g********4
发帖数: 4959 | 1 你这是怎么看帖的？人家问的是general的问题，对多数buffer说的，到你这里便变成
了IP buffer了。EDTA的作用，你的回答还没原帖理解的好呢！
希望看到好的回答。
我现在的一个实验因为看到锌离子的增强作用，因此把EDTA从buffer里减了，但
protease和RNase（nuclease）明显增强，RNA-binding activity都没法分析了。
发信人: emases (sesame), 信区: Biology
标 题: Re: 请教buffer里的各种成分作用
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 28 17:23:06 2010, 美东)
IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。 |
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g***s
发帖数: 60 | 2 谢谢两位，
希望有更多的专家看看这个小问题。
你这是怎么看帖的？人家问的是general的问题，对多数buffer说的，到你这里便变成
了IP buffer了。EDTA的作用，你的回答还没原帖理解的好呢！
希望看到好的回答。
我现在的一个实验因为看到锌离子的增强作用，因此把EDTA从buffer里减了，但
protease和RNase（nuclease）明显增强，RNA-binding activity都没法分析了。
发信人: emases (sesame), 信区: Biology
标 题: Re: 请教buffer里的各种成分作用
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 28 17:23:06 2010, 美东)
IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 3 我只reuse外电泳槽的buffer (anode buffer)，而且一般只reuse一次，最多两次。
recycle的buffer跑出来的胶明显resolution不如新鲜buffer。所以比较重要的胶我都
用新鲜buffer。
我的电泳buffer都是室温存放的。 |
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s********k
发帖数: 6180 | 4 那现在大多数的实现是采用shared buffer还是每个user单独的buffer。如果是单独的
buffer，那么上下行是share buffer还是上下行也单独分buffer。 |
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s******y
发帖数: 220 | 5 我用ripa buffer从tissue里面提取蛋白做western blot，但是不知道为什么，整条
lane看上去都是一
条黑的，相反，用一般的tris buffer做的看上去就正常。
我用的是santa cruz买的ripa buffer，难道是buffer 坏了？ |
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w***e
发帖数: 269 | 6 we use invitrogen system, everything is from invitrogen including buffers.
we re-use the buffers a lot, like using the same buffer for a month or
longer. But the buffer needs to be kept in the fridge or cold room. |
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M*******C
发帖数: 183 | 7 请问你用glycine PH 2.5之后，是水洗还是PBS/TBST之类的洗？
我看见网上一个类似的protocol，他们要PBS, TBST洗很久，这样strip耗时很长啊，不
知道有没有必要？ 以前我们NAOHstrip后，清水洗2min就好了。
http://www.abcam.com/protocols/western-blot-membrane-stripping-
Mild stripping
Buffer, 1 L
15 g glycine
1 g SDS
10 mL Tween 20
Dissolve in 800 mL distilled water
Adjust pH to 2.2
Bring volume up to 1 L with distilled water
Procedure
Using a volume that will cover the membrane, incubate at room
temperature for 5–10 min.
Discard buffer
Repeat incub... 阅读全帖 |
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m****m
发帖数: 395 | 8 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: mymmym (sweet girl), 信区: Biology
标 题: 请教一个关于buffer的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Thu May 29 16:21:12 2014, 美东)
想配一个Citrate Phosphate Buffer，网上的配方只说要配pH6.6的溶液取
36.4ml 0.2M的Na2HPO4 stock + 13.6ml 0.1M的citric acid stock 然后稀释至100ml。
请问这个溶液最终的盐浓度(buffer strength)是多少呢？怎么算？由于实验特殊需要
，盐浓度不能太高，以前只配过tris buffer，规定是20mM,10mM。
弱问了，求解 |
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s*x
发帖数: 8041 | 9 Avatar
John Springer • 14 hours ago
Just read how Russia built second pipeline to China and no longer using
dollars , but petro yuans and rubles. We can no longer simply use threat of
sanctions and tariffs. We can negotiate but must treat our peers, even those
who see the world differently, as participants or we will fail.
6
•Reply•
Avatar
Orange Juice John Springer • an hour ago
Who will buy our debt if we upset China? Trump arranged for record deficits
and he's trying... 阅读全帖 |
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k****i
发帖数: 838 | 10 PBO的好IMS网菜单可以用内置硬盘做buffer吗？
好IMS网的部分资源看的时候很卡（4，5秒就停一下），感觉像buffer用完了，可以更
改设置，用内置硬盘做buffer吗？ |
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s*v
发帖数: 3 | 11 I'm looking for the best possible solution to this problem:
My class maintains a dynamic buffer that outside callers can write into.
Callers may write in anything with any size. So my buffer has to grow
dynamically. What's the best way to maintain this buffer so that heap
allocation cost is minimized?
Or: a completely different implementation strategy/thinking recommendation
is
also welcome.
Thanks. |
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g*********s
发帖数: 1782 | 12 #include
#include
int main() {
const int count = 1024*1024*128;
const int buffSz = 1024*128;
FILE* output = fopen("cbuff.dat", "w");
setvbuf(output, NULL, _IONBF, 1024*128);
for (int i = 0; i < count; i++) {
//int x = i;
int buffer[buffSz];
buffer[i%buffSz] = i;
if ((i+1)%(buffSz) == 0)
fwrite(buffer, sizeof(int), buffSz, output);
}
fclose(output);
}
#include
#include
int main() {
co |
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g*********s
发帖数: 1782 | 13 解释一下。
cbuff.dat是只用自己的buffer，关掉fwrite的。
mbuff.dat是同时用自己的也用fwrite的。
vbuff.dat是将fwrite的buffer调大。
dbuff.dat是默认的fwrite。
sbuff.dat是将fwrite的buffer设小。 |
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h****e
发帖数: 2125 | 14 同时打开3个shell emulator buffer，实在不愿意换手用鼠标去换buffer，大家知道什么
热键是快速换buffer的吗?谢谢大家。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 15 很简单，自己配就行了。
stripping buffer:
2% SDS
100 mM beta-mercaptoethanol
50 mM Tris, pH 6.8
Procedure:
1. Heat stripping buffer to 50c in water bath.
2. Incubate blot with stripping buffer at 50c for 15-30 min with gentle
shaking.
3. Rinse blot several times in TBS.
4. Blot is now ready for re-block and blot.
这个就很好用。 |
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x*******i
发帖数: 32 | 16 Hello There,
We have a protein (pI = 8.9, 10 mg/mL, MW 100 K) precipitated in 10 mM
phosphate buffer (pH around 7) after overnight storage at 4 degree. The
precipitate will be soluble again when warming up solution to room
temperature. Addition of NaCl will prevent precipitation. Other common
buffers are OK not causing precipitate.
Hypothesis is ionic cross-linking. Phosphate ion has intense negative charge
density and working as the cross-linking agent, its multiple negative
charges interact wi... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 17 sonication的设置被人改过没注意到，在dilution buffer（也就是immune
precipitation 反应的buffer）里取了一部分跑电泳，发现genomic带很清晰，smear分
子量都很大，并且很黯淡，这种情况下能在dilution buffer里紧急大功率补sonicate
一下么？非常感谢！！！！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 18
非常感谢！我也是实在没办法，多加了inhibitor。PMSF也加了。
加了inhibitor的lysis buffer放在冰里遇冷，然后从液氮里拿出tissue，立即
homogenize。。。。
我说的室温过夜是加了6xloading buffer，另外我的buffer里还有2%的SDS，这样也会
降解吗？ |
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m****m
发帖数: 395 | 19 想配一个Citrate Phosphate Buffer，网上的配方只说要配pH6.6的溶液取
36.4ml 0.2M的Na2HPO4 stock + 13.6ml 0.1M的citric acid stock 然后稀释至100ml。
请问这个溶液最终的盐浓度(buffer strength)是多少呢？怎么算？由于实验特殊需要
，盐浓度不能太高，以前只配过tris buffer，规定是20mM,10mM。
弱问了，求解 |
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g*****n
发帖数: 241 | 21 我正在做一个实验需要把worm protein lysate做proteomics的分析(TMT labeling)。
我现在用的buffer是6M Guanidine HCL in PBS，5mM DTT， pH8.5 。用研砵破碎虫子
之后用氢氧化氨把pH值重新调回8.5，然后65度半小时，离心取上清给mass spec
facility的人。但他们告诉我说trypsin digestion的效率不高，怀疑我的buffer可能
有抑制trypsin digestion的成分。
我想问问大家有没有什么成熟的protocol或者buffer recipe。谢谢！ |
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x*******i
发帖数: 32 | 22 Hello There,
We have a protein (pI = 8.9, 10 mg/mL, MW 100 K) precipitated in 10 mM
phosphate buffer (pH around 7) after overnight storage at 4 degree. The
precipitate will be soluble again when warming up solution to room
temperature. Addition of NaCl will prevent precipitation. Other common
buffers are OK not causing precipitate.
Hypothesis is ionic cross-linking. Phosphate ion has intense negative charge
density and working as the cross-linking agent, its multiple negative
charges interact wi... 阅读全帖 |
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b*******7
发帖数: 907 | 23 这玩意貌似挺强大
https://developers.google.com/protocol-buffers/docs/overview
Protocol buffers are now Google's lingua franca for data – at time of
writing, there are 48,162 different message types defined in the Google code
tree across 12,183 .proto files. They're used both in RPC systems and for
persistent storage of data in a variety of storage systems.
Last updated April 2, 2012. |
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he
发帖数: 2025 | 24 "叫King buffer"，哈哈，开店老板以前是德仪的? buffer都出来了
修。 |
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a***a
发帖数: 8941 | 25 先前听人说过有点区别，说是mil spec的比较好，但是忘了到底是什么区别了，为什么
mil spec 的好？
另外，如果把枪上的commercial的buffer tube换成了mil spec，要不要换buffer本身
呢？ |
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a***a
发帖数: 8941 | 26 Great.
I have a bushmaster.I checked their website, and seems all of there ARs
using commercial buffer tube.
I am thinking of convert it to milspec.
Does it mean that commercial and mil-spec buffer tube have the same inner
diameter? |
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j*****I
发帖数: 2626 | 27 "The Buffer pH is merely a measure of how resistant your soil is to pH
change. We use it to calculate the lime recommendation."
我的理解是，相同的soil pH, buffer pH越高，说明需要的lime越少。 |
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s*i
发帖数: 388 | 28 【 以下文字转载自 Programming 讨论区 】
发信人: sci (ence), 信区: Programming
标 题: 那些用buffer overflow来attack的人是怎么计算出要覆盖的内存地址的阿？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 23 20:58:01 2011, 美东)
自己也用过好几个exploit的程序，搞fedora获得root。但是不知道那些牛人们，用
buffer
overflow来attack的人是怎么计算出要覆盖的内存地址的阿？
难道那些heap ram地址不是动态的么？怎么能那么精准的计算出需要覆盖的位置阿？ |
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q**d
发帖数: 16 | 29 My understanding is that buffer/page cache have been unified for a long time
. There is one disk cache now - page cache. disk blocks(buffer) maps to page
cache. |
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g*********i
发帖数: 89 | 30 好像是这样的。
古老的unix都一律用buffer cache来缓存文件系统的所有数据。
modern unix alike的系统都只是用buffer来缓存文件系统元数据，就是指inode,
superblock,block bitmap,inode bitmap之类的数据。
而其他的实际文件数据都是通过page cache来实现的，而实际的管理大多数都是在虚拟
内存管理单元里面完成的。
这种机制好像是从solaris开始的，在sysV中引入的，而sun公司参与了大量的研究。 |
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g*********s
发帖数: 1782 | 31 有这么一个问题：
for (int i = 0; i < n; i ++) {
yyin = fopen(f[i], "r");
try {
yyparse();
}
catch ...
}
这里.y里重定义了yyerror，有语法错就throw一个exception。
现在的问题是，如果f[1]有parse error，之后的f[2]，f[3]等还是从f[1]原来的yylex
buffer里拿token，而不是自己的文件里。
怎么才能在yyerror()里，throw exception之前reset yylex buffer呢？放狗搜了一下
，有个YY_FLUSH_BUFFER的macro，但这个是只在.l里可见的，而.y里不可见。
另外现在还有人用flex/bison吗？很麻烦啊。 |
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s********k
发帖数: 6180 | 32 我知道的buffer overflow都是在stack上作文章，不是heap。比如写个子函
数开个byte a[10],最后用指针指向*(a+11),当然这个是最简单的，不过原理
应该就是这样。
还有就是现在的编译器基本都有功能避免buffer overflow，VC，GCC只需要
在编译选项中设定一下就可以了
人们，用
位置阿？ |
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h********e
发帖数: 12 | 33 请问大家quicktime的buffer overrun是怎么解决的？
quicktime打不开，出错信息显示buffer overrun还有c++什么的，iTunes更打不开，
ipod也联不上。把quicktime和iTunes都重装了一遍，没用。
多谢各位帮忙！ |
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p*****n
发帖数: 981 | 34 ☆─────────────────────────────────────☆
nanomag (笨) 于 (Wed Jan 10 17:19:19 2007) 提到:
我正在试着配1M Tris-HCl pH8 Buffer.
为什么用pH meter测的时候，pH值会慢慢的升高？
从8.0升到了8.17，虽然越来越慢。
究竟哪个pH值为准？
谢谢！
我的pH meter是Acumen的，electrode 是silver/silver combination。
再次感谢！
☆─────────────────────────────────────☆
walnut (凉秋秋) 于 (Wed Jan 10 17:21:24 2007) 提到:
直接买 算了
就买SIGMA公司的
☆─────────────────────────────────────☆
nanomag (笨) 于 (Wed Jan 10 17:28:22 2007) 提到:
我实际上最后要的buffer里面要加KCl,DTT什么。
现在是试试Tris配到pH8要多少HCl。
☆── |
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w******e
发帖数: 1187 | 35 要把买来的purified protein从一种buffer换到另一种buffer
现在用amicon YM-10，recovery rate70％左右。算正常吗？有没有
recovery 更高的column？多谢！ |
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e****s
发帖数: 1125 | 36 IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。 |
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K**********e
发帖数: 188 | 37 前两天有人问过，但是没人回答。我也有这个问题。
跟蛋白有关的buffer里面的盐，多数时候是NaCl，但是nuclear extract经常用KCl，这是为什么呢？
也常常加1mM 的Mg，不过Mg不是protease需要的吗，会不会导致蛋白降解？
更疑惑的是还有同时加Mg和EDTA的，EDTA不是chelate二价离子吗，这样的话不是互相取消了吗。EDTA的目的是什么
呢？
有时候加1mM DTT在buffer里面，有时候又加beta 巯基乙醇。这有什么区别呢？
盼回答。谢谢。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 38 你不如用1x的buffer直接去裂解组织/细胞。加样的时候，孔有多大就多大量sample。
如果嫌蛋白还不够多，就减少buffer用量，以增加蛋白浓度。 |
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d*******d
发帖数: 1341 | 39 实验室两个装buffer的瓶子标签不正确，一瓶实际是1倍浓度的，另一瓶实际是10倍浓
度的，我都按5倍浓度稀释的。就是running buffer浓度是实际的1/5或2倍。已经发现
跑电泳的时间差别比较大了，不知道对实验结果会不会有影响？多谢高人了！ |
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f**e
发帖数: 2160 | 40 10x buffer 和1x buffer, 你把一个往另一里面滴，看折射界面就分出来了
10x的重不少
再有，用枪取1ml弄到天平上称重也能分出来，或者如果有fplc的话，打一点进
conductivity chamber，一看电导率就知道了 |
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s******y
发帖数: 220 | 41 做WB，我用ripa extract蛋白， 用公司commercial的ripa，借用别人配的， 反正没有
带，
反倒是用tris buffer 没问题，
我觉得tris buffer 太弱，膜蛋白搞不出来，可是ripa为啥不work呢？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 42 我用的是不连续buffer系统，内外Buffer不一样，所以肯定不能混起来的。 |
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C******8
发帖数: 602 | 43 可不可以用5x promega passive lysis dilute到1x以后的lysis buffer裂解细胞然后
做western blot或者IP呀？
那个lysis buffer本来是用来测luciferase assay的，我看裂解细胞效果蛮好。不知道
应用在其它地方是不是可以
谢谢 |
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s******n
发帖数: 63 | 44 突然觉得熟悉buffer的特性太重要了......想系统学习一下......但是手头的书籍似乎
都不是很让人满意.......哪里可以查到常用buffer的特性，或者有什么比较好的书推
荐呢？
谢谢~~ |
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D*a
发帖数: 6830 | 45 Quick Tail Prep
Collect 1 mg skin biopsy (= normal size tail or figure tip) in 0.5 ml
Eppendorf tube.
Add 100 microliter of quick tail digestion buffer (below).
Incubate @ 56 C several hours to overnight.
Vortex and incubate @ 99 C, 10 minutes.
Centrifuge @ max speed, 5 minutes.
(NB i don't vortex so i don't need to centifuge the tube, it works)
Use 1-2 microliter aliquot of supernatant for a 25-50 microliter PCR
reaction (or whatever you routinely do).
Transfer supernatant to a fresh tube for s... 阅读全帖 |
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d****d
发帖数: 214 | 46 I use REDExtract-N-Amp Tissue PCR kit from Sigma.First put tail in
Extraction buffer @ RT for 10', then 95 C 3', then add Neutralization buffer
, then the sample is ready for PCR! |
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D*a
发帖数: 6830 | 47 Quick Tail Prep
Collect 1 mg skin biopsy (= normal size tail or figure tip) in 0.5 ml
Eppendorf tube.
Add 100 microliter of quick tail digestion buffer (below).
Incubate @ 56 C several hours to overnight.
Vortex and incubate @ 99 C, 10 minutes.
Centrifuge @ max speed, 5 minutes.
(NB i don't vortex so i don't need to centifuge the tube, it works)
Use 1-2 microliter aliquot of supernatant for a 25-50 microliter PCR
reaction (or whatever you routinely do).
Transfer supernatant to a fresh tube for s... 阅读全帖 |
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d****d
发帖数: 214 | 48 I use REDExtract-N-Amp Tissue PCR kit from Sigma.First put tail in
Extraction buffer @ RT for 10', then 95 C 3', then add Neutralization buffer
, then the sample is ready for PCR! |
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n**8
发帖数: 221 | 49 请问大侠，想裂解cultured cell，然后western blot detect一个核内的蛋白.
用的是RIPA buffer：
150 mM NaCl
1% NP40
0.5% of Sodium Deoxycholate
0.1% sodium dodecylsulfate (SDS)
50 mM Tris
请问这个buffer能破核膜么？（这个蛋白本身的丰度不高）
需不需要超声？
不甚感激！ |
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