发帖数: 1 | 1 我们现在要做PD1基因CKO的小鼠模型，想请教一下几个问题：
1.如果用CRISPR插入LOXP位点的方法，是要插在整个基因编码区的两侧？还是选择少数
几个外显子让其移码突变？
2.在操作的时候如果同时注射两个sgRNA，会不会直接把中间的片段删除掉了而导致敲
入LOXP的效率比较低呢？
求教！ |
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v*********d
发帖数: 382 | 2 1) mTOR 控制cap-dependent translation 基本上就是因为S6Ks and 4E-BP1， 事实上
其他的几百个mTOR 调控的蛋白都忽视了， 这里面肯定还有很多水可以灌，所以才有了
今年关于Grb10 的2篇science
2) cKO mTOR 现在就2片，jcb 的muscle specific cKO 都是expected的，倒是在T-
cell 里的cko 比较出乎意料 （PMID: 19538929），所以上了immunity, 这也间接说明
了水还很深
translation？ |
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m**i
发帖数: 8296 | 3 http://blog.sciencenet.cn/home.php?mod=space&uid=39523&do=blog&
王应宽 2011-03-26 Beijing, China
随着科技进步和社会的发展，出现了很多新事物。就媒体报道的各类新职位就让人应接
不暇。本文就我所了解的时髦职位的名称作一个简要的梳理，尽可能的列出其中英文名
称。不全和疏漏之处，请各位博主博友补充。
首席执行官， Chief Executive Office, 简称CEO
首席执行官（Chief Executive Officer，CEO）是在一个企业中负责日常经营管理的最
高级管理人员，又称作行政总裁（香港和东南亚的称呼）或最高执行长（日本的称呼）
或大班（香港称呼）。同时CEO也可以指首席体验官（Chief Experience Officer）、
首席交换官（Chief Exchange Officer）等。
CEO领导下的执行班子，包括：总经理、副总经理、财务总监（CFO, Chief Financial
Officer）、人力资源总监（CHO，Chief Human Resource Off... 阅读全帖 |
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l**********k
发帖数: 189 | 4 感谢zhaohu, daihsh, muhe1985, sunnyday, rayxixi, sumo2009, andycai,
lotkaeuler11, dua，以及Neverthink和直接写email或私信给我的朋友们的建议。我已
经把各位的建议拷贝下来，这周会把这批cre大鼠定下来然后尽快开始。
大鼠虽然不象小鼠目前用得这么广泛，但在神经疾病和心血管疾病方面的用途还是很大
的。而且目前能做大鼠基因敲进和cKO的地方很少，我想对我们来讲市场也远远超过我
们的产能了。之所以选择从cre大鼠开始做起，主要原因是如果有人想做cKO大鼠，一定
会需要cre大鼠。如果只是为单个客户做cre大鼠的定制化服务，其他客户要想用同样的
cre大鼠，我们就没有办法提供了。所以干脆先做一批常用cre大鼠。因为还没有见到任
何通过Knockin方法得到cre大鼠的报道，所以我想如果我们先做出一批来，说不定会把
模式大鼠的应用带起来。
神经方面有朋友给列出了10多个非常有用的cre大鼠，应该可以马上开始了。心血管方
面我们在综合一下各位的建议，希望也做一些。
lotkaeuler11 提到兔子和猴子，... 阅读全帖 |
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r****t
发帖数: 10904 | 5 发信人: kumar6 (harold), 信区: Military
标 题: 唐骏的Linkedin自称是Caltech PhD
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 6 22:38:56 2010, 美东)
唐骏现在狡辩他的自传是编辑错误，而他自己从未说过从加州理工拿到博士学位。
大家来看看他的Linkedin profile上面怎么写：
http://cn.linkedin.com/pub/jun-tang/18/ba/296
上面有一个推荐是盛大的Corporate Counsel在去年十二月写的， 所以应该是真的。
CXO (CEO, COO, CKO, CFO, CMO, CAO, CVO, CDO, CRO, CLO, CSO &
CEO/ CIO/COE/COO/CFO/Head/VP/ Director/President Level - Senior
JUN TANG’s Education
California Institute of Technology
Ph.D. , Computer Science , 1990 — 1993 |
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r****t
发帖数: 10904 | 6 【 以下文字转载自 Headline 讨论区 】
发信人: repast (xebec), 信区: Headline
标 题: Re: 唐骏惨了：被揭美国卖文凭的野鸡大学毕业
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 7 02:48:26 2010, 美东)
发信人: kumar6 (harold), 信区: Military
标 题: 唐骏的Linkedin自称是Caltech PhD
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 6 22:38:56 2010, 美东)
唐骏现在狡辩他的自传是编辑错误，而他自己从未说过从加州理工拿到博士学位。
大家来看看他的Linkedin profile上面怎么写：
http://cn.linkedin.com/pub/jun-tang/18/ba/296
上面有一个推荐是盛大的Corporate Counsel在去年十二月写的， 所以应该是真的。
CXO (CEO, COO, CKO, CFO, CMO, CAO, CVO, CDO, CRO, CLO, CSO &
CEO/ CIO/COE/COO/CFO/He |
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L*******u
发帖数: 928 | 7 MMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM
MMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM
MMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM
MMMMMMMMMMMWNWMMMMMMMWWMMMMMMMMMMMMM
MMMMMMMWkxNKcxW0dKMMWxlKMMMMMMMMMMMM
MMMMMMMWOcxO'l0clXMMO''oxxxx0WMMMMMM
MMMMMMM0c;:;..:;;o0k,.:ll'.;kNMMMMMM
MMMMMMMd'odc.,cd:'l:;,cXK;:XMMMMMMMM
MMMMMMMd,c:c,:c:;;k0WO;;;:0MMMMMMMMM
MMMMMMMd'ckO,lKk;;kKXk;..;kXWMMMMMMM
MMMMMMMx;OMXodxc,lKx::d00dc:kWMMMMMM
MMMMMMMNxoKNkkXKo:lxKWXXXdxKNMMMMMMM
MMMMMMMO,:XX;:XMNx:oKX:cKx,:0MMMMMMM
MMMMMMNolXMNl.:ooll... 阅读全帖 |
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j********g
发帖数: 159 | 8 转让两张Kickboxing的groupon
CKO-Edgewater
一个月unlimited pass，最晚使用期限2月26日，当时20元购入，现15元出售
另外，goupon本身的20元价值永不过期
有兴趣的话，请站内信箱（I prefer 通过 j********[email protected]）联系
谢谢。 |
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s****2
发帖数: 4569 | 9 CXO (CEO, COO, CKO, CFO, CMO, CAO, CVO, CDO, CRO, CLO, CSO &
CEO/ CIO/COE/COO/CFO/Head/VP/ Director/President Level - Senior
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j********9
发帖数: 27 | 10 沒問題，byjess, e-mail到我們的網站信箱c**[email protected]，Hungtinton
Library還沒出票，等我拿到票的時候再跟你聯絡。
野花值得一看，上次聽同事講過，星期一再求証那個地點好。至於中餐的話，集中在華
人區(廢話)，Monterey Park, Alhambra, San Gabriel, Rosemead, Temple City,
Arcadia, Pasadena等,靠近LA Downtown的話就要去中國城，不過不如Monterey Park等
地。東區的話，Rowland Heights, Diamond Bar, Hacienda Heights等也不少中餐館。 |
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f*****e
发帖数: 213 | 11 CAO Chief Administrative Officer首席行政官，负责公司
行政的事，如买东西
CBO Chief Business Officer首席商务官，负责公司广告
CCO Chief Clean Officer首席清扫官，负责打扫公司卫生
的人的头，没他不行
CDO Chief diplomatism Officer首席外交官，对外打交道
CEO Chief Executive Officer首席执行官，太熟悉了，不说了
CFO Chief Finance Officer首席财务官，管钱
CGO Chief Game Officer首席游戏官，只适合娱乐公司
CHO Chief Homepage Officer首席网页制作
CIO Chief Information Officer首席信息官，收集市场信息
CKO Chief Knowledge Officer首席知识官，负责公司资料整理，
上网下载资料
CLO Chief Law Officer首席法律官，负责公司法律事务
CMO Chief Market Officer首席市场官，搞市场
CNO Chief Ne |
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F****3
发帖数: 1504 | 12 前一阵听版上的买了Crucial的内存，升级了。想把换下来的内存卖了。请问
M391B5773DHO-CKO 2GB 1Rx8PC3-12800E-11-11-D1
能在CL卖多少啊？ |
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H****N
发帖数: 997 | 13 Yes, 3/16 will be cKO, but some of them (1/3) have two cre alleles, and some
of them (2/3) have only one. |
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c*t
发帖数: 1063 | 14 谢谢大家的回答。
是不是 A gene不在生殖细胞表达，就不会出现此文章中的情况了？
算了下原来的breeding strategy，得到cKO的几率是3/8,如果用double heterozygotes
会降到3/16。
Thanks. |
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b******d
发帖数: 28 | 15 Doug是不是也在作mirna啊？
搞不明白cKO掉dicer后在有些组织内没啥表型，敲出掉17-92却有了。
不是这个方向的，听了doug讲；不是太懂
bob |
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s******e
发帖数: 370 | 16 我们做的是complete KO， 不是tissue specific，所以要从卵子开始就得有active的
cre——跟上面各位不同哈
F1出来，PCR，碰到过既有被cre切过以后产生的小带，又有未切的cKO带，就把这个叫
partial。究其原因，猜想可能是cre被transcribe出来的时间太晚又太短，受精卵分裂
之后有些细胞带了cre有些没有。
但是即使是partial，如果它的生殖细胞是KO，我们还是可以用它来establish line的。
tissue specific暂时还没有做到⋯⋯ |
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a********k
发帖数: 2273 | 17 Why? I think this is not as clean as a straight KO and it is impossible to
do cKO. Is this actually faster than a traditional knockout? |
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p*****m
发帖数: 7030 | 18 I think you can do cKO using zinc finger, just target ZFNs to specific c
ell types |
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y**y
发帖数: 36 | 19 国内做老鼠现在不要太快，半年一个CKO
南京高翔 上海南模 北京杨晓 雇一堆研究生 给几个小钱就可以了 |
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f***4
发帖数: 886 | 20 半年作一个CKO，有点太快了吧。总共这几家做了几个啊？ |
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p*****m
发帖数: 7030 | 21 fly RNAi也有off target effect啊，这个哪里都有 mammalian system也有
worm虽然没办法KO 但是你架不住人家mutant多啊 mutant+cell specific rescue在线虫
里是通用配置 基本可以替代老鼠的cKO了都 当然出发点不一样
相对来说反而是fly RNAi的efficacy好像还有点问题 至少在neuron里看起来efficacy就
很差 不知道是hpRNA设计的问题还是RNAi machinery整个就弱
most
with |
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p*****m
发帖数: 7030 | 22 有cre-loxp报道了，但是没有用他做cKO的，原因么，现在还没人能在fish里做KI |
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p*****m
发帖数: 7030 | 23 我没明白，20%已经比老鼠HM高得多得多了啊 你是想在同代用ZFN做cKO?这样才需要考
虑不加筛选的效率问题吧 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 24 you are smart.
其实对于fish来说，有无knock-in无所谓，可以有别的途径，但是要做cKO, 就麻烦了。
你要不想想这个怎么弄吧。 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 25 这么差？要说fish cKO应该还是挺有用的吧 |
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a********k
发帖数: 2273 | 26 但是你就觉得鱼比rodent有更多贡献？线虫和果蝇的贡献咱暂且不提，鱼到现在基本可
以说是零贡献。。。有了cKO以后有没有零头还是个问题
的零 |
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a********k
发帖数: 2273 | 27 MARCM不是那么容易移植的。。。没有cKO移植了贡献有限
而且鱼的工作绝大部分在幼鱼里面做，要trace cell linage基本用transient
expression或者transplantation了。MARCM的优势比起在老鼠里面小无数倍。 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 28 ZFN+TALEN做KO还是可以的 不过就像Morphin说的，光KO感觉并没啥太大意思了。 要说
fish mutants也大把大把的了 现在缺的并不是一个简单的KO工具感觉。有KI和cKO也许
能好一点
TALEN本来我想在鱼里做一下来着 就当练手 结果还没谈好合作就被发掉了(上周scienc
e, barbara Meyer在线虫里做了) 我就没兴趣在fish里再proof of principle一把了。
。而且也听说有别的fish lab做 |
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y**********o
发帖数: 37 | 29 lz给出的数据太少
只提到KO老鼠的脂肪少（体重也轻？）
一般的老鼠模型都是敲掉个基因以后老鼠出现各种代谢障碍
各种fancy的实验搞了以后说明该基因对于正常代谢是必须的
lz的这个基因比较有意思，是loss of function有意义
不知道gain of fuction会不会引起肥胖表型
另外发相关文章的基本套路很简单
先上gene expression pattern
是cKO还是global的
如果是global的赶紧上cre-loxP老鼠
然后show一下energy balance的情况
无非就是吃的多不多，消耗的多不多
给出个代谢异常的原因（吃得多消耗正常or吃得正常消耗少....各种情况都有)
接着发现了某个具体的分子机制（信号通路的基本实验技术）
下面最好来个rescue的实验
最后最最好扯点临床的数据（病人的标本）来增加点故事性 |
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r*******y
发帖数: 48 | 30 any antibody against that particular knockout protein should work, no matter
which domain it is designed against, if that protein is really ablated. for
instance,if that protein has 20 exons, and you expect that the protein
after exon 10 is knocked out, but your antibody available is against the
exon 1. then, if it is a clean knockout, this antibody will detect a shoter
band than expected (i.e. from exon 1 to exon 9, but not a full length
protein). If you still detect a full length protein, then... 阅读全帖 |
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D***e
发帖数: 44 | 31 想了解一些没有接触过的新技术，比如cKO，4D imaging，Biacore/SPR Analysis，
neuron细胞的培养和分离技术，Cancer biology的一些常用技术。找这样的实验室，免
费干活2～3个月。这样的想法靠谱吗？ |
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v***a
发帖数: 1242 | 32 谢谢回复。我回国以后也想成为你们的客户。
请问你们有做cKO大鼠吗？ |
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l**********k
发帖数: 189 | 33 目前我们的研发组正在对大鼠大片段基因敲进和cKO技术进行优化。最近取得了非常好
的进展。再给我们一两个月的时间。我希望尽快将这个服务推向市场。如果我们的方法
足够可靠，成功率高，那将加快速度，并节省制备成本。 |
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l**********k
发帖数: 189 | 34 谢谢支持。我们一定会坚持做品牌。因为开始的时候市场团队小，所以我们就将服务对
象主要集中在国内顶尖机构。现在我们在国内著名的大学（清华、北大等）和科学院所
（中科研动物所、发育所、神经所、生化细胞所等）建立了很好的信誉。他们帮我们宣
传对我们在国内站稳推动特别大。看得出来很多教授也希望国内有真正一家提供高水平
服务的公司。
由于我们去年才完成融资，资金比较充足。这样也可以保证我们将技术和服务做得更精
细，并不断开发新服务，新项目。明年初我们会推出包括大鼠的基因敲进、cKO、细胞
系的基因敲进/敲除、人胚胎干细胞的打靶、以及模式动物的表型分析，繁殖和供应等
。也许时间会漫长，但不管怎样，我的目标就是在国内建立一个国际标准的模式动物交
流、繁殖和供应中心。只有这样，才能帮助中国的科研科医药发展。 |
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t******k
发帖数: 599 | 35 问一个很脑残的问题，如果我有7个样品，4个control和3个ko来作qpcr比较基因a的表
达。我先算每个样品中a相对于reference gene的deltaCt，然后计算出control中a的
deltact平均值和sd，跟ko中a的deltact平均值和sd。根据abi的protocol我可以用
deltact的sd到deltadeltact中，那么最后我计算的power2里面sd怎么算呢？作柱状图
的时候显示的error bar又是啥东西哎？
这个问题想了很久了，看了网上各种材料也没用。如果是开始就control和cko配组的实
验我最后会计算每组power2在一起的sd,可是现在不能配组就不会算了。。。。。 |
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l**********k
发帖数: 189 | 36 由于一直以来没有表达Cre的工具大鼠，所以可能会影响到cKO大鼠的应用，进而影响到
大鼠做为模式动物在医学研究中的应用。我们这几个月想先做一二十种Cre Knockin大
鼠。然而，虽然大鼠在神经生物学和心血管疾病方面比小鼠有优势（所以用途更广），
但我对这两个领域不是很了解。我知道这里卧虎藏龙，麻烦这些领域的朋友给提一些建
议，以便我们可以有些目标，并对要做的Cre大鼠排一个优先顺序。如果您的建议被采
纳，一旦你用得到，我们会优先免费提供，或是提供给你指定的在国内的科研朋友。感
谢大家的帮忙。 |
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l**********k
发帖数: 189 | 37 您是说在Rosa26位置上放CreERT2? 如果是这样的话，虽然可以做Tamoxifen induced
cKO，但就没有tissue specificity了。而且，在有些tissue里可能效率不会很高。 |
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w***j
发帖数: 88 | 38 小弟课题中的一个cKO mice 最近一直在育种
假设基因是A
目前用A flox/flox 和 A flox/wt;MX1-Cre杂交，且已经获得了A flox/flox;Mx1-Cre
那么，现在最好的方法是不是拿A flox/flox;Mx1-Cre mice和A flox/flox杂交？
这样下来的小鼠一半是A flox/flox;Mx1-Cre mice，另外一半是A flox/flox，后者正
好是对照 |
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T****u
发帖数: 424 | 39 我知道的，北京，KO 6-8万。cKO 10-12万，时间3个月。
KO Rat也不过8-10万。
南京模式动物中心价格高，另外一个价格更高，都有原因。 |
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H****N
发帖数: 997 | 40 I was just answering LZ's question in general terms. If you want to talk
specific.cases, we can spend a lot of time on this, hypomorphic, cre-
specificity, cre efficiency, etc. We don't know what LZ's gene is like, but
if you want to do cko, do it the right way. |
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x********e
发帖数: 35261 | 41 一般来说KO就是complete KO啊，cKO才会特意说明。 |
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发帖数: 1 | 43 删除的越完整越好。但是有几点要注意。前面可能会有promoter区域，基因中间可能有
非编码microRNA或者lncRNA。要根据实验需要选择删除位置。 两个gRNA没问题。很多
人都做过。没有特殊设计的同源臂不会删掉中间全部部分。 |
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发帖数: 1 | 44 谢谢！bigmagic！第一次做显微注射方面，多谢指导！ |
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