P****R
发帖数: 22479 | 1 1. crispre初现
1987年,日本学者Yoshizumi Ishino小组在分析大肠杆菌iap基因及周边序列时偶然发现
了一段位于3’端存在含有29个核苷酸高度同源重复序列,它们被含32个核苷酸的序列间
隔开，这是crispre的开端。
2. crispre复现及其功能发现
然而日本人发现的这个重复序列有什么生物学意义，当时没有人知道，但
Yoshizumi Ishino没有深入研究，只是将它作为一个有意思现象发表了，也没有引起学
术界的重视和跟进研究。这个自然现象就这么默默无闻的躺在那里睡大觉了。一晃十多
年过去了，2000年西班牙的微生物学家Francisco Mojica对嗜盐菌Haloferax
mediterranei基因组序列进行分析时发现这种有规律的重复序列，这引起了他的重视和
进一步研究，结果显示这段序列在细菌和古细菌中广泛存在。2002年，荷兰学者Jansen
等通过生物信息学分析发现了与crispre偶联蛋白Cas。cas蛋白质大多为核酸相关蛋白
（可以切割DNA)，且只有在CRISPR结构的基因组中存在。Jansen与Mojica将该系统命名
为CRISPR-Cas系统CRISPR/cas(Clustered regularly interspaced short palindromic
repeats）。结构决定功能，这个重复结构到底有什么功能？2005年，Mojica等3个独
立的小组通过生物学信息分析表明CRISPR的间隔序列spacer是外源DNA来源的，于是大
家想到这可能对外来DNA具有免疫防御作用。2007年Horvath小组的Streptococcus
thermophilus的实验证实了这一猜想。
3.crispre相关蛋白的发现
2008年，荷兰学者van der Oost小组发现CRISPR结构的转录本会被CasE蛋白切割成大量
crRNA小分子，每个crRNA携带一个间隔序列RNA作为向导序列，指导Cas蛋白切割与其具
有同源序列的噬菌体，因此推测CRISPR免疫的靶标分子是DNA。2010年，Moineau小组对
嗜热链球菌Ⅱ型CRISPR系统进行研究，确定了该系统对外源质粒双链DNA上精确的切割
位点，并且确认Cas9是介导靶序列切割所需的唯一蛋白。因此，到2010年对CRISPR-Cas
系统免疫功能的作用机制已有了确切的认识，这为利用该系统发展基因编辑技术奠定了
基础，就等大神出场了。
4. crispre/cas9基因编辑技术的形成
2011年，大神Charpentier出场了，该小组身手不凡，一开始就对酿脓链球菌Ⅱ型
CRISPR-Cas系统进行了更加详细的深入的实验研究，他们发现在crRNA加工过程中一个
关键的RNA组分反式激活crRNA（tracrRNA）。tracrRNA与crRNA序列匹配，可以在Cas9
的帮助下招募RNaseⅢ对crRNA进行加工从而生成成熟的crRNA。他们的实验证实CRISPR
核酸酶系统至少需要Cas9蛋白、成熟crRNA及tracrRNA。2012年，Charpentier和Doudna
实验室合作，强强联合激发了更快更强效应。他们对该系统进行了简化，将tracrRNA与
crRNA嵌合成一条单链向导sgRNA，只需sgRNA和Cas9蛋白两个组分即可靶向特定的序列
，至此crispre/cas9这种高效简单的基因组编辑技术形成了。
5. crispre/cas9应用的扩展
2013年，张锋实验室和Church实验室几乎同时将该技术应用于真核生物的基因组编辑。
这两篇文章开启了CRISPR/cas9编辑真核生物细胞的新时代，意味着该技术可以应用于
人类癌症等疾病的治疗。
6. 谁是功劳最大者？诺贝尔奖应该发给谁？
从上面的分析可知，在 crispre/cas9基因编辑的形成过程中，大师云集，大家各显神
通，为该技术的诞生费尽了心血，但诺贝尔奖只会授予三人，到底谁是功劳最大者，这
考验着诺贝尔奖评审者的眼力和智慧。让我们从头分析，日本学者Yoshizumi Ishino是
最早发现该序列学者，是最原创者。西班牙的微生物学家Francisco Mojica最先认识到
crispre的重要性，从结构到功能Mojica的贡献卓越。张峰和Church把该技术扩展到了
人类疾病的应用，而且张峰在crispre专利争夺战中一举获胜，其对crispre基因编辑贡
献卓著。但与Charpentier和Doudna相比，都不是最关键最核心的贡献。看来诺贝尔奖
不是授予初创者，也不是扩展者，而是授予最关键最核心者。在此，关键核心贡献似乎
大于优先权。
巾帼双雄，这是诺贝尔奖史上第一次两位女性双双获得同一奖，又一次谱写了诺贝尔奖
传奇！ |
P****R
发帖数: 22479 | 2 发现CRISPR对这次颁奖没有太多关心，而是这个发现带来的应用。
第一发现应用的是两位女将 |
P****R
发帖数: 22479 | 3 两个关键问题
1、Doudna、Charpentier与张锋的贡献分别是什么？大小如何？
杜德纳等在全球首次报道运用CRISPR-Cas9系统在活细胞中进行DNA编辑，但是没有在真
核细胞中进行实验。
张锋团队则是全球首次将CRISPR基因编辑技术在真核细胞中得以实现，一般认为，他主
导开发的lenti CRISPR v2是目前全球使用最广泛的CRISPR工具。在真核细胞中进行基
因编辑是基因编辑临床应用必经之路。
总的来说，张锋的贡献当然很大，但更多的是技术层面，而非原理层面。
2、 诺奖采用三人规则，如果今年有第三个得奖人，会不会是张锋？
回答是也不太可能。
理由：
张锋没有获奖最可能原因未必是他不是原理发现者而是技术改良者。钱永健和Martin
Chalfie获得2008年诺贝尔奖。2008年三名获奖者中，下村修是发现分离GFP（绿色荧光
蛋白质）的人，而钱永健对下村修的发现进行改良，Martin Chalfie把GFP投入生物研
究应用。钱永健作为改良者，同样可以获奖。张锋未能获奖，很可能的原因是诺奖目前
限制得奖人数为三人。
张锋是mammalian cell CRISPR技术的最早一批开发者之一，George Church也是。实际
上，两人相关论文在同一期Science上发表。目前诺奖不给四个人，所以只能理论贡献
最大的Doudna和Charpentier得奖，否则张锋与George Church之间难以抉择。类似理由
可以用于解释为什么没有将同样有重大理论贡献的CRISPR技术发掘者和命名者，西班牙
微生物学教授弗朗西斯·莫西卡Francisco Mojica、立陶宛维尔纽斯大学Virginijus
Siksnys纳入本次得奖者名单。
进一步地，Virginijus Šikšnys的贡献和卡彭蒂耶、杜德纳一个层面，属于
原理与理论的贡献，因此，即使有第三个人获奖，也应该是弗朗西斯·莫西卡或者
Virginijus Siksnys。实际上，2018年卡彭蒂耶、杜德纳和 Virginijus Šik&#
353;nys三人行，荣获2018年度卡弗里纳米科学奖，以表彰他们为CRISPR基因编辑技术
作出的杰出贡献。当然，如果未来张锋团队在CRISPR技术的临床应用方面取得显著贡献
，那么张锋还有机会获得诺贝尔生理与医学奖。
博主以为，理论研究重要，但大规模应用，治疗很多人的疾病，改变他们的命运，同样
是诺奖级的贡献，正如屠呦呦一样。2020年3月，张锋团队完成世界上首个在人体内使
用的CRISPR疗法，治疗Leber先天性黑矇病10（LCA10）。通过视网膜下注射，将基因编
辑系统递送到感光细胞中，当感光细胞表达基因编辑系统时，gRNA指导的基因编辑可以
消除或者逆转CEP290基因上致病的IVS26突变，从而改善感光细胞功能，为患者带来临
床益处。另外，张锋已经获得多个国际学术大奖，如“小诺贝尔奖”加拿大盖尔德纳奖
、加贝奖(Jacob and Louise Gabbay Award)、阿尔伯尼生物医学奖、唐奖等，已经得
到学术界足够认可。张锋还持有CRISPR在真核细胞上应用的专利，商业前景巨大，所以
张锋得诺奖当然是好事情，没有得，虽然有遗憾，但也已经得到足够认可。 |
P****R
发帖数: 22479 | 4 启示：原创性论文，第一个发出来比发高影响因子期刊更重要
立陶宛维尔纽斯大学Virginijus Šikšnys很可能非常郁闷，因为明明投稿在
Doudna和Charpentier之前，但运气太差，连续被两次拒稿，否则卡彭蒂耶和杜德纳的
论文就只能居第二。
2011年或者2012年的某个时间，Virginijus Šikšnys突破性论文第一次向
Cell投稿，被拒，第二次向Nature投稿，又被拒，第三次向美国国家科学院学报PNAS投
稿，终于被录用，但Virginijus Šikšnys的论文在PNAS公开发表时，已经比
Doudna、Charpentier发表在《科学》杂志的论文晚了几个月。
不知道Virginijus Šikšnys有没有和俄罗斯数学家佩雷尔曼一样，先在预印
本中提交论文， 以确保优先权，比如生物学著名的bioRxiv预印本。
由于期刊评审慢，而且很可能被拒稿，从而使得发表周期延长，因此，为了争夺优先权
，最佳策略是首先在具有DOI编码的预印本中提交论文，再投稿，甚至可以先向能够以
最快速度发表的普通期刊投稿，先公开发表，公开发表后，再向业界权威推介自己的工
作，以最大可能确保优先权。 |
s*****r
发帖数: 11545 | |
P****R
发帖数: 22479 | 6 一点都不冤枉
瑞典人私下已经同日本人/西班牙人谈妥了，明年发生物学炸药奖给他们两个。
张峰还是没戏。
【在 s*****r 的大作中提到】
: 这样说来我觉得西班牙那个才算冤
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