g***e
发帖数: 1256 | 1 EDTA这类可以络合重金属的东西应该可以慢慢从血液透析来除掉铊，只是耽搁的太旧了。 |
|
C*******r
发帖数: 10345 | 2 【 以下文字转载自 ChineseMed 讨论区 】
发信人: FBI (大成若缺，其用不弊；大盈若冲，其用不穷), 信区: ChineseMed
标 题: 警告hsfqy，你的CRH1235已经被封，不要再试图用其它ID来扰乱版面
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Feb 7 10:36:53 2015, 美东)
回答你的问题：
1. 要想讨论中医，请先自己了解一些中医再来讨论，否则不要来胡搅蛮缠。
2. 中医不治病，只治人，所以请不要再拿着西医的病名来问。我们中医真的治不了那
么眼花缭乱的病名，请出门左拐去求医问药版；
3. 青蒿素跟中医有关也好，无关也罢。中医已经清楚记载，“青蒿一握，以水二升渍
，绞取汁，尽服之”。所以跟着别人嚷嚷前，请先自己搞清楚。至于屠呦呦是不是受到
这个启发才用乙醚提取的，我们不得而知。
4.如果你又跟着脑残方舟子嚷嚷说，青蒿素很难溶于水，所以青蒿绞出来的水里面不会
有青蒿素，那么请回去再好好学一学化学。比如下面说的螯合剂诸如EDTA是怎么把不溶
于水的金属溶于水的。那么你有怎么肯定挤出来的水里面没有天然螯合剂的？
http://baike.ba... 阅读全帖 |
|
|
m*****g
发帖数: 12253 | 4 ☆─────────────────────────────────────☆
bruce (帆帆-瞬间倾心，永恒钟情) 于 (Thu Mar 8 02:10:33 2012, 美东) 提到:
看客场还是比较郁闷
尤其是对马刺 这种强队
看真人 感觉 JEREMY LIN和其他人的高度也没有电视上那么多
TONY PARKER的速度真是快 尤其是高速后的FINISH功力 超强
马刺的进攻打的很有章法 替补也非常给力
反观纽约的进攻没有章法 都是个人单打独斗
MELO虽然投中了不少求 但是 对整体打法没有啥帮助
JEREMY还是有点不太清楚自己在场上的角色 是干啥
最后要说的是 马刺的教练 波波维奇 是不是家里有事 所以要提前离场
☆─────────────────────────────────────☆
bruce (帆帆-瞬间倾心，永恒钟情) 于 (Thu Mar 8 02:11:29 2012, 美东) 提到:
rt
☆─────────────────────────────────────☆
veggie (走位飘忽) 于 (Thu Ma... 阅读全帖 |
|
M*********e
发帖数: 3153 | 5 来自主题: GunsAndGears版 - 铅中毒
REMINGTON的金蛋便宜，也是唯一我在BIG5买到的大包装
CCI MINI MAG好像包的比较好，手上沾的黑比较少
以前还琢磨配点EDTA-2Na溶液擦掉枪/弹匣上沾的铅 |
|
x*7
发帖数: 11281 | 6 我用洗碗机的那种没有什么泡沫的，
估计里面有EDTA之类的络合剂，洗完没有什么水渍
或者我们这里的水质和TX不一样
就是没有抛光以后那么亮 |
|
r*******3
发帖数: 10886 | 7 我先用水，然后丙酮，接着用浓氨水，后来还加了点EDTA |
|
h***e
发帖数: 20195 | 8 丙酮后可以用DMF煮一下，千万别用DMSO，高温会氧化
EDTA可能有麻烦 |
|
S****y
发帖数: 1305 | 9 刚刚在CVS买了一管14多刀的祛痘印胶。上面写着祛除各种情况产生的疤痕，包括痘痘。
透明的胶质，没有气味，用起来感觉还不错。不知道是不是安全，或者有没有效。
成分：
Water; Glyceryl Polymethacrylate (and) Propylene Glycol; Allium Cepa (Onion)
Bulb Extract; Polysorbate 20; Phenoxyethanol (and) Chlorphenesin (and)
Glycerin (and) Methylparaben (and) Benzoic Acid; Sodium Carbomer; Aloe
Barbadensis Gel; Juglans Regia (Walnut) Shell Extract; Allantoin; Chamomile
Extract; Disodium EDTA; Fragrance; Phytonadione (Vitamin K) |
|
w***d
发帖数: 65 | 10 完全不是物理防晒呀。。。
Cyclopentasiloxane, Water, Polyglyceryl-3, Polydimethylsiloxyethyl
Dimethicone, Corn Starch Modified, Alcohol, Aluminum Hydroxide Stearic Acid,
Sodium Chloride, PEG/PPG-18/18 Dimethicone, Phenoxyethanol, PEG/PPG 20/15
Dimethicone, Tocopheryl Acetate, Fragrance, Hydroxy-Propyltrimonium
Maltodextrin Crosspolymer, Disodium EDTA, Butylene Glycol, Glyercin,
Pentylene Glycol, Cucumis Melo (Melon) Fruit Extract, Biosaccharide Gum 4,
Thermus, Thermophillus Ferment, Lapsana Communis Flower/L... 阅读全帖 |
|
p******h
发帖数: 173 | 11 http://www.neutrogena.com/product/ageless+intensives-+tone+corr
被种草匆匆买了这个，但后来看到review,好坏参半。
主打是淡斑，去斑，平衡肤色
Retinol也就是A醇，听说有一定的刺激性，我一直没用过类似的A醇，果酸，A酸的东东
我没斑，但有豆印。不知道适不适合这产品。手上精华已经一堆了，但头脑一热还是入
了。
做白鼠之前，把成分贴在这里，请懂得mm帮忙给看看，谢了
Water, C12 15 Alkyl Benzoate, Cetearyl Alcohol, Glycerin, Dimethicone, PPG
10 Cetyl Ether, Arachidyl Alcohol, Methyl Gluceth 20, Soymilk Powder,
Behenyl Alcohol, C13 14 Isoparaffin, Salicylic Acid, Polyacrylamide, BHT,
Phenyltrimethicone, Soybean Seed Extract (Glycine Soja), Arac... 阅读全帖 |
|
i*********s
发帖数: 8706 | 12 两个产品大部分成分一样。。。
Water
Bifida Ferment Lysate
Glycerin
Alcohol Denatured
Dimethicone
Hydroxyethylpiperazine Ethane Sulfonic Acid
PEG-20 Methyl Glucose Sesquistearate
Sodium Hyaluronate
Ammonium Polyacrylatedimethyl Taurate
Disodium EDTA
Caprylyl Glycol
Citric Acid
Xanthan Gum
Octyldodecanol
Limonene
Fragrance
在此之上，兰蔻黑瓶含有：
Phenoxyethanol。。。。。。。。。。一种preservative
PEG-60 Hydrogenated Castor Oil。。不懂
Salicyloyl Phytosphingosine 。。。不懂
Citronellol 。。。。。。。。。。。不懂
欧莱雅含有：
Palmitoyl Oligopeptide 。。。防老
Palmitoyl... 阅读全帖 |
|
P****D
发帖数: 11146 | 13 Ingredients
Water, Cetearyl Alcohol, Cyclopentasiloxane, Behentrimonium Chloride,
Fragrance (Parfum), Dipropylene Glycol, Mineral Oil, Lactic Acid, Petrolatum
, Potassium Chloride, DMDM Hydantoin, Disodium EDTA, TEA-
Dodecylbenzenesulfonate, Prunus Amygdalus Dulcis (Sweet Almond) Oil,
Hydrogenated Coconut Oil, Adipic Acid, Gluconolactone, Sodium Sulfate,
Trehalose, Iodopropynyl, Butylcarbamate, Yellow 5 (CI 19140), Red 33 (CI
17200), Blue 1 (CI 42090).
product
it, |
|
u***l
发帖数: 2997 | 14 准备配点儿无水栽培的肥料，回去考古了一下游士的吃化肥文章。无意中发现了一个小
错误，呵呵。那个Hoagland Solution，里面的总含氮量是210ppm，游士直接把它当成
硝酸根的浓度，这个是不对的。这里面的硝酸根总浓度是0.011摩尔每升，ppm是重量比
，换算过来的硝酸根浓度是682ppm。按总净含氮量210ppm算，硝酸根的贡献是154ppm，
其他部分来自于铵根离子和铁络合物中的EDTA。作为论据，还是严谨些比较好。个人意
见，供参考。 |
|
T*******m
发帖数: 27308 | 15 请教寒山一个问题。 EDTA里的氮能被植物当氮利用吗？如果不能的话，Hoagland就不
应该将其算在总氮里面。 |
|
u***l
发帖数: 2997 | 16 俺也不知道。俺就是算了一下，把铵根和硝酸根加起来不够210ppm，算上EDTA就差不多
了。 |
|
u***l
发帖数: 2997 | 17 谢谢游士这么认真。那个Hoagland溶液的配方是经过多次改良的，现在的版本和最初的
有些差别。如果仔细算，其他的离子浓度也和原始配方不一样。铁离子在中性土壤中容
易水解沉淀，不能被植物吸收，加EDTA络合后就没问题了。俺当时不是对你的论证过程
有疑问，只是觉得作为论据，计算严密些比较好，呵呵。
NO3- |
|
x*7
发帖数: 11281 | 18 电池漏液，我以前用EDTA的稀溶液来擦，
其实纯净水泡泡再擦也可以 |
|
s******g
发帖数: 15854 | 19 真的，我刚才跑过去检查了那些药水的成分，都是很普通的化学试剂，有一个就是EDTA
。。。比西黑白的药水复杂点，但是有限 |
|
|
i*****n
发帖数: 3168 | 21 普通重金属中毒，可以打EDTA点滴，中学就教过了的，不知道对于这个铊有没有用。 |
|
c*u
发帖数: 916 | 22 夸张了吧，比如EDTA的结构式是大学才学的。我觉得对于中国高中生来说，也就物理的
题目好做些， |
|
发帖数: 1 | 23 Single stranded DNA is much more difficult compared to double-stranded
plasmid DNA in terms of transformation.
Try these single stranded DNA transformation tricks.
1) transformation done at a low pH of ~6. Low pH significantly reduces the
nuclease activity of cutting single stranded DNA.
2) increase Mg++ to 1 mM. Mg is a conformation stabilizer of DNA and RNA.
3) No EDTA in the transformation system because it deprives Mg++ from the
buffer.
Han is a seasoned scientist with expertise on nucleic ... 阅读全帖 |
|
d*********2
发帖数: 48111 | 24 因为有氧气。 真空是为了防氧化保鲜。
其实小资很有意思的一点， 鄙视罐头什么的。
其实罐头里的防腐剂非常少。
倒是各种小资饮料， snacks里防腐剂非常多， 他不写防腐剂， 写苯甲酸钠。
或者稳定络合剂EDTA.
小资们$3-5一瓶水喝的不亦乐乎。 |
|
d*********2
发帖数: 48111 | 25 老美的工业化食品确实很不安全. 我看很多小资食品, ingridient上这organic, 那
organic, 最后来了俩次, 一个EDTA, 一个山梨酸钾.......
好吧, 这些添加剂大多毒性不大, 不过毕竟也不是天然产品. 还有各种色素, 涂层的滥
用. 加工肉食品里的亚硝酸钾, 植物油的萃取和氢化处理, 人造奶油的滥用.
organic这东西我刚来美国的时候还没有, 01年才开始兴起的, 开始本来很感兴趣, 然
后发现从众大多都是最容易被洗脑的小资小白一类, 然后还有个什么血液酸碱学说, 吃
肉变酸, 吃菜变碱, 还有十几斤的宿便之类的耸人听闻, 彻底给跪了.
想信也不敢信啊.
有了院子以后种点菜比买什么organic都强多了, 就是遗憾不能养鸡养兔子, 那才是真
正organic走地鸡. |
|
n**t
发帖数: 45 | 26 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（五）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:57:06 2005) WWW-POST
本文献给YL
（五）"万金油"buffer
Dr. Burgess 这人特有意思，喜欢吹嘘他发现的小trick。比如，他得意说他是全美国最早用
coomassie blue染蛋白胶的人。据他说，六几年的时候他看到一个澳洲的老兄的一片文章,讲述
一种新奇的染料叫考马市亮蓝, 比当时流行的染料amido black灵敏十倍以上。所以他就写了一
封信要了一些，结果效果奇好。我们听得都目瞪口呆。
不过Burgess最自豪的，还是他的“万金油”buffer。他告诉我们说，他几十年了，总喜欢用这
个buffer的配方，什么蛋白都喜欢这种buffer, 可以说到了包治百病的神奇地步。尽管他吹得神
乎其神，配方却十分简单。这个buffer叫TGE,就是Tris, glycerol 和 EDTA。配方 |
|
w*******e
发帖数: 1622 | 27 ☆─────────────────────────────────────☆
solarcell (南加雨后阳光) 于 (Tue Jul 17 20:29:17 2007) 提到:
95应用数学系,4门课满分的那位牛师姐.
☆─────────────────────────────────────☆
solarcell (南加雨后阳光) 于 (Tue Jul 17 20:35:47 2007) 提到:
俺先re一个
☆─────────────────────────────────────☆
rhlin (linke) 于 (Tue Jul 17 21:35:52 2007) 提到:
Re...
☆─────────────────────────────────────☆
tonight77 (深入浅出) 于 (Tue Jul 17 21:51:32 2007) 提到:
faculty
真没追求
☆─────────────────────────────────────☆
HPLC (EDTA) 于 (Tue Jul 17 22 |
|
M****e
发帖数: 70 | 28 cystal of ice will form that can mechanically shear the protein.
the same as DNA. for storage of DNA, it is better to be stored
in buffer to avoid such mechanical shearing and hydrolysis,
if you concern about EDTA, you can use Tris-HCl (pH 8.0).
Here is some general guide for storage of purified proteins:
For short term storage (up to 24 h), most proteins can be kept
at 4C. For storage times longer than 24 h r at 4C, it may be
necessary to filter sterilize the protein preparation (through
a 0.22 |
|
r****o
发帖数: 105 | 29 BSA这里起类似与分子伴侣的作用，主要是防止酶蛋白发生
由疏水相互作用引起的聚合和沉淀。也有可能起避免残存
蛋白酶分解酶蛋白的作用。不管怎么样，主要是为了稳定酶了。
别的添加物比较常见还有：
(1)甘油：也是避免疏水作用引起的蛋白质聚合。尤其可以保护酶
在溶解/冷冻时得活性。
(2)EDTA：可能是为了消除少量protease 的活性，从而使酶蛋白不
会被分解吧。
(3)DTT/BME: 还原剂。防止形成蛋白质分子之间非天然的二硫键。从
而防止蛋白发生聚合。
(4)Sodium Azide: 毒药。抑制微生物生长。如果长期保存蛋白，加
这个会有帮助。
(5) 其他比较常见的盐或者温和的去垢剂：帮助蛋白保持可溶状态。
|
|
s******y
发帖数: 28562 | 30 This is a convenient recipe: 0.5% Triton X-100, 20~50mM Hepes-KOH, pH 7.8,
50mM KCl, 2mM MgCl2, 5mM EGTA,1mM EDTA, 100mM Sucrose, Plus cocktail of
protease inhibitors.
Triton X-100 is for lysis of cell membrane, Sucrose is for the stablity of
most proteins, protease inhibitors is again proteolysis.
However, this may differe depend on your purpose. You should check related
reference to get a recipe that works for your experiment
By the way, in some recipe, I notice they don't use Triton, don't un |
|
y*******o
发帖数: 131 | 31 vector的antigen unmasking solution
Dako 的 citrate antigen retrieve buffer, ph=6
Dako tris/EDTA buffer, PH=9
版上面有高人指点一下么。
我要染 mouse VCAM-1。
查了文献，绝大多数都用frozen section，可我只有石蜡的
谢谢阿 |
|
y***u
发帖数: 1467 | 32 每个抗体是不一样的，有的抗体不需要antigent unmasking,有的用EDTA，有的用
citrate buffer。vector 的antigen unmasking solution 好像是citrate buffer （
这个你也可以自己配）。你可以查查抗体的说明上有没有相应的信息，或是看看其他人
用这个抗体用的是什么类型的buffer。都没有信息的话，就自己拿几个片子做预实验了。
我觉得跟paraffin 还是cryosetion 关系不大，跟抗体自身关系大。 |
|
m*******r
发帖数: 4468 | 33 现在老版还好， 随便我做什么， 两周没来实验室也没发现。 试验细节也不关注， 要
是试验不work，觉得是自己的责任， 我反正经常跟他说if its not going to work,
it not going to work no matter i do.
我发现试验这东西就是这样， 其实细节根本就不中要， 比如要2mls of 500mM
edta, 你就拿个pastuer pipitte 随便挤一下，其实都没问题， 知道那个大概就是1.8
-2mls
还比如， 你inoculate e coli 的时候用不用bunson burner 其实都没问题， 反正要
加antibiotics。
我的意思是说，一个东西要是那么convincing, 大手大脚， 随你怎么做， 都能做的出
来。 那种要技术才能出得来的data, 就不牢靠了。 |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 34 哦，我没比较过，因为我一般不需要把结合上去的蛋白再洗下来。
我就是看说明书上这么说的：
2.2 Release of Immobilized Biotinylated Molecules
The biotin-streptavidin bond is broken by harsh conditions. 5 mins
incubation at 65°C or 2 mins at 90°C in 10 mM EDTA pH 8.2 with 95%
formamide will typically dissociate >96% of immobilized biotinylated DNA.
Alternatively, boil the sample for 5 mins in 0.1% SDS for
protein dissociation.
Please note that proteins will be denatured by such treatment and Dynabeads
Streptavidin can not be re-used.
It has al |
|
D**A
发帖数: 311 | 35 最近看文献，发现有的组说Mnase resistance chromatin其实是nuclear matrix，有的
组说其实那是condensed
chromatin, 有的组干脆直接说那个是heterochromatin。因为不在chromatin领域，不
知道该听哪个的？请各位同学帮
忙。
还有，Mnase digest，一般用EDTA/EGTA来terminate反应，那如果想要结束反应时，立
刻centrifuge 30s, 取
supernatant，那是不是也有同样的效果呢？毕竟mono nucleosome DNA是Mnase
resistant的。
谢谢 |
|
l*******k
发帖数: 361 | 36 EDTA有些时候对binding会有很不好的影响，尤其是你的蛋白是ATP binding protein的
话，你可以用Tris-Boric Acid buffer试试，合适的binding condition（buffer, ph...)需要自己摸索的，我觉得你可以找一个TATA binding protein作为positive control来改进你的实验条件，一般来说，probe越长binding越难检测， 100bp左右比较reasonable，200bp有些太长了 |
|
l*******k
发帖数: 361 | 37 先透析，去掉imidazole， glycerol 5-10%, protease inhibitor不是必须的，可以加
一点EDTA, 1mM, 绝大部分serine protease没有Mg离子都没有活性了，有的蛋白要加DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态，视情况而定。
然后分装，用液氮进行迅速冷却，然后保存在-80, 有些比较脆弱的蛋白即使这样保存也会失活，那就需要找到合适的buffer，或者每次都用fresh made的蛋白
推荐你去读一下一个科大师兄写的从纯化到星辰，里面提到了很多蛋白提纯跟保存的技
术，对于做蛋白的很有帮助 |
|
a****k
发帖数: 1130 | 38 偶来补充自己的看法吧：透析不是必须的，只要imidazole不影响activity就好。一般
不用再加protease inhibitor，因为细胞裂解的时候不是已经加过了吗。不建议加EDTA
，不知道lz是要做什么activity assay，很有可能这个蛋白本身自己就是需要镁离子的。
glycerol，对于一般的蛋白我们都是加10%，然后分装后用液氮冻完存在－80度。但是
碰到很不好保存的蛋白，比如冻了一两个月就没有activity的，把glycerol加到20％会
有帮助。
DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态，视情况而定。
存也会失活，那就需要找到合适的buffer，或者每次都用fresh made的蛋白 |
|
r*********y
发帖数: 124 | 39 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来（4ml 洗脱
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩，发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘，上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared（我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化，浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢 |
|
g*****y
发帖数: 6325 | 40 DTT 和B-ME都是起还原作用。防止2硫键。 但是各有优缺点。 DTT在室温和4oC都不稳
定。 大概有效时间是1天。 b-
ME稳定，但是还原能力比DTT弱。 DTT和b-ME都很难闻。 现在有的实验室用TCEP. 还原
能力强，又稳定无色无味。 但
是价格高。 所以都是随个人喜好和经济实力来选择。
这是为什么呢？
相取消了吗。EDTA的目的是什么 |
|
|
v***a
发帖数: 1242 | 42 就我的理解（包括从网上抄的）：
EDTA是：
1）蛋白质变性剂和稳定剂。
2）金属鏊合剂，螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子（防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防
止Mg2+离子与核酸生成沉淀），抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需
要一定的金属离子作辅基）。
3）有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 |
|
K**********e
发帖数: 188 | 43 汗，你说的这3个作用，跟蛋白buffer需要加，除了蛋白质稳定剂那一条，很多地方都
是矛盾啊。
EDTA是怎么使蛋白质稳定的？ |
|
f******s
发帖数: 440 | 44 我们用EDTA in HBSS to obtain cells
然后数
你还要继续分的话，用Ficoll-Paque gradient?
再要提macro的话，FACS sorting？ |
|
f**********r
发帖数: 95 | 45 我一般只用EDTA, 足够把大部分细胞弄下来了 |
|
s********2
发帖数: 138 | 46 嗯,oldmonster 批评的是，我总觉得自己现在的表达水平骤降。我用的是BigDye
teminator cycle sequencing kit进行测序。试剂盒里面自带一个质粒和引物，作为
control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所以用量大）。我用
的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也是1.7-2.0。产物
和引物的比例是50ng：3.2pmol。进行cycle 标记，进行了25个循环。然后将标记后的
产物用Ethanol/EDTA 进行纯化。结果是：control出来结果很好，而自己的产物却只有
在很前面的地方有很高的几个峰，根本不是产物。所以我怀疑我的产物根本没有标记上
？不知道这样是不是还是不够详细。希望大家能够帮帮我！ |
|
k*******s
发帖数: 214 | 47 这是sequencing PCR reaction根本没有开始，有几个可能
1. 你的引物的Tm太低，在同样退火温度下，引物没有结合好。
2. 模板的溶度太低。
3. 模板样品里面有抑制PCR反应的物质，比如EDTA
另外BigDye很稳定，自带的对照肯定能做出来，因为样品最纯的，引物M13也是最常用
的，本身做这个对照没有意义。
质粒和引物，作为control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所
以用量大）。我用的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也
是1.7-2.0。产物
产物纯化试剂盒，利用了专门用于测序的那种纯化试剂盒。第二，我尝试着用了DNA浓
度梯度。但是出来的结果都是一样的。只是在最前面有几个峰。我真是不知道到底是哪
里出问题了。希望大家能够帮我分析一下。注： 后面有结果图片。 |
|
b**y
发帖数: 86 | 48 最近刚开始做EMSA，我用的是Pierce的Lightshift kit. 多次实验都只看到
nonspecifec binding（不能被unlabeled oligo竞争掉）。我发现一个原因可能是
binding reaction里盐浓度过高，因为kit提供的binding buffer（10*）含有500mM
KCl,而我的nuclear extract最后是由high salt buffer提取的，F.C.225mM NaCl。于
是我省略了binding buffer，把最后的NaCl浓度调整在50-75mM，得到了一条specific
的binding，但是非常弱。
问题1. 我看到的paper和protocol都使有类似的binding buffer，而且也用类似方法提
取核蛋白，好像并不考虑nuclear extract里的盐浓度，事实上这个浓度很高。但是，
我的几个sample extract蛋白浓度不同，加入同样多的蛋白的话最终盐浓度就会不同。
大家怎么解决这个问题？透析又怕蛋白容易降解。
问题2. 我加入的nuclear extract的体积无法忽略，大概有10u... 阅读全帖 |
|
x********a
发帖数: 157 | 49 我的裂解液成分是：
50 mM Tris-HCl (Ph 7.4)
150 mM NaCl
2 mM EDTA
5% glycerol
1% Triton
然后每1毫升上述的液体加 10 ul 0.1M PMSF 和 20 ul Protein inhibitor cocktail. |
|
