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发帖数: 2762 | 1 是extracellular domain, 是在stable cell 里表达好，还是transient expression
better. | i***0
发帖数: 160 | 2 ？楼主要表达蛋白干什么用，生化， 细胞，还是结构，要在哺乳动物细胞里表达么？
胞外结构域可以加一个分泌序列让他直接分泌到胞外，然后收培养液提纯即可。我们组
用昆虫细胞感染病毒表达胞外结构域分泌到培养液，免去裂解细胞离心等步骤，很方便 | W*******n
发帖数: 2762 | 3 细胞用的，用his-tag在c terminal, 已经建立在stable cell (HEK 293),直接分泌到
胞外，然后收培养液提纯，但表达效率不高。
如果transient expression, 就麻烦。不知道有人比较过没有？ | i***0
发帖数: 160 | 4 跟你说个狗血的，你就平衡了。我在提一个特别不稳定的蛋白突变体，10L线虫表达得
到20微克，只够做一两个生化试验，还一不小心就什么都没有。
你的情况如果不想麻烦就简单粗暴的大盘养，养很多大盘，然后提纯富集。如果想转染
，就别怕麻烦。生物不就是大量重复劳动的体力活么。姐我的肱二头肌很发达。 |
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