了一篇有关"基因编辑工具"的论文，论文负责人的英文署名是"Chunyu Han"，这篇论文在华人生物界获得广泛赞誉。论文发表的第二天，韩春雨的名字和论文在一个名为"生物艺术全球生物医学交流"的微信群里得到了热烈讨论。生命体从受精卵开始，经过不断分裂，可分化出大约60兆亿个构建人类身体的细胞，每个细胞都含有全部生命遗传信息的基因组，所谓基因组编辑技术，就是人为来调整、改变、插入、去除、修改个体或物种的基因组序列。
http://tv.cctv.com/2017/05/20/VIDEBZRf7rQNg2Y1ExpBhpQM170520.shtml
一、学界和媒体的热议Mitbbs.com
一年前，英国《自然生物技术》杂志刊载了一篇有关"基因编辑工具"的... 阅读全帖 |
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t****p
发帖数: 1504 | 49 不久前搜索自己的老乡，一个同系，充满热情的小师弟，发现他兰大生科院毕业之后，
竟然到福州大学去重新读机电一体化工程本科。
最近家里暂住一位从湖南师大过来进修的教授，和她聊起他们生科院的发展情况。她说
在8年前就引进一个特聘教授，现在的特聘教授有很多个，多年前他们就开始用双语教
学。尽管湖南师大的生源不太好，最近每年都有学生保送到清华北大中科院等。由于生
源很受欢迎，他们甚至限定每年只有前6名可以保送。
两年前跟一个年龄相仿的内蒙古大学生科院毕业的朋友聊他们班的毕业生走向，他说现
在有一半左右的同级学生已经在美国了。而我那一级的基地班，顺利拿到博士学位到美
国的屈指可数。
多年之前，我们级的学生考上中科院上海分院的不少，后来就越来越少……
本科期间，系里对分子生物学课程敷衍了事，没见过PCR仪，实验课是老师演示内切酶
切DNA，照相，全班同学在旁边看；以为基因克隆是非常厉害的技术……
我们那一级的学生汇集了很多高考成绩拔尖的学生；由于消息闭塞，基本上没有谁动过
考GT的念头；本科毕业，生态班的十几位同学基本上同时失业……
兰大生科院，再不发展，情何以堪？！ |
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e****s
发帖数: 1125 | 50 估计就是Vector自连了，不知道你有没有用Phosphatase处理过。感觉是目的基因就是
没链接上。
Insert片段多加点没坏处，你从pGEM里切出来的应该酶切的问题不大。 |
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