J******9
发帖数: 736 | 1 新课题，需要培养小鼠侧脑室（LV）取材的神经干细胞(NSC，)，进行“悬浮培养神经
球（neurosphere）。我也是第一次接触这个技术，很多方面不懂，虽然看了不少参考
资料。
我的大致实验步骤：LV切割下来后，消化细胞，细胞板计数后，按照5000个细胞/孔，
每孔0.5ml 液体量，接种到non-treated 24-wells培养板，进行悬浮生长。
培养基为：DMEM/F12, bFGF,EGF, B27, N2。（每2-3天添加新鲜培养液0.5ml。）
今天是接种第9天，显微镜下观察，大量悬浮细胞，成片状，中间夹着着一些小的“神
经球”。
问题：
1， 组织消化后接种，那些非神经干细胞来源的细胞，12-24小时后就不能存活了，
成为死细胞。这些死细胞如何可以从培养孔中清除？因为我每隔2天，仅仅添加等量的
新鲜培养基，那些死细胞仍然残留在培养孔里面。今天是第9天，虽然能看到神经球，
但是神经球周围大量成片的死细胞，很影响照相。
2， 我这种情况，是否需要“半量换液”来清除死细胞？大家是如何进行半量换液
的？看了不少文献，还是有点模糊。
3， 我的取材是1月龄、3月龄小鼠两组动物，请问这种月龄的小鼠，LV来源的NSC，
在培养第9-10天，神经球的数量和体积是不是应该很多、很大？我观察我的样本，神经
球很少（一个孔，不超过10个神经球），体积也很小。 | J******9
发帖数: 736 | |
|
