w*e
发帖数: 740 | 1 前阵子参加一个会议，有人podium 演讲提及到可以做non coding RNA 基因的GFP gene
targeting, 目的是用GFP 来看non coding RNA 基因的基因表达。我不解的是：既然
是non coding RNA, 这样做的话gfp会表达么？还是强制加上一个kozak序列让gfp开始
翻译？
谢谢 |
t*****i
发帖数: 13 | 2 这个应该是用GFP替换整个或者部分ncRNA gene,用GFP检测ncRNA promoter activity,
不存在不能表达的问题 |
w*e
发帖数: 740 | 3 那gfp怎么表达呢？我的意思是gfp的cds能不能保证被翻译出来？
我不是很清楚为什么ncrna的基因为什么不能翻译出来
,
【在 t*****i 的大作中提到】
: 这个应该是用GFP替换整个或者部分ncRNA gene,用GFP检测ncRNA promoter activity,
: 不存在不能表达的问题
|
T*G
发帖数: 600 | 4 应该是要加个Kozak的，其实我觉得即使加了kozak也不一定能force lncRNA promoter
表达出protein. 因为by nature lncRNA 的 promoter就不是为了配合蛋白的。
gene
【在 w*e 的大作中提到】
: 前阵子参加一个会议，有人podium 演讲提及到可以做non coding RNA 基因的GFP gene
: targeting, 目的是用GFP 来看non coding RNA 基因的基因表达。我不解的是：既然
: 是non coding RNA, 这样做的话gfp会表达么？还是强制加上一个kozak序列让gfp开始
: 翻译？
: 谢谢
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t*****i
发帖数: 13 | 5 promoter sequence只是决定DNA是否能被TF以及RNApol 识别并转录，能否被翻译是由
RNA sequence本身决定的（UTR，start codon），这也是为什外源RNA可以在细胞内被
翻译的原因，和promoter无关
事实上，很多lncRNA 已经被证明可以编码small peptide了，看这篇review
http://emboj.embopress.org/content/33/9/937.abstract |
w*e
发帖数: 740 | 6 谢谢楼上的各位回答。
我要是加上kozak序列，再在3‘端加上很好的poly a signal片段，比如sv40t,或者
wpre，希望就能强制gfp来表达。
【在 t*****i 的大作中提到】
: promoter sequence只是决定DNA是否能被TF以及RNApol 识别并转录，能否被翻译是由
: RNA sequence本身决定的（UTR，start codon），这也是为什外源RNA可以在细胞内被
: 翻译的原因，和promoter无关
: 事实上，很多lncRNA 已经被证明可以编码small peptide了，看这篇review
: http://emboj.embopress.org/content/33/9/937.abstract
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