g*******e
发帖数: 156 | 1 One-step assembly in yeast of 25 overlapping DNA fragments to form a
complete synthetic Mycoplasma genitalium genome
http://www.pnas.org/content/105/51/20404.full
Assembling large DNA segments in yeast.
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22328431
Oligonucleotide assembly in yeast to produce synthetic DNA ...
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22328422
貌似转化方法大多用原生质体转化或者醋酸锂法
问题是为啥不用快捷的电转化法？？？
谢谢！ |
g*********5
发帖数: 2533 | |
g*******e
发帖数: 156 | 3 有谁来讲讲为啥不用电转化吗？
粗略看了一下protocol，无论是原生质体转化还是醋酸锂转化还都挺繁琐的 |
M*****k
发帖数: 1556 | |
h**********r
发帖数: 671 | 5 首先声明我不是托儿
用过这个做转化
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit
http://www.zymoresearch.com/yeast/transformation/frozen-ez-yeas
很不错很方便。
另外也可以用来做很多不同yeast（candia,KLUYVEROMYCES）的感受态。 |
g*******e
发帖数: 156 | 6 知道你不是托，呵呵
这个kit挺好
等我看看
【在 h**********r 的大作中提到】
: 首先声明我不是托儿
: 用过这个做转化
: Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit
: http://www.zymoresearch.com/yeast/transformation/frozen-ez-yeas
: 很不错很方便。
: 另外也可以用来做很多不同yeast（candia,KLUYVEROMYCES）的感受态。
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j****n
发帖数: 3370 | 7 Hi, we did a lot of gene assembly in yeast, which requires high
transformation efficiency. The reason to use heat shock more often
1. Heat shock often gives higher, at least not lower, transformation
efficiency.
2. Heat shock is a more versatile method. For some strain, electroporation
gives very low efficiency. Take some commonly used lab strain for example,
CEN.PK strains have equal efficiency for these two methods, while INVSc1
failed to form any colonies using electroporation.
3. Just some personal habit. I know many people don't like doing
electroporation, even for E. coli.
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
【在 g*******e 的大作中提到】
: One-step assembly in yeast of 25 overlapping DNA fragments to form a
: complete synthetic Mycoplasma genitalium genome
: http://www.pnas.org/content/105/51/20404.full
: Assembling large DNA segments in yeast.
: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22328431
: Oligonucleotide assembly in yeast to produce synthetic DNA ...
: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22328422
: 貌似转化方法大多用原生质体转化或者醋酸锂法
: 问题是为啥不用快捷的电转化法？？？
: 谢谢！
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g*******e
发帖数: 156 | 8 thanks!
【在 g*******e 的大作中提到】
: 知道你不是托，呵呵
: 这个kit挺好
: 等我看看
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g*******e
发帖数: 156 | 9 10^5-10^6 transformants per μg plasmid DNA
这个转化效率够不够？
【在 j****n 的大作中提到】
: Hi, we did a lot of gene assembly in yeast, which requires high
: transformation efficiency. The reason to use heat shock more often
: 1. Heat shock often gives higher, at least not lower, transformation
: efficiency.
: 2. Heat shock is a more versatile method. For some strain, electroporation
: gives very low efficiency. Take some commonly used lab strain for example,
: CEN.PK strains have equal efficiency for these two methods, while INVSc1
: failed to form any colonies using electroporation.
: 3. Just some personal habit. I know many people don't like doing
: electroporation, even for E. coli.
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g*******e
发帖数: 156 | 10 看了Gibson的protocol，应该足够了
【在 g*******e 的大作中提到】
: 10^5-10^6 transformants per μg plasmid DNA
: 这个转化效率够不够？
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g*******e
发帖数: 156 | 11 新问题：
yeast得长2-4天才行，不像细菌过夜就行了
现在有没有长得很快的yeast的mutant卖？ |
j****n
发帖数: 3370 | 12 如果你用G418之类抗性的质粒，可以用industrial strain。一般长个20h就差不多了。
Lab strain貌似没有长的特别快的，都差不多，两天可以得到colony
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
【在 g*******e 的大作中提到】
: 新问题：
: yeast得长2-4天才行，不像细菌过夜就行了
: 现在有没有长得很快的yeast的mutant卖？
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g*******e
发帖数: 156 | 13 谢谢！
我们可以用G418或者Zeocin
请问你说的这个industrial strain有没有具体的名字？或者在哪里可以买得到？谢谢！
【在 j****n 的大作中提到】
: 如果你用G418之类抗性的质粒，可以用industrial strain。一般长个20h就差不多了。
: Lab strain貌似没有长的特别快的，都差不多，两天可以得到colony
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
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h**********r
发帖数: 671 | 14 你可以是这个
http://www.fgsc.net/gpkit.html
order 菌株FGSC 9721 and 质粒pRS426.
(FGSC菌株最便宜，比别的地儿都便宜)
9721（FY834）是营养缺陷型， ATCC也用一样的，但贵多了。他们把这个用在构建用来
高通量的敲除neurospora的单个基因 （KO）。装三个片段木问题，更多的我就不知道
了。
protocol
http://www.dartmouth.edu/~neurosporagenome/Projects_files/Proje |
