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B*****l
发帖数: 1078 | 2 看你什么抗体， cell signal一般建议BSA， sigma 一般建议milk， SC都是milk， 我
一般懒都直接用milk， 个别background 比较高， 别的一般无所谓， 就incubate 在
blocking buffer 里面， milk 也好， bsa 也好， 和这些关系没有那么大， 主要磷
酸化的是sample为主， 你sample处理／冻融上面处理不当， 或者本身表达就就问题的
话， bsa界的hermes 也木有用阿 |
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g********r
发帖数: 93 | 3 上周把1040寄出了，加填了8886和8938.
准备6月30日截止的”Report of Foreign Bank and Financial Accounts (FinCEN
Report 114).“ 今年开始需要在BSA E-Filing System中填写上交，网址：http://bsaefiling.fincen.treas.gov/NoRegFBARFiler.html
因为去年有international transactions, 在8886中也附上了具体的汇款明细。此次在
BSA E-Filing System中，发现了另一份表格”FinCEN Currency Transaction Report
(FinCEN Report 112).“ 有人填写过吗？个人报（不是CPA,公司、律师等第三方）需
要填写这份表上交吗？还是说银行报（financial institution）?
再问下：在中国有账户，有超过1万美元的资金，有国际汇款，除了上面提到的这些表
，还需要报什么材料给什么部门吗？
多谢！ |
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r******k
发帖数: 446 | 4 各位大神 请教个问题，
小弟要要check一个蛋白的磷酸化水平，
1. block 膜的时候 能用5%的milk 吗？ 还是必须要用5%的BSA？
2. incubate 一抗的时候 还需要dilute在5%的BSA吗？ 还是直接TBST也行？
多谢！！ |
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h*******o
发帖数: 4884 | 5 个人经验不是
cell signal的抗体一般product sheet上面都建议BSA
我一直都用 pierce的superblock 目前为止还没有遇到做不出来而BSA做出来的情况
in cu ba te的时候建议用block 的配 直接用tbst 杂带可能会多
一些 |
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s*********y
发帖数: 292 | 6 至少买过30个磷酸化抗体。牛奶和BSA都用过，一般都没啥问题
碰到过一个磷酸化抗体可以和结合牛奶里面的蛋白，杂出来一张黑膜。这种情况下只能
用BSA |
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s*****i
发帖数: 315 | 7 pTyr的抗体必须用bsa block 和 bsa做1抗buffer, 二抗可以用milk
其他的，特别是特异蛋白特异位点的抗体，可以用milk，milk的背景低
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7 |
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n***w
发帖数: 2405 | 8 put BSA powder in PBS solution, no shaking really or anything, just leave in
the fridge for sometime and it will gradually be dissolved.
you can make 22% BSA this way. |
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s******5
发帖数: 293 | 10 今天去实验室，Make 10%BSA in PBS不溶解，发现结块，加热，振摇不管用，咋办？
谢谢回答。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 加热就错了。
记住这个是一个蛋白溶液，加热的话很容易就把蛋白块给变性了，更加溶解不了。
一般而言，溶解BSA最好的方法就是楼上说的那种，就是把蛋白粉倒在溶液顶上，然后
用保鲜膜裹起来放在4度过夜。
注意加蛋白的顺序不可以颠倒，一定要先加溶液再加蛋白，千万不能把溶液直接倒在蛋
白粉上！ |
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s******5
发帖数: 293 | 12 实验室现有的
RPI公司的化学纯的BSA（纯度〉96%）能用于ELISA实验？
还是一定要用ELISA Grade？ |
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n*****e
发帖数: 40 | 13 需要做Poly(ADP-ribose) 和BSA蛋白的conjugate
请教这么合成？有现成的modified的Poly(ADP-ribose）卖吗？ |
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h******d
发帖数: 4761 | 14 http://www.natchezss.com/specials.cfm?contentID=topSellers&cate
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G*******E
发帖数: 566 | 15 The rumor is the whole company was blocked with certain illegal transactions
by FDIC
..
http://www.sec.gov/Archives/edgar/data/1295401/0000950159140003
The Bancorp Bank (the “Bank”), a wholly owned subsidiary of The Bancorp,
Inc., entered into a Stipulation and Consent to the Issuance of a Consent
Order (the “Order”) with the Federal Deposit Insurance Corporation (the “
FDIC”) which became effective on June 5, 2014. The Bank took this action
without admitting or denying any charges of unsafe or ... 阅读全帖 |
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c*********o
发帖数: 1734 | 16 I will recommend the first three responds with the right background to the
editor.
There is no guarantee you will be picked by the editor. If you reviewed for
this journal before, do not email me.
Send email to c*********[email protected] with the following information:
You official name
Your degree
Your official organization
Your business email address
You business title
And brief introduction of your background.
Most important: register with IJP as a reviewer with your business email
address before ... 阅读全帖 |
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w*****8
发帖数: 703 | 17 More bad news for the Boy Scouts of America (BSA), as a major donor has
announced plans to sever funding to the organization on account of a
controversial anti-gay policy.
The United Parcel Service (UPS), Inc. will soon adopt a non-discrimination
policy that disqualifies the BSA from future funding, the Gay and Lesbian
Alliance Against Defamation (GLAAD) reports. UPS follows the Intel
Foundation in withdrawing corporate sponsorship from the BSA, GLAAD
officials note in an email statement.
"UPS a... 阅读全帖 |
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L**********n
发帖数: 813 | 18 去年的旧闻
Utah Boy Scouts fundraiser kicks off — with high-pressure tactics
In 2009 amid the recession, the Great Salt Lake Council of the Boy Scouts
saw its revenue plummet nearly $400,000 below projections, forcing it to cut
13 full-time jobs to make ends meet. Income was lower in every category but
one —Â the annual Friends of Scouting drive that seeks donations.
The Friends of Scouting campaign that is successful even in hard times here
is conducted differently in Utah than in most of the ... 阅读全帖 |
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O*******d
发帖数: 20343 | 19 The Bank Secrecy Act of 1970 (or BSA, or otherwise known as the Currency and
Foreign Transactions Reporting Act) requires financial institutions in the
United States to assist U.S. government agencies to detect and prevent money
laundering. Specifically, the act requires financial institutions to keep
records of cash purchases of negotiable instruments, and file reports of
cash purchases of these negotiable instruments of more than $10,000 (daily
aggregate amount), and to report suspicious activ... 阅读全帖 |
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b*****d
发帖数: 61690 | 20 据美国中文网10月18日援引《洛杉矶时报》报道，美国俄勒冈最高法院18日公布了美
国童子军对组织内部儿童犯下的性侵丑闻，揭发了这个全美最大少年组织从1960年代初
到1985年间上千份性侵秘密档案。这是数十年后美国童子军首次公布性侵档案。
报道称，俄勒冈最高法院在多家新闻机构提出请求之后，6月下令公布那些档案。
此案原告律师之一克拉克(Kelly Clark)的办公室于18日公布了1247份尘封已久的档案
，并抹去了受害者或者其它检举者的名字。
“秘密终于暴露。”克拉克说，儿童性侵犯因为保密而泛滥，而秘密体制是那种犯
罪繁殖的温床。现在这些秘密全都曝光。
报道指出，美国童子军总会(BSA)从1919年开始建立仅供内部使用的“不适任档案
”，详列疑似或已证实的性侵案件和性侵者，以防有恋童癖者重回该组织。在这些档案
中，有逾500个“不适任档案”显示，BSA透过童子军、家长、员工或匿名线报得知内部
疑似性侵案件，其中多达8成案件从未向警方通报。还有100个档案显示，BSA主管主动
掩盖罪行，并协助嫌犯保密。
据报道，随着法院下令公布性侵档案，这个拥有400多万名会员的组织形象恐遭重
挫。 |
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s*******g
发帖数: 689 | 21 中国即将执行一项要求外国科技公司公布敏感信息的新政策，目的是阻止在中国进行的
外国间谍活动。美国科技公司目前正加紧努力对这种即将到来的限制予以反击。
代表科技行业大部分领域的17个贸易组织周三写信给美国官员，要求他们向中国政府施
压以改变这项新政策。这项新政策的内容包括强迫公司向中国官员提交专有软件的源代
码。
这封写给国务卿克里(John Kerry)、财政部长卢(Jacob J. Lew)、商务部长普里茨克(
Penny Pritzker)及其他官员的信称，这项新政策将给试图向中国市场出售技术的美国
企业带来长期损害，中国市场的规模估计约为4,650亿美元。
这封信要求美国官员立即与中国政府进行交涉，以改变这项政策并停止执行。
这些贸易组织上周五还写信给中国官员表达了它们对限制政策的反对。记者周四无法联
系到中国官员置评。
这些组织的代表没有立即回复置评要求。
原美国国家安全局承包商雇员斯诺登(Edward Snowden)此前向外界泄漏了美国政府的情
报收集策略，中国提出的限制性措施表明该事件所披露的信息仍在产生影响。在斯诺登
曝光的一系列秘密中，他指控美国有关部门窃取了中国数以... 阅读全帖 |
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m******1
发帖数: 19713 | 22 The Boy Scouts of America has lost its largest corporate donor, Intel, which
announced today that it will stop giving to the group unless it vows to
stop discriminating against gay people.
The Intel Foundation was identified in an investigation by The American
Independent, which was also posted by The Advocate, as having given about $
700,000 in 2010 to the Boy Scouts. It was by far the largest share of
corporate giving, with the Verizon Foundation donating more than $300,000
several big banks r... 阅读全帖 |
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m******1
发帖数: 19713 | 23 A petition was delivered Tuesday morning to the Boy Scouts of America's
board members, urging them to change the national policy barring openly gay
scouts and troop leaders.
Both gay and straight scouts and leaders delivered a bundle of several
petitions, totaling 1.4 million signatures from Americans who weighed in on
the policy, according to GLAAD. The petitions were handed off to board
members at the the BSA's Irving, Texas, headquarters, where the policy is
one of the chief concerns during a... 阅读全帖 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 24 actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，保证它与奶粉和普通bsa不兼容。
下面有两个选项可以尝试一下。
1）改用licor专用blocking buffer试一下。
2）改用别家二抗试一下。（rockland, invitrogen等公司都有比较成熟的红外荧光二
抗）。
2个选项交叉试一下，一共4种条件（含原先二抗-奶粉组合）。有了这四种对... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 25 这个sample本身就比较稀，第一条lane已经是1:5稀释，后面是1:25, 1:125稀释。
所以western 本身的问题应该不大，主要是想看看在我手里ECL和Odyssey哪个好使，
可能二抗和blocking buffer都不够好，所以我这个看起来Odyssey比普通ECL要弱上
几倍。
actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，... 阅读全帖 |
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b******k
发帖数: 1874 | 26 I am writing to ask for help.
I am using Miltenyi anti-NKp46-biotin-bead- MS column kit. The first step is
to get splenocyte from spleen by gentlMACS without enzyme treatment. A very
simple protocol, just put spleen into the PEB buffer and let gentleMACS run
m_spleen_01 program once, and filter, spin, aspirate, resuspend the pellet.
The problem comes from the resuspending process. The small tight pellet will
produce(or contain) big clump that is almost impossible to break when 10 ml
PEB buffer i... 阅读全帖 |
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m**********d
发帖数: 137 | 27 IHC及IF显示蛋白A在tumor cell的细胞核里高表达，蛋白A的canonical function是与
蛋白B bind并激活B。一些preliminary data提示蛋白A有新的功能，就是与蛋白C
bind而调控另一个重要的生物过程。
现在需要得到A与C直接作用的证据，下面这个用Dynal magnetic beads做CO-IP的
protocol：
10μl Dynal beads coated with protein A+10μl Dynal beads coated with
protein G each reaction, wash with ice cold PBS plus 5% BSA, three times.
Incubate with antibody against 蛋白A (20μl, approximately 4μg) in 500μl
PBS plus 5%BSA, overnight.
2^106 cells/10cm plate, treatment (which induces A and C interaction while
... 阅读全帖 |
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M*******C
发帖数: 183 | 28 不知道在大家手上work的怎么样？买过好几种抗体。
在我手里，trouble很多啊，要么一堆杂带，没有特异带；要么背景很脏很黑，也看不
到特异带；要么带是白色的，并且结果也不是想要的。而类似的问题，我handle其他公
司的，失败率没这么高。测同一个蛋白，abcam的很好用，clean，结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢，公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的，很不一般，大家觉得合理吗
Block： 5% Milk TBST （他们说不能用BSA)
一抗： 5% BSA TBST 稀释
二抗： 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block， 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的， 有的抗体，即使完全按照他们的说法，甚至他们寄来 positive ctrl
， 也不work， 而他们的positive ctrl， 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不w... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 29 最近做一个DNA damage的实验，就是用H2O2来诱导Hek细胞基因组oxidative damage；
然后用FPG这种能识别8-oxoG的酶来切，被切的基因组位点会产生nick，阻碍PCR
polymerase，基于这样的原理做qPCR定量来研究某段序列对于oxidative damage的反
应。
好像这种做法比较少见，大部分DNA damage的研究都是global的。但也有很好的先例比
如：
http://www.nature.com/nature/journal/v429/n6994/abs/nature02661.html
这篇经典的Nature 文章
我按照这篇文章的做法，把genomic DNA进行FPG overnight digestion （DNA+FPG+Neb
buffer+BSA），同时也做了mock control（DNA+水+Neb buffer+BSA），然后qPCR发现
Ct如下：
DNA：25
DNA+FPG+buffer：28
DNA+水+buffer： 28
让我惊讶的是，相比于纯DNA，mock control的DNA+水+buffe... 阅读全帖 |
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a*****8
发帖数: 38 | 30 Position: Chief Engineer
Direct Report to: R&D Director
Work Location: Shanghai
Position purpose:
• We are looking for a technical expert with the position of Chief
engineer, in the design of Base Station Antennas and related research.
Responsibilities:
• Has design/research experience in BSA(Base Station Antenna) and
can provide technical direction to help RF engineers solving technical
issues.
• Can provide technical training to application engineers a... 阅读全帖 |
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K*****2
发帖数: 9308 | 31 这一次，在舆论上盗版取得了对正版的绝对胜利。
http://cn.engadget.com/2015/11/26/czech-piracy-youtube-views-se
这位网名为「Jakub F」的三十岁男子，是捷克第一位被定罪的盗版软件散布者。他对
软件开发者的赔偿金额高达 570 万捷克克朗，因为金额实在太高，商业软件联盟（BSA
）想到一个绝妙的点子 -- 做为和解的条件，他将付一笔小多了的罚款，而剩下的部份
则是要求他拍一部宣导反盗版的视频。这部视频必须要在 YouTube 和 Facebook 上被
看到总计超过 200,000 次，否则他还是必须付全额的赔偿。
虽然这部制作超专业的视频是捷克语，但网友依然是蛮捧场的，到截稿为止光是
YouTube 就已经超过了二十万次的点阅（所以已经得救了？）。在视频中，他坦承：「
我不觉得我做的事有什么不对的。我以为这样做对大企业的伤害不大。我甚至不是为了
钱而盗版，只是为了好玩。在散布盗版的同时，我觉得我在盗版软件的社交中有了存在
的价值。我深信像我这样一条小鱼不会引人注意，但终究他们还是找上我了。就算是我
这样的普通人，同样会被... 阅读全帖 |
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M******a
发帖数: 6723 | 32 最书房 最书房 微信号 SHUF0008
功能介绍
中国青年的思想前线
戳蓝字“最书房”关注我们哦！
来源公众号：静说日本（jingshuoriben）
全世界关注的二十国集团（G20）大阪峰会，已经圆满落下了帷幕，作为东道主，日本
此次收获颇丰，
特别是在中日关系上，这一次安倍格外主动，甚至还为中国破了例。
27号会议刚开始，面对在场的美国、法国、俄罗斯、印度等这些日本盟友的领导人，安
倍一般都是要先和他们打打招呼，碰碰面，
可这一次，安倍却直接无视了他们，把和中国领导人的会面，安排在了所有人之前！
两国领导人一见面，安倍就邀请中国领导人明年春天对日本进行国事访问，中国领导人
原则接受邀请。
日本为何突然如此重视中国？在近10年里，中日关系可谓是一波三折，此次安倍主动邀
请中国领导人明年春天对日本进行国事访问，预示中日关系上，日本开始正视中国的强
大，想搭上中国发展的顺风车。
中日关系，迎来历史性变局！其实，近10年里，在历史的恩怨与现实利益的博弈下，中
国综合国力大幅超过日本，许多国人的心态也发生了微妙的变化，虚骄之气盛行，今天
拳打日本，明天脚踢美国！
这种愤青心态不可取！
虽然... 阅读全帖 |
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q**d
发帖数: 1470 | 33 看看LZ旧帖就知道了： 应该是个新移民，不是老邢机器人
guozidecar的文章
文章标题 文章版面 日期
1 修车 进去说好$1200 出来却要$3800 Automobile Aug 28
2 求购UA里程 FleaMarket Apr 20
3 求推荐儿童牙医，rockville, gaithersburg, bethesda, MD 附近
NextGeneration Apr 09
4 BSA E-Filing System TAX Apr 03
5 [+] wuxiang FleaMarket Feb 24
6 已买到 全部 UA 里程 FleaMarket Feb 16
7 新移民报税，求推荐DC附近税务师 TAX Feb 24
8 求助Health Insurance填表 Medicine Oct 03
9 需购买 96K UA里程 BackHome Jul 27
文章标题 文章版面 日期
1 Re: ... 阅读全帖 |
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l**********9
发帖数: 716 | 34 简单啊，因为他根本没料到你不知道童子军是怎么回事啊
来wiki一下： The Boy Scouts of America (BSA) is one of the largest youth
organizations in the United States, with more than 2.4 million youth members
and nearly one million adult volunteers.[2] Since its founding in 1910 as
part of the international Scout Movement, more than 110 million Americans
have been at one point or another members of the BSA.[3]
我就不加link了，省得又让人当广告，不过根据版主的理论，这好像还是有给wiki做广
告的嫌疑 |
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s********n
发帖数: 650 | 35 BSA (Buddhist Study Association) will hold a potluck party this friday (Sep. 24th) to celetrate the traditiaonl Mid-Autumn Festival.
印大佛学社将于本周五举办中秋聚餐 欢迎大家参加！
The following is the schedule for the activity of BSA on this friday night (Sep 24th, 2010).
Part 1 (7:00-8:30Pm):
Potluck Party 聚餐
Part 2: (8:30-10:00pm)
Movie: Peaceful warrior 电影欣赏：和平战士
If you're interested, please join us at Jeff's home on friday night.
If any |
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G***Y
发帖数: 9698 | 36 法拉盛购物中心今日结束营运
发布于 2015-01-30,周五 03:00
【侨报记者邹斌1月29日纽约报道】传闻多年拆卸重建的法拉盛购物中心(Flushing
Mall)即将步入历史舞台，项目开发商美国富顿集团宣布将在本月30日正式结束运营，
预计所有商户在2月1日之前搬离购物中心。
富顿集团也确认，将在购物中心原址建设四栋高16层的全新现代化商住综合体。该
项目被誉为“富顿二号广场”，该项目将致力打造成法拉盛市中心未来标志性的核心区
域。
富顿集团在声明中表示，美国富顿集团已经向纽约市标准和上诉委员会提交将法拉
盛购物中心用地改建为全新综合用途的商主体计划，希望法拉盛市中心带来新的开发愿
景，包括新兴购物中心与商业机会，提供众多的就业计划，住宅单位和公共设施。
声明中提到，法拉盛购物中心将于1月30日结束营运，预计所有现仍运营的商家将
在2月1日前完成搬迁，商家的租约均为每个月签订更新，并均已经得知购物中心即将改
建的讯息。声明中最后提到将与市政府官员合作，确保新的开发计划顺利进行，新的发
展计划将定名为富顿二号广场。
现址法拉盛购物中心是两座总面积15万平方呎的商场，由富... 阅读全帖 |
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s****r
发帖数: 31686 | 37 买了只vortex db
根据版友的信息， 研究了BSA， 然后去opticsplanet和销售网聊了几把， 销售说
simmons不错。 又去看simmons.simmons这镜子很有意思， 很多人说好， 但是吐槽的
就吐得很厉害。
最后来闯到一个老外的论坛， 一看心寒了， 一堆人聚在那里骂BSA，还有SIMMONS啥的
也跟着挨骂。 刚才想把那个链接找出来， 找不到了
算了， 不折腾， 就买了个vortex db， 应该幺蛾子少些
最后， 算是一个小TIP， 我买之前搜索了一把COUPON， 找到一张5%， 省了11 |
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s****r
发帖数: 31686 | 38 看网站， BUSHNELL的是做的比BSA 啥的强， BSA啥的山寨味太浓郁 |
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g****g
发帖数: 1828 | 41 Scoutstuff.org has Scout Gear marked down considerably. Save an additional
20% with codeDM6738. Shipping starts at $7.50. Thanks TennesseeJed
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f***r
发帖数: 204 | 42 还在与PVDF战斗中，再次请教有经验的虾们：
终于看到了条带，但是巨多非特异带，比我要的带都强得多。在网上查到多家western系
统的trouble shooting，里面提到的好几条关于high background的建议让我大开眼界，
又困惑非常，因为矛盾很多：
1. 关于tween的使用：有一家建议blocking之后才用tween，否则tween会stick to the
membrane and cause high noise；但很多常规方法都没有提到这一点。
2. 关于blocking reagents和ab incubation buffer：有说dry milk能reduce
sensitivity，所以如果只用在二抗incubation就能很好降低noise，但也有很多全程用dr
y milk的，也有说dry milk与tween联合使用会提高noise的；有说BSA会造成高背景的，
也有说用BSA可以获得理想信噪比的……
3. 关于ponceau s染色：这次为确证transfer有效，用了ponceau s染色，但发现有资料
说ponceau s就算洗干净也会 |
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w******e
发帖数: 1187 | 43 I used native PAGE gel. I kinda hesitate to use competitors as I
don't know how that would affect aptamer band formation (e.g., would
there be an aptamer-BSA band if I add BSA?).
I also suspect oligomer, but even that can't explain why all my
aptamers are sucked onto it...@@
BTW, I actually tried doing ELISA against the same target using
biotinylated RNA, and that worked out fine. |
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m**z
发帖数: 787 | 44 个人认为，bradford类似的方法，都用BSA做standard,这样必须assume BSA behaves
the same as your protein.所以难以用来测蛋白的绝对浓度。我见过Bradford结果和
蛋白实际浓度相差2、3倍的。
感觉楼住的问题是要reproducible results.nanodrop在这点上有时候是不怎么的。。
其实bradford 或者其他方法要reproducible results的话，都是可以做到的，当然要
正确操作以及稳定的仪器。但如果要精确定量蛋白的绝对浓度的话，我觉得这些方法都
不是很好。UV-vis是相对好些的方法，它的assumption是，你的extinction
coeffecient计算正确（通常网上一些工具的结果还是可以的）。还有就是蛋白纯度要
好。这样虽然也有误差，会比bradford好很多。
当然，前面提到的amino acid analysis最好了，不过要特殊的地方才能做。
所以，UV-vis (A280) with calculated coeffecient可能是比较方便的，比较折中的
可以给你相对可靠... 阅读全帖 |
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l*****r
发帖数: 131 | 45 楼上说得对，关键看你的抗体是不是在可溶部分。如果沉淀的是你的抗体，不妨试试2M
Arginin pH4.3，我试过洗脱效果比pH2.5要差点，但还行。另外还有个idea，如果BSA
在Glycine里不沉淀的话，加点BSA试试。如果这个办法可以能给我发个消息吗？祝好运。 |
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A*********r
发帖数: 8271 | 46 问题可能很蠢，请多包涵。
问的是cell-bound receptor system定量ligand的含量。我想大致就是ligand可以跟细
胞上特异受体结合，然后用competitive radio-labled ligand定量。对么？
具体操作的话，ligand和受体结合以后，如何洗去多余的受体呢？是不是也象做
western blot一样，加入BSA，把没结合ligand的位点都block掉？加入放射性标记的竞
争性配体之后，如果前一步用的是BSA会有影响么？
谢谢。 |
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c**********6
发帖数: 1173 | 47 最近在做一些很简单的PCR。就是来amplify一些大概200mer的DNA library。
发现做完PCR以后总是会在管子里面发现好一些白色的沉淀。感觉这个很像是蛋白质，
但是我的template是合成的DNA，不存在蛋白质。难道这些沉淀是polymerase或者
buffer里面的BSA什么的（如果有BSA的话）
用的是Stratagene的Herculase.大家有类似的经验么？
谢谢 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 48 我们用cell signaling的比较多.它要求用BSA就用BSA,要求用MILK, 就用MILK.一般都
是放在-20度保存.反复冻融问题不大.至多到时候随心所欲,再稍微加点抗体进去就是了. |
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b******r
发帖数: 111 | 49 Note: NHEs is membrane proteins that transmembrane 12 times. NHE5 is
localized to the plasma membrane;NHE6-9 reside on organellar membranes(
endosome,Golgi);
1. pcDNA transfects NHE5-9 through Fugene 6(ratio is 3 uL of Fugene/2 ug of
DNA) in 293 cells. After three days,collect cells.
2. Cold PBS washes cells. Add 150 uL of lysis buffer(final concentration:
50mM Tris pH7.4, 150mM NaCl, 1% triton, 0.1% sds, cocktail inhibitor)
into each well of 6-well plate. Scrape cells.
3. The lysate gets st... 阅读全帖 |
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