h******y
发帖数: 351 | 1 我想看培养细胞中有多少senescence，大家觉得这些marker（SA-b-Gal，r-H2A.X，
Ki67-negative，Heterochromatic foci）中，哪个最好（准确率高，方便）？
有人有用flow cytometer对senescence细胞定量的经验吗？我想用C12FDG，但是感觉把
活细胞的lysosome中的pH调到SA-b-Gal需要的6左右很难。文献中用300uM chloroquine
处理细胞2h，再加33uM C12FDG，4小时或过夜后检测荧光信号。有人用过这种方法吗？
能否分享一下经验?
多谢 |
w******y
发帖数: 2504 | 2 我干过这事，就是用FLOW CYTOMETRY来测量BETA-GAL的表达。 |
h******y
发帖数: 351 | 3 能把你的protocol分享一下吗？
【在 w******y 的大作中提到】
: 我干过这事，就是用FLOW CYTOMETRY来测量BETA-GAL的表达。
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u**********d
发帖数: 573 | 4 这些衰老的marker靠谱吗？
chloroquine
【在 h******y 的大作中提到】
: 我想看培养细胞中有多少senescence，大家觉得这些marker（SA-b-Gal，r-H2A.X，
: Ki67-negative，Heterochromatic foci）中，哪个最好（准确率高，方便）？
: 有人有用flow cytometer对senescence细胞定量的经验吗？我想用C12FDG，但是感觉把
: 活细胞的lysosome中的pH调到SA-b-Gal需要的6左右很难。文献中用300uM chloroquine
: 处理细胞2h，再加33uM C12FDG，4小时或过夜后检测荧光信号。有人用过这种方法吗？
: 能否分享一下经验?
: 多谢
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g*******3
发帖数: 2520 | 5 测telomere的长短怎么样，用PCR的方法，把培养初期的当100%。 |
S**********e
发帖数: 1789 | 6 marker已经是做senescence的瓶颈了。
【在 u**********d 的大作中提到】
: 这些衰老的marker靠谱吗？
:
: chloroquine
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b****r
发帖数: 17995 | 7 我想想起来都不会太靠谱
连衰老的本质现在都还不清楚，而且人体衰老的时间是如此之长，现代分子生物一共才
多少年，哪能做得很靠谱啊
【在 u**********d 的大作中提到】
: 这些衰老的marker靠谱吗？
:
: chloroquine
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h******y
发帖数: 351 | 8 谢谢。你说的测定telomere长度的办法可以研究一群细胞的相对衰老程度。我更希望能
看到单细胞水平上的marker。
【在 g*******3 的大作中提到】
: 测telomere的长短怎么样，用PCR的方法，把培养初期的当100%。
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h******y
发帖数: 351 | 9 是啊，现在大家常用的几个marker都有这样或那样的缺陷。
SA-b-Gal方便，但是假阳性挺高。在培养细胞中用起来挺方便，看组织切片就困难多了。
SAHF，rH2A.X，53BP1也会有DNA Damage的假阳性。
Ki67，BrdU是negative marker，更不好说了。
谁要是找到一个specific的marker就好了
【在 S**********e 的大作中提到】
: marker已经是做senescence的瓶颈了。
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S**********e
发帖数: 1789 | 10 正常组织可以考虑p16, 肿瘤肯定不行。SA-b-Gal可以染组织， 但需要新鲜的冰冻切片。
了。
【在 h******y 的大作中提到】
: 是啊，现在大家常用的几个marker都有这样或那样的缺陷。
: SA-b-Gal方便，但是假阳性挺高。在培养细胞中用起来挺方便，看组织切片就困难多了。
: SAHF，rH2A.X，53BP1也会有DNA Damage的假阳性。
: Ki67，BrdU是negative marker，更不好说了。
: 谁要是找到一个specific的marker就好了
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u**********d
发帖数: 573 | 11 我以前觉得不能再分裂了就是衰老，现在想起来，这种想法还是很简单，繁殖能力只是
一项指标而已，有的细胞是主动地退出细胞周期，细胞内错误的积累过程并不久。
【在 b****r 的大作中提到】
: 我想想起来都不会太靠谱
: 连衰老的本质现在都还不清楚，而且人体衰老的时间是如此之长，现代分子生物一共才
: 多少年，哪能做得很靠谱啊
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