克隆flanking sequence有啥短平快的方法吗？ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 克隆flanking sequence有啥短平快的方法吗？

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话题: flanking话题: 短平快话题: sequence话题: 克隆话题: 方法

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D**F 发帖数: 54	1 有个转基因老鼠，不知道准确的插入位点，没办法pcr鉴定杂合还是纯和
m*********D 发帖数: 1727	2 借鉴以前的chromsome walking，可以找几个restriction enzymes，在你的construct 里面没有位点。用这些酶，单个酶切genomic DNA。然后链接，希望是一个片段的两端自连。然后设计PCR primers，从你的construct 往外拉，争取把flanking sequeences 拉出来，再测序。理论上可行，多拭几个不同的酶。你的construct，要是做transgenic之前要做了linearization，你的primer设计会容易得多。我没有自己做过，就是一个idea。细节你得自己多想想。
w*********3 发帖数: 217	3 用关键词Hi-tail查文献。照着做就可以了。 ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 16 【在 D**F 的大作中提到】 : 有个转基因老鼠，不知道准确的插入位点，没办法pcr鉴定杂合还是纯和

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