D******9
发帖数: 2665 | 1 用了RIPA buffer，蛋白几乎都在cell pellet里。 谢谢 |
c*********r
发帖数: 1312 | |
c****g
发帖数: 93 | 3 Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。
RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大：我们的做法是加上RIPA，然后用
1ml针管+#7针头needle 10 times；最高速离心10min @4oC后去上清即可。 |
s*******e
发帖数: 1010 | 4 to extract protein from membrane, you need to allow a 0.5-1h incubation&
shaking time. If you worried that NP40 is not good enough to solubilize
lipid membrane, an additional detergent such as DDM could be added into your
lysis buffer. |
c*********r
发帖数: 1312 | 5 cellcreator，您好：
您转给 chiang,现金(伪币):10,收取手续费:0.1
同时附加了如下留言给 chiang.
多谢分享经验！
站务
【在 c****g 的大作中提到】
: Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。
: RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大：我们的做法是加上RIPA，然后用
: 1ml针管+#7针头needle 10 times；最高速离心10min @4oC后去上清即可。
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c*********r
发帖数: 1312 | 6 cellcreator，您好：
您转给 stilltide,现金(伪币):10,收取手续费:0.1
同时附加了如下留言给 stilltide.
多谢分享经验！
站务
your
【在 s*******e 的大作中提到】
: to extract protein from membrane, you need to allow a 0.5-1h incubation&
: shaking time. If you worried that NP40 is not good enough to solubilize
: lipid membrane, an additional detergent such as DDM could be added into your
: lysis buffer.
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r******y
发帖数: 21907 | 7 去还是取？
【在 c****g 的大作中提到】
: Maybe NP40 or charps is better for COIP of membrane proteins。
: RIPA lysis buffer裂cells这一点上应该问题不大：我们的做法是加上RIPA，然后用
: 1ml针管+#7针头needle 10 times；最高速离心10min @4oC后去上清即可。
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D******9
发帖数: 2665 | 8 DNMT2009，您好：
您转给 stilltide,现金(伪币):10,收取手续费:0.1
同时附加了如下留言给 stilltide.
thx for the information
DNMT2009，您好：
您转给 chiang,现金(伪币):10,收取手续费:0.1
同时附加了如下留言给 chiang.
thx for the information
站务 |
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c****g
发帖数: 93 | 9 sorry,应该是取，我们的蛋白在上清里。
【在 r******y 的大作中提到】
: 去还是取？
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r******y
发帖数: 21907 | 10 谢谢，不然就差千力了，你们不用SDS吗？是不是NP40不那么影响co-IP?
【在 c****g 的大作中提到】
: sorry,应该是取，我们的蛋白在上清里。
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