a********k
发帖数: 2273 | 1 是不是只有放射性标记ATP然后体外加纯化的蛋白和PKA这一个决定性实验啊？
基本没做过生化，要证明这样一个磷酸化位点从零开始要多久啊？
谢谢了 |
r****r
发帖数: 379 | 2 可以做ms，如果你害怕同位素的话。或者用s/t磷酸化抗体去检测，不过这个不如ms和
同位素来得有说服力。除非你能做出特异磷酸化位点的抗体那也可以了。 |
a********k
发帖数: 2273 | 3 多谢。。。我还不知道这个位点是否可以磷酸化，估计没可能要钱去做个特意抗体吧。
不过其实钱不是问题，关键是怎么快点搞出结果。
可不可以转染细胞，然后抑制或者激活PKA，然后purify我的蛋白去MS？
thanks.
【在 r****r 的大作中提到】
: 可以做ms，如果你害怕同位素的话。或者用s/t磷酸化抗体去检测，不过这个不如ms和
: 同位素来得有说服力。除非你能做出特异磷酸化位点的抗体那也可以了。
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r****r
发帖数: 379 | 4 是的，你可以体外激活，但体外的有时候会有假阳性出现，体内刺激纯化后去做ms当然
最好了，但不能确保一定做出来。
要快点搞出来，就多管齐下，点突变蛋白做对照，体外刺激用s/t检测，或者看有几个
预测位点，都做了抗体再说，然后ms也做，因为这几个方法都有缺陷，不一定100%保证
你能得到结果的。
【在 a********k 的大作中提到】
: 多谢。。。我还不知道这个位点是否可以磷酸化，估计没可能要钱去做个特意抗体吧。
: 不过其实钱不是问题，关键是怎么快点搞出结果。
: 可不可以转染细胞，然后抑制或者激活PKA，然后purify我的蛋白去MS？
: thanks.
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