O******e
发帖数: 4845 | 1 ☆─────────────────────────────────────☆
toptip (老君) 于 (Mon Dec 11 19:21:54 2006) 提到:
刚看到有人讨论做protein interaction。把我最近碰到的几个问题贴这里一下，跟很
多周围的人讨论了也说不出所以然，人多力量大，也许这里有朋友能指点一二。
1 一个蛋白western有两条特异的带，其中一条带是预测的分子量大小，另一条大35kd
。不可能是alternative splicing，不可能是alternative start codon；用DTT或H2O2
处理，条带不变；不可能是糖基化和sumolation。大家说说还可能是什么？
2 另一个蛋白用交联剂交联后从cell lysate纯化，除了自身的带之外有两条shift的带
。打质谱后大的shift条带里有一个已知的结合蛋白，小的shift 35kd，死活打不出新
的蛋白。大家解释一下？
3 做以上两个蛋白的gel filtration。 从第一个fraction到最后一个fraction都有这
两个蛋白分布，量还比较均匀。理论上 |
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d********f
发帖数: 43471 | 2 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: zhoumaomao (周毛毛), 信区: Biology
标 题: 被坑惨了，看看我这还做得下去吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 10 16:09:50 2013, 美东)
博后搞了个新field，虽然比较陌生，但是做着做着觉得做不下去啦！老板很老，以
前80年代90年代早期靠钓新基因发家的，整了一堆蛋白放那里。看看别人有什么新发现
，就拿出来再做一做。我目前做的这个蛋白，在此叫做A，在02年吧，有个牛人在其有
五六十页的专利的一个table里面列出来，说这个蛋白在一类淋巴瘤细胞里面表达量高
，估计跟这类淋巴瘤关系密切。应该是根据microarray得到的data来推论的。但是之后
牛人发了好多paper，关于这类淋巴瘤的，转录因子，蛋白激酶，做了一大堆，也测了
很多microarray 和RNAseq的data，但就是在其文章中找不到关于我做的这个蛋白A的只
言片语。我的老板写的grant，跟这个牛人实验室独立出来的一个老postdoc合写的，里
面有张WT电泳图要显示A在这类淋巴瘤细胞系里，相对... 阅读全帖 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 3 还有你induce你的细胞之后，有没有直接看细胞 表达蛋白的mw? 如果是35kd,纯化后变
成20kd那就是纯化过程中的问题
了。
His |
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p****s
发帖数: 3153 | 4 我觉得大小不成问题...但是能做那么高温度的NMR仪器估计不好找，问问你所在学校吧
70-90C的条件下，蛋白转得很快了吧，35kd应该很合适。NMR可以做很高分辨的东西，
比如CPMG可以做每个残基的动
力学变化。我觉得关键还是有没有能做这么高温度的仪器。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 5 我们最近在侧cyclin D1 的时候，抗体测出了一个35kD的弱带和一个 50kD 的
强带，而且这两条带在不同的处理里面变化还是不一致的。
想请问一下，那个50kD的是否是已知的磷酸化的cylin D1的形式？
谢谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 我们也觉得很奇怪。
但是那个50kD的带很强，比35kD的强得多。
抗体是 Santa Cruz (sc717) anti-cyclin D1
不知道cyclinD1 immunoprecipitation 是否好做？
如果好做的话我们拿去做一下Mass Spec |
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i*******n
发帖数: 48 | 7 some stage of necrosis show Annexin V-PI+ staining
Annexin V 是35KD的蛋白
PI是小分子染料
他们对于膜的通透性的要求是不一样的 |
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z********o
发帖数: 137 | 8 博后搞了个新field，虽然比较陌生，但是做着做着觉得做不下去啦！老板很老，以
前80年代90年代早期靠钓新基因发家的，整了一堆蛋白放那里。看看别人有什么新发现
，就拿出来再做一做。我目前做的这个蛋白，在此叫做A，在02年吧，有个牛人在其有
五六十页的专利的一个table里面列出来，说这个蛋白在一类淋巴瘤细胞里面表达量高
，估计跟这类淋巴瘤关系密切。应该是根据microarray得到的data来推论的。但是之后
牛人发了好多paper，关于这类淋巴瘤的，转录因子，蛋白激酶，做了一大堆，也测了
很多microarray 和RNAseq的data，但就是在其文章中找不到关于我做的这个蛋白A的只
言片语。我的老板写的grant，跟这个牛人实验室独立出来的一个老postdoc合写的，里
面有张WT电泳图要显示A在这类淋巴瘤细胞系里，相对与之对应的另外一类淋巴瘤细胞
是高表达的。蛋白A有100kd左右，但是这张WT的图显示的带在35KD左右，他们解释为是
B的特异性降解带。图好像是故意调过的，突出了他们想要表达的意思。我自己专门验
证过，A的蛋白水平并不是在这类淋巴瘤细胞系的每种细胞表达量... 阅读全帖 |
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z********o
发帖数: 137 | 9 博后搞了个新field，虽然比较陌生，但是做着做着觉得做不下去啦！
老板很老，以前80年代90年代早期靠钓新基因发家的，整了一堆蛋白放那里
。看看别人有什么新发现，就拿出来再做一做。我目前做的这个蛋白，在此叫做A. 在
02年,有个牛人在其有五六十页的专利的一个table里面列出来，说这个蛋白在一类淋巴
瘤细胞里面表达量高，估计跟这类淋巴瘤关系密切。应该是根据microarray得到的data
来推论的。但是之后牛人发了好多paper，关于这类淋巴瘤的，转录因子，蛋白激酶，
做了一大堆，也测了很多microarray 和RNAseq的data，但就是在其文章中找不到关于
我做的这个蛋白A的只言片语。我的老板写的grant，跟这个牛人实验室独立出来的一个
老博后合写的，里面有张WT电泳图要显示A在这类淋巴瘤细胞系里，相对与之对应的另
外一类淋巴瘤细胞是高表达的。蛋白A有100kd左右，但是这张WT的图显示的带在35KD左
右，他们解释为是A的特异性降解带。图好像是故意调过的，突出了他们想要表达的意
思。我专门验证过，A的蛋白水平并不是在这类淋巴瘤细胞系的每种细胞... 阅读全帖 |
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m***u
发帖数: 39 | 10 A：250KD
B: 35KD
用小分子量的B去拉大分子量的A是否可行？还是反过来容易些？
先谢过 |
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