h****n
发帖数: 2552 | 1 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: midwestPstD (中西部博士后), 信区: Biology
标 题: 请教CRISPR行家-HDR Template Design
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 18 16:24:10 2014, 美东)
看了Zhang Feng的Nature Protocol关于CRISPR的文章，Figure 6里面的ssDNA
template明显的效率比plasmid作template高。文章并没有明确说明哪个template好。
想了一下，ssDNA分子量比plasmid小多了，同样的ug template, ssDNA的分子数肯定多
多了，也许这是一个解释。
我自己在设计HDR template，想两边各一个Kb的homologous arm,中间有60-70bp 的
mutation insertion。这个两kb的DNA准备克隆到一个plasmid里面，sequencing确定
mutation后，就可以用作HDR template了。
想请教的是：需要把这个两Kb的template从plasmid里面酶切出来，gel纯化后再和cas9
plasmid一起co-transfect吗？要作ssDNA太难了一点，还没考虑。：（。
很多年前作过ssDNA的transfection（pUC18？phage-ssDNA纯化的)，记得当时发现
ssDNA在真核细胞内不如dsDNA的plasmid稳定呢。不知道dsDNA fragment在细胞内是不
是也象环状的plasmid那么稳定。
多谢！ |
h****n
发帖数: 2552 | |
s****e
发帖数: 5429 | 3 没有。这里的英语多是专业词汇。不觉得有什么不合适的。
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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H********g
发帖数: 43926 | 4 专业词多了有点惯性可以理解
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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d********f
发帖数: 43471 | 5 差远了
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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D***s
发帖数: 5613 | 6 feel非常smooth啊，应该no problem
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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d****o
发帖数: 32610 | 7 学术起来就对这些不敏感了
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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c******n
发帖数: 16666 | |
w*p
发帖数: 16484 | 9 这里面能换成简单中文的词不多
【在 h****n 的大作中提到】
: 这个和 put egg花有没有异曲同工之妙？
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