v********a
发帖数: 646 | 1 请问大家都是怎样从96孔～12孔板上收获细胞，用来裂解做WB?
不考虑靶蛋白的丰度，一般24孔板用多少微升裂解液裂解，并从中取多少跑SDS-PAGE?
Thanks. |
a******r
发帖数: 786 | 2 我觉得细胞量可能不够做wb
我用那种大dish的也就做个五六次次吧 |
m*********D
发帖数: 1727 | 3 6-wellplate， 0.2 m 细胞，一般我用80 ul， 最后能有300 ug totalprotein， 大约
是15次wb。 |
v********e
发帖数: 1597 | 4 NP-40 BUFFER
1% NP-40
2 mM EDTA
10% glycerol
150 mM NaCl
50 mM Tris pH 8.0
1 tablet of Roche protease inhibitors per 10 mLs of the buffer.
400ul for 6-well; 200ul for 12-well plate, 120ul for 24-well plate |
v********e
发帖数: 1597 | 5 wash cell by PBS, add NP-40 buffer in wells, suspend the cell by 200ul
peptide, on ice 20min. collect sup to ep tube, centrifuge at >14000xg at 4
degree, 20 min, harvest the sup |
d****i
发帖数: 2346 | 6 24well我用过100 ul裂解然后取30-40 ul跑还好。 |
v********a
发帖数: 646 | |
