D******9 发帖数: 2665 | 1 用了RIPA buffer,蛋白几乎都在cell pellet里。 谢谢 |
c*********r 发帖数: 1312 | |
c****g 发帖数: 93 | 3 Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。
RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大:我们的做法是加上RIPA,然后用
1ml针管+#7针头needle 10 times;最高速离心10min @4oC后去上清即可。 |
s*******e 发帖数: 1010 | 4 to extract protein from membrane, you need to allow a 0.5-1h incubation&
shaking time. If you worried that NP40 is not good enough to solubilize
lipid membrane, an additional detergent such as DDM could be added into your
lysis buffer. |
c*********r 发帖数: 1312 | 5 cellcreator,您好:
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同时附加了如下留言给 chiang.
多谢分享经验!
站务
【在 c****g 的大作中提到】 : Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。 : RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大:我们的做法是加上RIPA,然后用 : 1ml针管+#7针头needle 10 times;最高速离心10min @4oC后去上清即可。
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c*********r 发帖数: 1312 | 6 cellcreator,您好:
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站务
your
【在 s*******e 的大作中提到】 : to extract protein from membrane, you need to allow a 0.5-1h incubation& : shaking time. If you worried that NP40 is not good enough to solubilize : lipid membrane, an additional detergent such as DDM could be added into your : lysis buffer.
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r******y 发帖数: 21907 | 7 去还是取?
【在 c****g 的大作中提到】 : Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。 : RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大:我们的做法是加上RIPA,然后用 : 1ml针管+#7针头needle 10 times;最高速离心10min @4oC后去上清即可。
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D******9 发帖数: 2665 | 8 DNMT2009,您好:
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thx for the information
DNMT2009,您好:
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thx for the information
站务 |
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c****g 发帖数: 93 | 9 sorry,应该是取,我们的蛋白在上清里。
【在 r******y 的大作中提到】 : 去还是取?
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r******y 发帖数: 21907 | 10 谢谢,不然就差千力了,你们不用SDS吗?是不是NP40不那么影响co-IP?
【在 c****g 的大作中提到】 : sorry,应该是取,我们的蛋白在上清里。
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