R****n
发帖数: 708 | 1 最近在做一个DNA和histone甲基化共染色，主要是想看在chromosome上的分布。先拿
colcemide处理2小时，然后放0.075M KCl，滴到玻璃板上。染了几次，细胞核都打不开
，也看不到一条条染色体。要是只用DAPI，能看到100-200个核中有一个能打开，但是
很不稳定。看protocol,有两个可能的问题。
1）我是悬空滴的，效果不如用cytospin?
2) 玻璃板没有poly-lysine coating,沾不住chromosome.
有人能提供点经验么？这方面是新手。 |
h********1
发帖数: 157 | 2 关键是要细胞在分裂期才会有一条条的染色体，否则就是染色质，哪能分得开呀。建议
细胞处于分裂活跃期的时候收细胞，不能太满。另外trypsin时间不要太长，收那些很
快就dissociate的细胞
【在 R****n 的大作中提到】
: 最近在做一个DNA和histone甲基化共染色，主要是想看在chromosome上的分布。先拿
: colcemide处理2小时，然后放0.075M KCl，滴到玻璃板上。染了几次，细胞核都打不开
: ，也看不到一条条染色体。要是只用DAPI，能看到100-200个核中有一个能打开，但是
: 很不稳定。看protocol,有两个可能的问题。
: 1）我是悬空滴的，效果不如用cytospin?
: 2) 玻璃板没有poly-lysine coating,沾不住chromosome.
: 有人能提供点经验么？这方面是新手。
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R****n
发帖数: 708 | 3 "细胞处于分裂活跃期的时候收细胞，不能太满"
20-30% confluence?
"另外trypsin时间不要太长，收那些很快就dissociate的细胞"
这个是什么原因啊？
谢谢
【在 h********1 的大作中提到】
: 关键是要细胞在分裂期才会有一条条的染色体，否则就是染色质，哪能分得开呀。建议
: 细胞处于分裂活跃期的时候收细胞，不能太满。另外trypsin时间不要太长，收那些很
: 快就dissociate的细胞
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s******s
发帖数: 13035 | 4 他的意思大概是70%一下。另外，分裂期的细胞接近球形，attach的面积小，容易下来
【在 R****n 的大作中提到】
: "细胞处于分裂活跃期的时候收细胞，不能太满"
: 20-30% confluence?
: "另外trypsin时间不要太长，收那些很快就dissociate的细胞"
: 这个是什么原因啊？
: 谢谢
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