l**y
发帖数: 595 | 1 dialyze for 5 days
fresh指什么呢 |
|
w***7
发帖数: 45 | 2 楼主真可爱，我猜猪师傅的意思是：
多新鲜呀 （得带上正宗北京腔）
dialyze for 5 days
fresh指什么呢 |
|
发帖数: 1 | 3 12月26日 事实的真相
以前我们分析过，Augusta, GA 只是这个人体基地的一个点，而且我们也追踪到还有一
个点在加州。那么经过更多的分析，显示事实的真相可能是如此。这些地下通道是很久
以前就存在的，是为了战争或避难用的，后来在南北战争中，又充当奴隶逃跑到北方的
通道。那么在后来的后来，就被一些别有用心的人充当了非法活动的场地。而到了80年
代后，日本人就加入进来，把其改造成了一个军事，人体实验基地，成了报复美国的一
种手段。当然，我也强调历史和解，仇恨和解，但要在正确的认知，悔改下的和解。如
果一边在屠杀受害者，一边高谈和解，并千方百计掩盖事情真相的曝光，这不是悔改的
表现，最多是转移了屠杀的目标，我们不能原谅罪恶势力彼此勾结下的和解。根据分析
，这个基地的入口就在Deerfield, ILLinois. 世界每一个人都是这个基地的受害者，
都是这些大药厂的受害者，受害者以亿为单位来计算。你们很可能都在不知不觉中受到
了他们的伤害，请把信息传达到世界每一个角落，让我们一起携手和世界上最邪恶的势
力做顽强的斗争，他们现在还在屠杀无辜的受害者，每天在我家里杀人。请你们和我站
在... 阅读全帖 |
|
n***w
发帖数: 2405 | 4 GST-fusion protein,
bind完后用elution buffer洗出来了，然后pool，然后dialyze back to PBS (pH 7.3)
，dialyze完我测了下pH是7.56，然后加thrombin，切了一会儿就出现precipitation了
，根据我上次的经验，precipitates里面90%是我需要的蛋白。
现在一个问题是，为啥会有析出？我加完thrombin切的过程中测了一下pH，起码1个小
时的时候pH没有什么变化。。
所以想，是不是因为切了以后蛋白结构变了，疏水性增加？
这个116kD的fusion protein里有18个cysteine，结合之前有人发的帖子，我在想，是
不是这个原因？
谢谢。 |
|
b*****y
发帖数: 175 | 5 My protein was eluted in 0.3% vitamin C in H2O and lyophilized (vitamin C
was intended to prevent any Met oxidation of my protein). Since I know
highly acidic pH is not good for LC-MS so I tried three different approaches:
1. directly dissolve in ammonium bicarbonate and adjust pH to 8
2. directly dissolve in ammonium bicarbonate and dialyzed against ammonium
bicarbonate (3 changes in 6 hrs) and the final pH is 8
3. dissolve in ammonium bicarbonate and buffer exchanged to 3M guanidinium
hydrochl... 阅读全帖 |
|
v***e
发帖数: 2108 | 6 用Erlang写系统也有一段时间了，我只能说这种语言写并发程序
上手快，因为有一套gen_server之类的东西让你用，你不用去关心
那些底层的IPC, message passing, shared memory management的东西。
Erlang semantics sucks big，程序复杂了之后难以维护和调试，
compiler很弱，dialyzer极慢，debugger差不多是个Joke，很多
很简单的错误你要到runtime crash，之后才知道，个人认为不适
合写太复杂的东西。
high
of
),
at |
|
s***o
发帖数: 6934 | 7 dialyzer确实很坑爹，但你不能不用。erlang确实不适合用来做商业逻辑很复杂以及
cpu intensive的应用，但是在自己的领域里还是相当好使的 |
|
g*****s
发帖数: 157 | 8 if the protein is purified as GDT-fusion, you must have glutathione in the
prep, then depending on your subsequant application, you may want to dialyze
it using whatever buffer you used to purify it minus glutathione.
the storage question is trickier. if the purified protein is stabel, you can
certainly keep it in -80, but some of them are finicky. temperature shift may
cause aggregation and precipitation after freeze. my feeling is, in protein
manupilation, try to keep as little additives such |
|
s******y
发帖数: 28562 | 9 Dialyze against your buffer overnight |
|
D******9
发帖数: 2665 | 10 yes, you have to remove salt first, I used to dialyze my protein at 4
degree overnight |
|
s******y
发帖数: 28562 | 11 当然可以，真空抽，保持比较低的温度（10度左右就好）
但是，抽完之后溶液里的盐度会很高的，得dialyze 一次。
或者，你一开始就用比较低盐的溶液的溶解蛋白，然后再抽真空。 |
|
s******y
发帖数: 220 | 12 我的目标蛋白是老鼠的，然后一抗是老鼠里产生的，只好用这个EZ-Link的kit。
instruction说不能用sodium azide在buffer里面，我的一抗里面有0.05%的sodium
azide，
需要dialyze吗？ 还是说只要不接着加sodium azide就没问题了。
而且，说明上要求把1mg IgG 溶解到0.5-1ml buffer， 我的抗体是1mg/ml的，有100ul
， 那我是
不是scale down就可以了呢？
多谢。 |
|
s***m
发帖数: 6197 | 13 能不能站内信件联系一下
想交流一下使用心得
谢谢！ |
|
g*****y
发帖数: 6325 | 14 我不知道这个几个方法对你可行不，1. 将你的蛋白和不同浓度的standard比如BSA一起
跑胶然后silver stain. 之后用一般
胶stain的quantitation method 来粗略定量。 2. 将你的蛋白dialyze 到底盐或者
dh2o里。 lyophilize 成powder然后从
新溶解到small volume的buffer里来提高浓度再定量。 |
|
j******3
发帖数: 5244 | 15 这个浓度的蛋白silver stain一般都看不见
如果dialyze再lyophilize的话，工作量太大了
几十上百个sample呢 |
|
s******y
发帖数: 220 | 16 如果不dialyze的话，有别的方法吗？
查了一下，好像sds在的话，浓度高或者低都会影响bradford assay，我们用的这个
assay。
有别的办法吗？
测浓度做定量的WB。
谢谢。 |
|
b********t
发帖数: 108 | 17
ion channels of the excitable membrane的开始几个章节可以看
？
whole cell 你的pippette solution 可以dialyze cell内的离子 |
|
m**z
发帖数: 787 | 18 best solution is to remove oxygen by dialyzing the protein in an anaerobic
chamber with buffers free of oxygen.This is not easy to do though. |
|
l**y
发帖数: 595 | 19 放进去1ml.取出来2ml,是不是水进到袋子里了 |
|
|
|
n*********g
发帖数: 47 | 22 渗透压啊！里外电解质浓度不一样，差别太大了，透析了五天当然浓度变了。你这样不
如用FPLC 上desalting column。 |
|
