s******y
发帖数: 28562 | 1 对的，因为假如是100ul的上样环，注入200ul样品的话就会有100流到废液
里面去了。所以在你的情况下只好用1ml的环了。
有的人会采用先注射100ul，上得差不多之后停止走柱再来100ul，
但是这种方法很不好掌握，我强烈不建议。
最后，一般原则是注入体积尽可能要和环的大小接近，比方说如果你只有50ul
的话，如果用1ml的环，在注入过程中就会由于液面的扰动而被稀释。 |
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H****s
发帖数: 301 | 2 (1). Coat your 96 well plate with NeutrAvidin or streptavidin, 1ug/well,
100ul/well. Let sit O/N in the fridge or 1 hour in the 37 degree incubator.
(2). Biotinylate your whole cell protein using Pierce EZ-link biotinylation
kit.
(3). After coating the plate with NeutrAvidin or streptavidin, wash once
with 1XPBS (200ul/well). Block with blocking solution (1%BSA, 1% milk, 200ul
/well). Room temperature, 30 minutes to 1 hour. After blocking step, dump
all blocking solutions.
(4). Then add your bio... 阅读全帖 |
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T**********r
发帖数: 287 | 3 之前用24 well plates+martrigel:
1.100ul cell suspension + 100ul matrigel,放在24 well plate里，on ice 10 min.
2.37C for 30 min.
3.Add 4% PFA, fix for 30 min.
4.Immunostaining.
这个protocol有两个缺点：
a. 过程中细胞损失太多，2000 cells 最后剩下不到200.
b. 在martrigel厚的地方的cell没办法被抗体lable.
希望大家指点一下。 |
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l********s
发帖数: 70 | 4 我做的是tissue，至于具体多少细胞不敢确定，只能用input 来确定。 我觉得应该有
binding区域吧，histone的，很global的。 谢谢，
我是500ul lysis buffer 后 sonication，
然后吸出100ul lysate 再加900ul dilution buffer。
用agarose G洗过后，从1000ul 里抽出100ul 做IP， 100 做IgG 100做target。 别的
保存，不知道这样行吗？谢谢 |
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b*****s
发帖数: 169 | 5 做酶切鉴定或是测序，我从来不用kit，效果是good enough，已经测序有近2000个样品
了。只有做转染才用kit。
我的方法是挑菌落到1ml LB in 1.5ml eppendorf tube, culture for 16h, 吸取50-
100ul culture in 96-well plate 放在4oC 用于以后正确克隆的扩大培养。离心
13200rpm for
0.5min. The pellet is resuspended in 200ul P1, then P2, then P3, spin at
13200rpm for 15min after stored at 4oC for 30min. add equal volume
isopropanol to the supernate in a new tube, spin for 15min, wash with 70%
ETOH. 然后溶于50-100ul水或是TE即可，浓度在150ng/ul 左右。一天做96个克隆是不
难的。
这种样品测序时我试过两个公司，同一样品，genewiz可以得到23个有用的... 阅读全帖 |
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x**********h
发帖数: 36 | 6 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
ｙ．
同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
下！ |
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y********r
发帖数: 241 | 7 我想测泥水土混合物（以水为主，固体含量~3%）中的氯苯类物质的含量（单氯苯到四
氯苯），因为样品量比较少（1ml），而且估计氯苯大都在泥土里，水相浓度应该很低
，所以初步的想法是用hexane萃取然后用HPLC-UV检测。但是不太确定用什么流动相可
以和hexane互溶（固定相是C18柱）。而且我的样品可能浓度不大，所以想进样量大一
点（100ul）以保证能检测到。看到有人论文里是用60:40的乙腈：水，但是我试了一下
，至少1ml的这种流动相跟100ul的hexane是不互溶的，所以想来请教一下,用这种流动
相会不会有问题，比如hexane被堵在柱子里不容易流出？有没有别的更好的流动相选择？
另外一个可能的方法是用GC-ECD来测，这样的话hexane提取液进样倒没什么问题，但是
ECD对单氯苯的检测限太高了，测不出来。用FID会不会好一点？但是用FID的话，有机
溶剂的峰又会太大，好像也是
个大问题。不知道有没有人熟悉仪器分析的可以指点一下？多谢：） |
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b*********1
发帖数: 1054 | 8 没谁骂发文章，我自己做基础研究，也发文章啊。文章是为了拿结果跟同行交流，而不
是现在国内弄成如此功利。从而造成作假很多，从而使科研走入歧途。世界一流的研究
组，不是以灌水文章为自豪的，即使这些文章是CNS. 国内的生物研究确实走向歧途了
，正如大家所言，生物研究的各类仪器都进口，摇床这么简单科技的东西都做不好，抗
体100uL，我们这儿买400米远，国内更贵，可是国内的研究组都从米国买。
米国卫生部投很大资金，可是肉烂在自己锅里，因为耗材都是米国为主，这些钱还在米
国循环。可是国内生物医学的资金，除了灌水文章，耗材这一块几乎贡献给全世界，我
们国力难道雄厚到要这么浪费吗。
高校里兢兢业业教学的老师基本被边缘化，尤其是青教。老教师学校还立几个所谓的教
学标兵作个样子，可是年轻人没有文章基本寸步难行，光搞教学，连学生都功利地看不
起你，更不要说提职称了。我一个师姐，我十几年前出国时就是讲师了，一心教学，也
得到学校的教学奖，现在40好几还是讲师，没办法现在回头弄文章，想到我实验室访学
一年看能不能帮她弄两篇文章。这就是文章一刀切造成的恶果。发文章是为了什么？这
一点科技部教育部要深思，不能... 阅读全帖 |
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i****w
发帖数: 38 | 9 看了txsky的帖子，我有些想法:
1. 首先还是要感谢你的那些建议，非常的中肯，我本人也确实像biglizheng说的不够
圆滑，这么多年了一直在改，修行还是不够。但是，我已经在其他的帖子中说了，系里
在我跟台湾老板发生不愉快之前就通知ISO hold住了我DS2019的renew申请（我能肯定
台湾老板参与了，至于印度老板参与与否，我不知道），所以不管当天的不愉快发生与
否，他们总是还会找机会的。而且事件发生的当天，是实验室唯一一个硕士生有课的一
天，他只在每周二上课，你不觉得太巧了吗？
2. 我想强调的是，自始至终我并没有跟台湾老板争吵，但当时实验室只有我们两人，
没有人可以作证。另外，他老婆直接指导我的实验，事无巨细，她是assistant
research professor，我觉得她是我的supervisor，跟她打招呼出门没有什么不可吧？
所以，在最后跟印度老板和台湾老板meeting的那天，我明确指出了这两条指控是不正
确的，是荒谬的，当时台湾老板一句话没有说。
3. 他做科研我是一直很佩服的，我在加入他们实验室的时候就说这也是我做决定的因
素之一，甚至就在最后meet... 阅读全帖 |
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a***a
发帖数: 40617 | 10 pGEX?
本来这个yield就不高,我每次为了测个序,都至少要从10ml overnight culture里小抽
有关不表达的问题,建议你所有clone(一个construct做8~12个),先煮菌,然后挑阳性的
用1ml small scale 测试表达情况,简单做法是
overnight culture,1:100稀释到1ml LB中,37度,3hr,然后用终浓度0.2~1mMIPTG
induce
37度3hr,然后取100ul,离心,扔掉90ul上清,加10ul 2xSDS loading buffer,不用重悬
直接煮10min,跑胶
有的时候这种条件可能表达时间不够看不出来表达,就要用更麻烦的small scale
就是2ml体系,其他都一样,但是要37度养到od 0.3,然后换18度养到od 0.6,再induce
induce后用18度,200rpm,overnight(8~16hr),然后再看whole cell蛋白看有没有表达
如果上面两个都没表达,基本上就没啥希望了 |
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i*********0
发帖数: 915 | 11 1 million cell for staining, how much PI should be added?
I used the PI stock solution with concentration of 1mg/ml?
some protocol says using 10ul from the stock, some say 100ul from the stock. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 12 听起来是很慢。
我用GE的viva-spin，5K的mwco，从100多ml浓缩到1ml左右也就一天。会不会体积越小
越不好浓缩？我知道vivaspin的话，是有dead stop volume的，是为了防止样品浓缩干
，所以最下面没有滤膜，样品如果少的话，那么能利用的有效滤膜面积也就少了。
不过我从来没试过浓缩到100ul那么低，不知道是不是这样。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 13 滴在滤纸上.用铅笔画个圈.干后,装双层信封.邮寄.
收到后,把小圆圈剪下,放在炮弹管里,用100ul洁净水浸泡半小时以上.吸出含质粒的水.
放-20C保存.以备transformation. |
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b****y
发帖数: 81 | 14 非常感谢！
我觉得把滤纸再用塑料薄膜封一下会不会更保险一点？
滴在滤纸上.用铅笔画个圈.干后,装双层信封.邮寄.
收到后,把小圆圈剪下,放在炮弹管里,用100ul洁净水浸泡半小时以上.吸出含质粒的水.
放-20C保存.以备transformation. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 15 补充一句：除非你做很多反应，比如realtime PCR之类的
一般来说一管50-100ul左右的10 uM的都很少有用完的情况哈
tough. |
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M****e
发帖数: 178 | 16 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。
按字面理解，意思是，引物stock是100uM，如果你的PCR反应体系是20ul，就向PCR
mixture中加2ul的引物stock。
不过，我们做PCR，引物的工作浓度（在PCR反应体系中的浓度）是0.5uM. 我们会把引
物稀释成5uM，每管100ul保存。反复冻融没什么问题。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 17 ....我原帖都写清楚了吧，mini的很好用，midi的不行
都是P1,P2,N3
本来是因为质粒是low copy number，mini提，3ml只出来10ng/ul*30ul，
所以改用midi，不是现买的，以前实验室走了的人留下来的，但是P1,P2,我用的是Mini的
但是这样提50ml也只出来20ng/ul*100ul的样子
所以一气之下以后都是mini小提好几个，然后乙醇沉淀
就是很疑惑为什么mini好使，midi不好使，所以上来问问大家
另外现在实验室里没有谁midi用起来提得效果好的，都跟我一样的困惑，为什么mini好
用midi不好用 |
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c******y
发帖数: 148 | 18 个人的配方。
13% tris tricine分离胶 stock 4摄氏度不超过4周
40%丙烯酰胺 156ml
3Mtris HCl pH 8.45 160ml
10% SDS 15ml
H2O 113ml
甘油 36ml
每100ml加10%APS 500ul， TEMED 20ul
stacking gel， 现配
40%丙烯酰胺 1ml
3Mtris HCl pH 8.45 3.33ml
10% SDS 0.31ml
H2O 5.35ml
每10ml加10%APS 100ul， TEMED 10ul
15*Anode buffer
3M tris Hcl pH 8.9
5*Kathode buffer pH 8.25 用时稀释1*，加0.1% SDS
0.5M Tris
0.5M Tricine
分离胶可以考虑16%，也可以做成10-16%梯度胶，不过分子量小的话，不梯度也行 |
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w******e
发帖数: 1187 | 19 total blood. if you want to draw blood multiple times w/o harming
the mouse, 100ul is the limit afaik.
we usually draw 5-10ul for time course as drawing more from
tail vein is hard. |
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D*a
发帖数: 6830 | 20 晕死，上面发的时候不知道在想什么，我想问，能抽的血还全身的血？
另外，你说100ul是多长时间重复的取血？我还没试过短时间重复取血，只试过眼眶静
脉采血，一次大概能到300到400，大点儿的老鼠能到500 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 21 我看了一下lavapep，样品体积最少要100ul，而且我估计那样的话还需要特殊的
cuvette吧。我倒是可以多配一点样品，就是不知道仪器和cuvette上哪弄去。要是还用
Nanodrop的话，岂不是绕了一圈又回来了。。。
还有就是它的定量怎么个定法，是像bradford一样做标准曲线么？ |
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s******y
发帖数: 220 | 22 我的目标蛋白是老鼠的，然后一抗是老鼠里产生的，只好用这个EZ-Link的kit。
instruction说不能用sodium azide在buffer里面，我的一抗里面有0.05%的sodium
azide，
需要dialyze吗？ 还是说只要不接着加sodium azide就没问题了。
而且，说明上要求把1mg IgG 溶解到0.5-1ml buffer， 我的抗体是1mg/ml的，有100ul
， 那我是
不是scale down就可以了呢？
多谢。 |
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p****z
发帖数: 31 | 23 我也就是这几次出现这种情况，也试过只吸下层，还是不行。比如说取100ul，吸到
50ul左右的时候，就会发现白色的不容物也开始一起被吸进去。这东西很奇怪，很容易
和样品混在一起。 |
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zc
发帖数: 111 | 24 100ul，100 cycles，taq, primer等都用终极的dose
不用hot lid
最后会浓缩到15ul左右，估计DNA浓度差不多了 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 25 我这里有这种离心机.Shandon的cytospin3.离心时把悬浮细胞液(~100uL)放到Single
cyto Funnel w/card (Biomedical ploymers, INC)(REF:BMP-CYTO-S50)(聚集细胞和吸
干作用液体),而slide就在Funnel下收集细胞
就是把悬浮细胞离心后,贴在slide上成个绿豆大的面积.然后固定/染色.... |
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a****d
发帖数: 1919 | 26 I did 100ul before and it worked fine for me. |
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l*****a
发帖数: 1431 | 27 tried 10ug in 50ul, didn't give complete cut.
but 10ug in 100ul worked very well |
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w**t
发帖数: 52 | 28 你的polysome好少喔，我之前的结果应该是和80S差不多的，而且40S 和 60S也挺高的。
我试过手工分组分，但是是100ul一个，效果不好。后来找了台bio-rad biologic LP，
接UV detecter 连续检测出来的图就好看一点了。
然后裂解的时候也要加CHX喔 |
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b*******6
发帖数: 39 | 29 具体步骤基本是这样的：
1 PCR 50-100 ul体系，所得产物跑胶后回收，所有产物均酶切（大概5ug，可能很多，
但是太少了最后会看不到；Fastdigest推荐protocol是切200ng 1ul酶，10min；所以开
始的时候切3个小时，因为当初质粒3个小时能切下来；后来过夜切，出现2个条带；PCR
产物比比质粒难切）；质粒一般切4ug，3个小时（BamH1切1小时，Hind31小时，碱性磷
酸酶1小时），或者在Bamh1灭活之后Hind3过夜切（BamH1据说明书超过1小时就有星号
活性）；酶切体系50ul，Fastdigest酶各1ul。所有酶切产物切胶回收，nanodrop定量。
2 连接50ng质粒，50ng片段（大小比是5：1，所以数量比大概是1：5），10ul体系，室
温1小时或者4度过夜。
3 转化：5ul产物加入到50-100ul感受态，冰浴30min，42度热激90s，冰浴2min，加入
800ul LB，37度30-45min，3500rpm 3min 离心，留100-200ul混匀细菌涂板。 |
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A**********0
发帖数: 6942 | 30 你的做法：连接50ng质粒，50ng片段（大小比是5：1，所以数量比大概是1：5），
10ul体系，室温1小时或者4度过夜。 转化：5ul产物加入到50-100ul感受态
我觉着太保守了。。。 不过，好多人都是这么一直做的。
你试试不要定量定的那么仔细，大概用500ng片段和100ng质粒做连接，
然后体系变成20ul做一次试试看。。。
PCR
量。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 31 Thank you guys.
I use PGEX2T vector so GST is on the N-terminus.
I normally do 100ml culture size. Here is how I did this:
1. small culture of the bacteria from glycerol stock O/N, about 6-8ml.
2. transfer the small culture to 100ml 2xYTA medium in the next day morning
, shaking at 300rpm, 37degrees.
3. it ususally takes about 1hr 40min - 2 hrs to have an OD600 around 0.75.
4. add IPTG (stock 100mM) 100ul to get a final concentration of 0.1mM.
5. Lower the temp to 22degrees and shake at 300 rmp... 阅读全帖 |
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s*********y
发帖数: 387 | 32 很多人遇到过 大提的时候 产量很低 虽然有1。87到1。93的质量控制指标，但是获得
的浓度偏低
比如 1毫升 浓度在 150ng/ul
我的经验是，可以使用 3k 或者10 k的filter, 10分钟的离心，你就可以得到 100ul的
浓度在
1000ng/ul的高浓度DNA
作为一般的真核细胞 转染 使用 足够了 |
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e*****n
发帖数: 15 | 33 哎，都博士二年级了，还问这样的问题，真不好意思
我是用qiagen blood & tissue kit 提brain tissue的DNA，~ 20 mg， handbook上面
说 brain tissue的话25mg 的DNA 产量 15 ~ 30 ug， 那理论上我应该得到12 ~ 24 ug。
但是我做了几次，最好的那次是200ul elution buffer，浓度 ~ 30 ug/ml, DNA 总量
是6 ug。
今天又做了2个sample，200 ul elution buffer，浓度只有10 ug/ml, 再用新的100ul
elution buffer, 浓度~10 ug/ml， DNA 总量大概只有3 ug。跑了一块胶，可以确定是
有DNA的。
实在想不出来是什么原因。 我disrupt tissue的时候是用23 G的needle做的，然后加
proteinase K消化了6个小时，液体很澄清，应该不会是消化的不好吧。很简单的实验
，就是做不好，哎。。。。
Sample比较珍贵，不敢再做了。。。希望大家能帮我一下啊，谢谢大家！！ |
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f******p
发帖数: 178 | 34 稀释太多了，我每次只用50ul稀释
ug。
100ul |
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h*******o
发帖数: 4884 | 35 Abcam几年前还勉强可以
最近2年明显有Santa Cruz化的趋势，而且经常缺斤少两。100ul的抗体，我aliquot只
有80多一点
我现在是只要其他口碑还不错的公司有的抗体，坚决不从Abcam和Santa Cruz买 |
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s********n
发帖数: 248 | 36 ECL,take the ECL out when you are done with 2nd antibody, prewarm in room temp for about 25min, then use 4ml(buffer A)100ul(buffer B) for a 6*4cm^2 membrane, 4min, then develop. |
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t*****z
发帖数: 1598 | 37 我也遇到过，某个常见的4kb左右的小质粒，大抽出来，总共100ul，浓度是150ng/ul。
抽了两次都是这样。看看质粒本身没什么特别的，不知道怎么回事。我觉得这事情和质
粒大小关系不大。你的也才大了一些些而已啊。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 38 用100ul的上样环可以吗？不能再少了吧？
最多能上样多少体积？用1ml的上样环可以吗？
谢谢指教！ |
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s*********t
发帖数: 600 | 39 那跟上样环有关系吗？能用1ml的上样环上200ul样品吗？
我手头只有100ul和1ml两个上样环 |
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s*********t
发帖数: 600 | 40 好像明白。上样环都是先用buffer洗过的，里面充满buffer的。
就是说随便往上样环里面注入多少样品，只要不超过柱体积和上样环的体积，都是可以
的，对吧？
比如，如果是100ul的上样环，注入200ul样品就不行了吧？反过来，1ml的，可以随便
上样1ml以下的样品，对吧？
周末了，实验室一个人也没有，只有我在苦逼的过柱子，找不到人请教 。。。
谢谢sunnyday老师指点！ |
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h*******o
发帖数: 4884 | 41 个人感觉
抗体质量分档次
第一档次: cell signaling (质量好,但是价格偏贵, 同样是100ul能用的次数少) , BD
biosciences, 以前的mito sciences (现在被abcam买了,所以比较悲剧)
一档半: millipore, proteintech (proteintech这个公司最近比较喜欢,抗体种类也
比较多,关键是价格便宜,而且质量很不错)
第二档: R&D systems, sigma
第三档:novus, abcam
最差的是santa cruz
当然现在abcam和santa cruz也差不多了,价格还贵 |
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F*****e
发帖数: 182 | 42 1. 100mg tamoxifen in 1ml 100% ethanol, vortex for 2-5mins.
2. Add sesame oil to 10ml, leave it on a shaker until fully dissolved.
Aliquot into 500ul/tube and store tubes in -20oC for 1-6 months (final
concentration: 1mg/100ul).
3. Oral administration: 250-350ul/25g body weight. |
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F*****e
发帖数: 182 | 43 1. 100mg tamoxifen in 1ml 100% ethanol, vortex for 2-5mins.
2. Add sesame oil to 10ml, leave it on a shaker until fully dissolved.
Aliquot into 500ul/tube and store tubes in -20oC for 1-6 months (final
concentration: 1mg/100ul).
3. Oral administration: 250-350ul/25g body weight. |
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l***g
发帖数: 19 | 44 想先做GST-pulldown，然后用pulldown产物电泳银染切胶回收去做MS。问题是，如果我
现在想用细菌中纯化的GST融合蛋白，应该bind多少蛋白到多少的beads上（100ul？）
，然后用HeLa细胞的裂解液来亲和吸附，应该大概用多少HeLa细胞裂解液？我感觉细胞
裂解液少了的话可能结合在GST融合蛋白上的蛋白太少了，在之后洗脱的过程中可能又
损失点，然后在银染的话可能看不出来。如果不用裂解液用动物组织，譬如rat或者
sheep的脑子，大概需要裂解多少克的脑子？多谢！ |
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s******s
发帖数: 13035 | 45 用50-100ul做最大洗脱，然后过一下minElute，用10ul洗脱浓缩。
这个和Qiagen的spin column一样的protocol, 唯一的区别是洗脱体积小 |
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w*********n
发帖数: 439 | 46 如果我chip Elute DNA是100ul的话，你取10ul作realtimePCR？
你用RIPAbuffer wash的时候 是不是要加PMSF和Proteinas Inhibitor? |
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C********4
发帖数: 308 | 47 就是做个western,周围实验室都没有
公司卖的都是一支100ul
好几百美刀.
买一整只太浪费了吧,用一次就不会再用到
怎么办啊,有没有零售几微升抗体的 |
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n***w
发帖数: 2405 | 48 DirectPCR lysis reagent (Viagen Biotech 102-T) and proteinase K (Viagen
Biotech 501-PK).
100ul lysis reagent + 2.5ul proteinase K, 55 degree O/N (>2hrs or more), 95
degree inactivate 15min
ready to go.
Sometimes you may need to consider DNA purification. |
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c*********r
发帖数: 1312 | 49 多谢啦！Protocol奉上。
我们是用小鼠胚胎的软骨和骨头染色的protocol。染软骨的话只用Alcian Blue即可。
最后胚胎用BABB处理就会变得透明。BABB危险，而且会腐蚀显微镜，使用时要小心。很
多动物的胚胎都可以用类似的方法染骨头（红色）和软骨（蓝色）：鼠，龟，蛇，鸡，
鱼，蜥蜴，变色龙，蝙蝠。。。而且都很漂亮！
比如这个人，做了好多不同动物的染色还到处办展览：
http://www.shinsekai-th.com/en/photo.php
Protocol：
1. Skeletal Preparations- Cartilage and Bone staining
1.1 Cartilage staining in mouse embryos from E12.5 - E13.5
Dissect out embryos, rinse in 1 x PBS, and place in ice-cold 95% Ethanol for
1 hour.
Change to fresh 95% ETOH and rock overnight at room temper... 阅读全帖 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 50 总体来说，licor odyssey还是不错的。荧光二抗不是问题。300块100ul可用几个月一
年。
好处是大大节约了步骤和时间。不需要底物反应和底片曝光。
最大的好处，上面都没有提到。licor可以同时识别两个波长的荧光。假设你需要计算
蛋白X的磷酸化比例。你可以在同一张膜上同时孵育两种抗体：总x，磷酸化x。当然，
这两种抗体必须来自两种动物（比如小鼠和兔）。然后同时孵育两种二抗。这两种二抗
要连接不同荧光，一个波长680（红），另一个800（绿）。
扫膜将同时显示红绿两种颜色。定量时划一个框，软件会显示框中红绿荧光两个值。两
者的比值真实反映磷酸化比例。任何其他单色wb定量算出的比值都是估算值。
不仅如此，licor扫描出来的彩色条带还可以从视觉上很直观地显示磷酸化比例。假设
磷酸化x标记为红，总x标记为绿，那么磷酸化高的条带偏红，磷酸化低就偏绿，磷酸化
水平适中就显示黄色（软件自动设定红绿叠加结果为黄）。发文章的时候，视觉上比显
示两遍黑疙瘩（一个是总x，另一个是磷酸化x）好。
另外，此设备对gfp的荧光敏感，凡是gfp需要定量的样品，包括细胞培养皿，甚至小鼠
（或其器官）都可... 阅读全帖 |
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