r******k
发帖数: 446 | 1 小弟最近检测一个蛋白的磷酸化水平，看这个蛋白是不是一个phosphatase A的底物。
结果上15ug的时候，有A的细胞系和没有A的细胞系这个蛋白在变化很大。 我又上了
30ug，结果变化就不大了。这是怎么回事？ |
C*********h
发帖数: 83 | 2 多重复几次，try phosphotag
也许不是蛋白量的变化。
或许是电泳的电压两次不一样，有时候跑得太快，shift分不开。你电压小一点，慢慢
跑，或许可以看到。
当然了，有phosphotag的数据最好。然后mass spec检测。
【在 r******k 的大作中提到】
: 小弟最近检测一个蛋白的磷酸化水平，看这个蛋白是不是一个phosphatase A的底物。
: 结果上15ug的时候，有A的细胞系和没有A的细胞系这个蛋白在变化很大。 我又上了
: 30ug，结果变化就不大了。这是怎么回事？
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r******k
发帖数: 446 | 3 我用的抗体只识别特异性的一个磷酸化位点，不识别total的蛋白。
【在 C*********h 的大作中提到】
: 多重复几次，try phosphotag
: 也许不是蛋白量的变化。
: 或许是电泳的电压两次不一样，有时候跑得太快，shift分不开。你电压小一点，慢慢
: 跑，或许可以看到。
: 当然了，有phosphotag的数据最好。然后mass spec检测。
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j*****9
发帖数: 716 | 4 有可能是30ug的上样量 对你的目标蛋白来说 over saturated，还是别上那么多 |
t****w
发帖数: 130 | 5 western定量学问很大 新手能可靠区分约出5倍以上的差异，老手大概能做到1.5倍以上。
听楼主语气是新手———— 只能再多重复多练练了 |
e****s
发帖数: 1125 | 6 首先建议：调整曝光时间，要保证条带没有overexposed。 |
n***w
发帖数: 2405 | 7 做几个dilution，看看linear range。 |
r******k
发帖数: 446 | 8 Thank you all！！！ 各位的建议非常有用！ ！谢谢 |
