K*C
发帖数: 2825 | 1 用Quickchange kit，之前做过15个碱基换15个碱基，现在做48个换45个不成功，问问
大家最多做过多少换多少。 |
a***e
发帖数: 1010 | 2 if you use fusion PCR, you can change a lot. |
H****7
发帖数: 159 | 3 几百个我都换过。
【在 K*C 的大作中提到】
: 用Quickchange kit，之前做过15个碱基换15个碱基，现在做48个换45个不成功，问问
: 大家最多做过多少换多少。
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K*C
发帖数: 2825 | 4 那primer得多大啊
【在 H****7 的大作中提到】
: 几百个我都换过。
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c*********r
发帖数: 1312 | |
L*****t
发帖数: 56 | 6 做点突变的kit都是骗钱的，割胶纯化的引物也没必要，看看那些kit的说明书就知道是
怎么回事了。
我自己一次做过54碱基的置换，至于一次换几百个那用的应该是Casette法，直接酶切
然后重新连接的。 |
c*********r
发帖数: 1312 | 7 多谢分享经验，good to know。能分享一下protocol或者具体的做法吗？
刚查到一篇nature protocol，是你说的方法吗？
Gene splicing and mutagenesis by PCR-driven overlap extension
Karin L Heckman & Larry R Pease
http://www.nature.com/nprot/journal/v2/n4/full/nprot.2007.132.h
谢谢！
【在 L*****t 的大作中提到】
: 做点突变的kit都是骗钱的，割胶纯化的引物也没必要，看看那些kit的说明书就知道是
: 怎么回事了。
: 我自己一次做过54碱基的置换，至于一次换几百个那用的应该是Casette法，直接酶切
: 然后重新连接的。
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