e**r
发帖数: 1144 | 1 knockout老鼠，只有一两个bp插入或缺失
直接在突变位点设计引物质量不好
有啥别的方便的办法做Genotyping没？ |
s*********s
发帖数: 110 | 2 T7 assay
位点左右各100bp+300bp
——〉 <----
同样的引物，PCR产物和WT的PCR产物退火，T7 cut
如果担心PCR不纯的话，做两步PCR。
【在 e**r 的大作中提到】
: knockout老鼠，只有一两个bp插入或缺失
: 直接在突变位点设计引物质量不好
: 有啥别的方便的办法做Genotyping没？
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s******r
发帖数: 1245 | 3 Taqman有测SNP的real time assay
或者pcr片段直接去测序
【在 e**r 的大作中提到】
: knockout老鼠，只有一两个bp插入或缺失
: 直接在突变位点设计引物质量不好
: 有啥别的方便的办法做Genotyping没？
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l**********1
发帖数: 5204 | 4 Cas-9 nuclease
pls check,
PMID 23907390
Optimization of scarless human stem cell genome editing
Nucleic Acids Res. 2013 41: 9049-61
>http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23907390 |
z*t
发帖数: 863 | 5 can we run page with short PCR product(around 100-200bp)?
【在 s*********s 的大作中提到】
: T7 assay
: 位点左右各100bp+300bp
: ——〉 <----
: 同样的引物，PCR产物和WT的PCR产物退火，T7 cut
: 如果担心PCR不纯的话，做两步PCR。
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a********k
发帖数: 2273 | 6 有real time PCR的话，设计primer做HRM最省事。
【在 e**r 的大作中提到】
: knockout老鼠，只有一两个bp插入或缺失
: 直接在突变位点设计引物质量不好
: 有啥别的方便的办法做Genotyping没？
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r********e
发帖数: 84 | |
