v****e
发帖数: 131 | 1 问大家一个问题.
我知道senescence associated beta-gal staining 是最常见的方法检测senescence是
否发生了改变.可不幸的是我们的flox老鼠在构建的时候插入了beta-gal基因.所以当我
们基因被knockout后,beta-gal就会表达.我们平时用普通beta-gal staining 这个来
trace deletion effeciency and etc.
我的问题是还能用senescence associated beta-gal staining (SA-b-gal) 来检测
senescence是否发生了变化?注意到SA-b-gal staining的ph值要求是6.我们平时做的
staining是ph 7.其它步骤都是一样的.是不是可能这个ph的一点不同,能够使我们老鼠
中依然可以做senescence associated beta-gal staining.
anyway,我还是可以做western 检测marker.据我所知有PAI-1,P21,P53,P19.我发现P19,
PAI-1改变,但P53不变,mak... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 2 我想看培养细胞中有多少senescence，大家觉得这些marker（SA-b-Gal，r-H2A.X，
Ki67-negative，Heterochromatic foci）中，哪个最好（准确率高，方便）？
有人有用flow cytometer对senescence细胞定量的经验吗？我想用C12FDG，但是感觉把
活细胞的lysosome中的pH调到SA-b-Gal需要的6左右很难。文献中用300uM chloroquine
处理细胞2h，再加33uM C12FDG，4小时或过夜后检测荧光信号。有人用过这种方法吗？
能否分享一下经验?
多谢 |
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y*******i
发帖数: 96 | 3 刚来一个实验室做博后，以前的博后走了，也没有具体的protocol,我们有pBABE和
pBABE-ras retroviral vector. 这些载体是可以直接用fugene-6转染到人的细胞（比
如MCF-7)中，还是需要先把这些载体包裹到virus中，然后再感染细胞．目的是要看到
ras-induced senescence.好像文献中都是需要packing,然后再感染细胞．
多谢 |
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y*******i
发帖数: 96 | 4 想在MCF-7乳腺癌细胞中induce senescence |
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c*******7
发帖数: 314 | 5 MCF-7有p53么？没p53应该不能用ras induce senescence
要用retro-virus，而且要量高一些才行 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 6 我觉得目前的marker都是不确定的。P53的确不是必需的，p16, p21 都不是。
我的senescent cell p16下降。
P19, |
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O******e
发帖数: 4845 | 7 你这个染色结果很难解释，即使你两个pH值下都做来通过染色差异来显示。不过如果
结合几个senescence markers的WB结果，应该能基本过关吧。
不过最关键的是你的小鼠出现了什么样的phenotype。
P19, |
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y******6
发帖数: 294 | 8 在cancer cell里看senescence，只用了beta-gal staining，reviewer让我们用至少两
种独立的方法来证明，想请问还有什么方法？看SAHF？
多谢！ |
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S**********e
发帖数: 1789 | 9 这种reviewer最烦，senescence的marker除了这个好像别的都不可靠。r-H2AX算吗？
p21 p16我都试过，都不是必需的。SASP应该算。campisi的review里说 irreversible
growth arrest;DNA damage; B-gal; p16, SASP |
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y******6
发帖数: 294 | 10 这两个我都看过，p16没什么变化，p21有微弱的升高
看来要么是我的senescence的确不强，要么就是这两个不必须 |
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S**********e
发帖数: 1789 | 11 marker已经是做senescence的瓶颈了。 |
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s********n
发帖数: 248 | 12 请问哪位用过cell senescence kit,很多公司都有自己的kit, 比如Cell Signaling,
Millipore, Sigma.....
哪家公司的好用啊？
先多谢啦！ |
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g****1
发帖数: 261 | 13 http://www.bbc.co.uk/news/health-15552964
The onset of wrinkles, muscle wasting and cataracts has been delayed and
even eliminated in mice, say researchers in the US.
It was done by "flushing out" retired cells that had stopped dividing. They
accumulate naturally with age.
The scientists believe their findings could eventually "really have an
impact" in the care of the elderly.
Experts said the results were "fascinating", but should be taken with a bit
of caution.
The study, published in Nature,... 阅读全帖 |
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v*******e
发帖数: 11604 | 14 先申明一下，我不是业界大牛，只是因为感兴趣所以读了不少这个方面的文章。所以我
说的话都不一定是对的。
看了一批文章，总结这个故事最make sense。修改下不准确的地方。加reference。
细胞在G2的时候，由于各种因素造成DNA损坏（过氧化，辐射，端粒太短，某些致癌基
因表达导致SSB或者DSB等），引起P53表达，P53表达引起P21表达，P21的水平高到一定
程度就会把cyclin B1关进细胞核不出来【Krenning 2014】，加上其他P21影响的其他
途径（cdk1（次要）, RB（比前者重要）， 等）导致细胞跳过M，直接进入G1【Ye
2013, Johmura 2014】或者某些别的致癌基因表达，虽然没有DNA损坏，但是只要引起
DDR，也可以导致细胞跳过M，直接进入G1。或者，强制引起P53表达，或者强制P21表达
，或者什么别的原因导致细胞跳过M，直接进入G1
【Krenning 2014, Johmura 2014, Sussman 2014】。这样的细胞是4倍体，如果继续细
胞周期则会先8倍体然后分裂；因为多个centrosome或者其他原因会导致细胞染... 阅读全帖 |
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v*******e
发帖数: 11604 | 15
他那篇文章老，所以senescence用得不清楚，第一页，他把分裂53次后的细胞叫做
senescent细胞。然后这个分裂53次的细胞（其中大部分在现在的意义上是非senescent
的）里面，大部分是2N的G1细胞，这是对的，这就是图一，和table1说的事。但是它们
不是现在意义上的senescent细胞，只是他的分裂53次的细胞，其中少部分是老化的，
大部分是还有分裂能力的。
图3的最后一个panel才是现在意义上的senescent细胞，是大体积的细胞，其中少数是
2N，大部分是4N，自己看那两个contour图的高度(从等高线看)就知道了，右边的(4N)
多，左边的(2N)少。对比图3和图1对应的图，就知道图1是包括所有细胞（其中分裂53
次的也大部分是有分裂能力的，少部分是现代意义上的senescent细胞），图三的大体
积细胞才是现代意义上的老化细胞。 |
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v*******e
发帖数: 11604 | 16
他那篇文章老，所以senescence用得不清楚，第一页，他把分裂53次后的细胞叫做
senescent细胞。然后这个分裂53次的细胞（其中大部分在现在的意义上是非senescent
的）里面，大部分是2N的G1细胞，这是对的，这就是图一，和table1说的事。但是它们
不是现在意义上的senescent细胞，只是他的分裂53次的细胞，其中少部分是老化的，
大部分是还有分裂能力的。
图3的最后一个panel才是现在意义上的senescent细胞，是大体积的细胞，其中少数是
2N，大部分是4N，自己看那两个contour图的高度(从等高线看)就知道了，右边的(4N)
多，左边的(2N)少。对比图3和图1对应的图，就知道图1是包括所有细胞（其中分裂53
次的也大部分是有分裂能力的，少部分是现代意义上的senescent细胞），图三的大体
积细胞才是现代意义上的老化细胞。 |
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h******y
发帖数: 351 | 17 你说的比较温和是指什么？
来源于很多组织的人的fibroblast可以通过overexpress hTERT得到immortalization，
这是由于人的fibroblast在体外培养条件下的senescence多是由于端粒渐行缩短而导致
的（telomere-dependent replicative senescence）。与人的fibroblast不同，体外
培养中MEF的senescence并不是由于端粒缩短引起的,而是由于如前所述的过氧基团累积
oxidative stress induced DNA damage。研究表明senescence的MEF的端粒还很长，而
且MEF中有较高的mTERT表达，所以过表达mTERT并不能有效immortalize MEF。因为要抑
制p53和Rb通路，所以表达异源的SV40 T和HPV16 E6/E7都可以immortalize MEF。当然
这样得到的细胞株，由于这些病毒蛋白的过量表达，基因组并不稳定，长久培养会出现
嬗变。
3T3办法引起的自发immortalization实际上主要是由于自发的p53通路抑制（p53 loss... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 18 En
one aspect:
To keep stability and safety of Somatic cell Reprogramming to iPS cell
pls refer
Hamada M. et al. (2012)
Reprogramming to Pluripotency Can Conceal Somatic Cell Chromosomal
Instability.
PLoS Genet. 8: e1002913.
Abstract
ignored
These findings suggest that aneuploid cells can be selected for or against
during reprogramming depending on the W-CIN gene defect and present the
novel concept that somatic cell W-CIN can be concealed in the pluripotent
state. Thus, karyotypic analysis of s... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 19 是呀，你这个说法跟kauffman的想法很像，他的主要观点就是原始汤里面的偶然的几个
分子催化了其他分子，然后又有其他分子，和其他分子，这样说不定又favor了一开始
那几个分子，链式来链式去就出现了生命了。
某种生命的出现又让其他生命更容易生存，这样也是链式反应。
我才是刚知道有这么个人， 我这里说的还是主要这本书上的东西，wiki了一下他，被
称作理论生物学家，据说理论生物学家不怎么受实验生物学家待见的，呵呵。
我最近看了一些aging的theory。有一个williams，他说，当一个“senescence gene”
出现以后（他在那篇paper里混用了senescence和aging，这里是aging的意思），就
favor了其他gene的出现，这样其他的aging 的基因也就安下家了。我看这本书的时候
就不由得又想起这篇paper。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 20 Menopause or more accurately reproductive senescence happens in rodents too.
However, in rodents reproductive senescence does not come with total loss of
estrogen/progesterone. It is more diverse than in primates or human.
There can be stages where rodents are in constant estrus/constant diestrus, etc
..
claim
that,
think |
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D*a
发帖数: 6830 | 21 我说的是KO完了跟正常老鼠比，拿到这篇文章就是清除senescence的细胞跟正常老鼠比
，而不是在早衰的老鼠里面弄某基因的KO，或者在早衰的老鼠里面清除senescence的细
胞。 |
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b***s
发帖数: 14 | 22 先看看无数的CNS是什么就知道了，尤其第一作者
列子先：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18267069
Oncogenic BRAF Induces Senescence and Apoptosis through Pathways Mediated by
the Secreted Protein IGFBP7
Narendra Wajapeyee1, Ryan W. Serra1, Xiaochun Zhu1, Meera Mahalingam2 and
Michael R. Green1, Go To Corresponding Author,
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20478260
Cell. 2010 May 14;141(4):717-27.
IGFBP7 is not required for B-RAF-induced melanocyte senescence. |
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b***s
发帖数: 14 | 23 先看看无数的CNS是什么就知道了，尤其第一作者
列子先：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18267069
Oncogenic BRAF Induces Senescence and Apoptosis through Pathways Mediated by
the Secreted Protein IGFBP7
Narendra Wajapeyee1, Ryan W. Serra1, Xiaochun Zhu1, Meera Mahalingam2 and
Michael R. Green1, Go To Corresponding Author,
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20478260
Cell. 2010 May 14;141(4):717-27.
IGFBP7 is not required for B-RAF-induced melanocyte senescence. |
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B******f
发帖数: 2489 | 24 最近几天看到生物版又有人讨论起来cancer research方向来，不由挠动俺的一点点小
想法。
俺曾经做过几年癌症研究，也发过几篇说的过去的cancer课题论文，应该说对癌症还是
有一点点皮毛的了解的。现就自己一点点局限的认识，跟大家交流几句。因为俺已经离
开基础研究领域了，要是谁从这点交流中得到一点灵感，万一得了炸药奖或将来卖个牛
x的抗癌药，千万要pm俺一下，好替你高兴。
单刀直入说吧，一句话概括：俺觉得现在癌症基础研究方面有个很大的缺陷，即对分化
（differentiation)投入的力量过于薄弱，而主要精力仍然盯在proliferation和
apoptosis上。
怀疑是不是很多纯生物专业毕业的同仁不太了解癌症的病理分级分期。在病理上，定性
一个癌凶猛与否的最重要指标就是differention程度，而proliferation和apoptosis的
markers如Ki67，p53等只在很少数的癌症诊断中使用。一般而言，分化越低，
prognosis越差。
人类现在治疗癌症的基本或主要手段是什么？绝大多数都是能切则切，首选手术；然后
是放疗，化疗；生物制剂如Gleev... 阅读全帖 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 25 有很多senescent细胞还是二倍体的吧。senescent细胞有一定的生理功能，比如能够分
泌很多细胞因子，可以remodel niche/tissue，所以不能直接自杀了事，而以一种可控
的方式清除。 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 26 有很多senescent细胞还是二倍体的吧。senescent细胞有一定的生理功能，比如能够分
泌很多细胞因子，可以remodel niche/tissue，所以不能直接自杀了事，而以一种可控
的方式清除。 |
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c*****g
发帖数: 21627 | 27 By DAVID A. STOCKMAN
GREENWICH, Conn. -- The Dow Jones and Standard & Poor’s 500 indexes reached
record highs on Thursday, having completely erased the losses since the
stock market’s last peak, in 2007. But instead of cheering, we should be
very afraid.
David Stockman
Over the last 13 years, the stock market has twice crashed and touched off a
recession: American households lost $5 trillion in the 2000 dot-com bust
and more than $7 trillion in the 2007 housing crash. Sooner or later —
within a ... 阅读全帖 |
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b******n
发帖数: 82 | 28 Thank you all for the suggestions.
We plan to apply for a research award which is for "Non-invasive cancer
ablation treatment research". Our therapeutic strategy could be sth like "
induction of skin tumor regression by a pro-senescence approach" (lure
cancer cells to sleep). Do you guys think this could be somehow regarded as
"non-invasive cancer ablation treatment"? |
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c*******t
发帖数: 953 | 29
这样两个著名教授，被你说成是玩进化论的宗教人士：
http://en.wikipedia.org/wiki/George_C._Williams
Williams is a professor emeritus of biology at the State University of New
York at Stony Brook. He is best known for his vigorous critique of group
selection. The work of Williams in this area, along with W. D. Hamilton,
John Maynard Smith and others led to the development of a gene-centric view
of evolution in the 1960s.
Williams' 1957 paper Pleiotropy, Natural Selection, and the Evolution of
Senescence is one of the most |
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s******l
发帖数: 25 | 30 RT, 小弟初来乍到，有过6次审稿经验，现急求各类审稿机会，跪求各位大牛多多提供
机会，感激涕零。
小弟可以提供CV！ |
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a******y
发帖数: 15 | 31 努力攒审稿中， 请各位大侠赐审稿机会。 专业方向是衰老，癌症,干细胞，神经科学:
cell Senescence/aging, cancer,stem cell, neuroscience
万分感谢。
请站内邮箱联系。 |
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s*******g
发帖数: 414 | 32 Title: Arabidopsis RabF1 (ARA6) is involved in salt stress and dark-induced
senescence (DIS)
要的把CV发给我，我给forward给editor:>
[email protected]/* */ |
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s********m
发帖数: 281 | 33 http://news.bbc.co.uk/2/hi/uk/4003063.stm
We will be able to live to 1,000'
By Dr Aubrey de Grey
University of Cambridge
Aubrey de Grey: "The first person to live to 1,000 might be 60 already"
Life expectancy is increasing in the developed world. But Cambridge
University geneticist Aubrey de Grey believes it will soon extend
dramatically to 1,000. Here, he explains why.
Ageing is a physical phenomenon happening to our bodies, so at some
point in
the future, as medicine becomes more and more powe... 阅读全帖 |
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n*********b
发帖数: 140 | 35 They appear to be senescent cells. |
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h******y
发帖数: 1374 | 39 癌细胞已经有oncogenele
再加一个oncogene进去有意义吗？
这样的manuscript已经被我们实验室kill了很多了 |
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y*******i
发帖数: 96 | 40 新来了一个实验室快两个月了，做啥都不顺，co-ip，senescence assay都做得一团糟
，不知道是呆的时间还不够长，还是这些实验本身难做，每周都要跟导师汇报，每次都
是负结果，抱怨一下． |
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h******y
发帖数: 1374 | 41 请问你们的senescence assay具体是怎么做的呢？ |
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h******y
发帖数: 1374 | 42 请问这些表达LC3II的细胞有没有可能也undergo senescence呢？ |
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a*****g
发帖数: 543 | 43 Just my two cents:
1. 我不反对也不支持CSC的model.但是光从mutation的普遍性来说并不能否定CSC. 我
们现在还没法确定这些genetic heterogeneity是driver 还是passager.大多数只是ca
ncer的result而不是cause。Moreover, it is possible that CSC and Non-CSCs all
have genetic changes;remember the so-called CSCs don't have to follow the
biology of typical stem cells.
If cancer strictly follows evolution model, should one imagine certain gene
tic lesions gain dominance?
As for the genomic stability, why should we believe it is promoting tumor?
As far as I know,... 阅读全帖 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 44 Insightful, but just argue some points:
1. "If cancer strictly follows evolution model, should one imagine certain
genetic lesions gain dominance?" 某些肿瘤可能的确是这样的,比如一些EGFR突变
的NSCLC,表现出oncogene addictive,这种genetic lesion似乎dominate肿瘤的生长,因
为对突变的EGFR进行target therapy（erlotinib）具有疗效．当然oncogene
addictive也并不排斥CSC.
2. 关于癌基因会诱导正常细胞senescence or apoptosis.这是事实，但一种可能的解
释是，这种或这些癌基因并非是tumor initiator,它们只是promoter或maintainer;也
就是说在它们异常之前，有其他genetic lesions作为tumor initiating factors，而
这些我们还没找到？
3.对Down syndrome了... 阅读全帖 |
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l********1
发帖数: 54 | 45 Thanks! I'll try to stain p16, another marker for senescence. |
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p******6
发帖数: 410 | 46 跟贴同问一下，那些是比较公认的标准senescence marker,似乎SA-B-Gal是个金标准，
不用它的话p16, p21, HP1 gamma以及DAPI染出的heterochromatin foci能取代吗？ |
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z****g
发帖数: 3340 | 47 最近突然对这个领域产生了兴趣,不知道有哪些牛人在这个领域? |
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z****g
发帖数: 3340 | 49 这个要是大牛的话，也太寒碜了一点。先不说重要的发现，就是比较象样的
Publication也没有。如果是你老板的话，我就先得罪了。 |
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b******n
发帖数: 82 | 50 你如果做这个方向居然不知道谁是大牛简直就是白做了 |
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