b**********8
发帖数: 349 | 1 如题，最好详细点的，特别是蛋白酶K消化的lysis buffer配方能否详细介绍下，多谢 |
j****x
发帖数: 1704 | 2 别费劲了，直接上kit
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，最好详细点的，特别是蛋白酶K消化的lysis buffer配方能否详细介绍下，多谢
|
b**********8
发帖数: 349 | |
j****x
发帖数: 1704 | 4 说真的，老板要真是没钱到连个genomic DNA extraction kit都不买的地步，赶紧想办
法走人吧，耗下去伤不起啊（话不好听见谅）。
找到一个我们这里十年前用的protocol，发到你信箱了。google一下应该也能找到很多。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 小实验室啊，老板没钱啊，来点更有建设性的意见撒
|
c********b
发帖数: 363 | 5 万能的trizol不是简单又好用吗？
放狗查trizol同时提RNA,蛋白，DNA
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，最好详细点的，特别是蛋白酶K消化的lysis buffer配方能否详细介绍下，多谢
|
n********k
发帖数: 2818 | 6 hey, rich kid:)))
多。
【在 j****x 的大作中提到】
: 说真的，老板要真是没钱到连个genomic DNA extraction kit都不买的地步，赶紧想办
: 法走人吧，耗下去伤不起啊（话不好听见谅）。
: 找到一个我们这里十年前用的protocol，发到你信箱了。google一下应该也能找到很多。
|
j****x
发帖数: 1704 | 7 这是讲相声呢吧...啥时候这种Kit也成奢侈品了？那提个质粒不是还得自己配溶液1/2/
3？
这种kit满大街白菜价了吧，我们使的不到2sample,据说美国卖的更便宜。这个钱都
不愿花的话，其他实验还咋开展啊。。。
【在 n********k 的大作中提到】
: hey, rich kid:)))
:
: 多。
|
w******n
发帖数: 767 | 8 好像有人用NAOH裂解,再加HCl中和，连蛋白酶K都不用。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 如题，最好详细点的，特别是蛋白酶K消化的lysis buffer配方能否详细介绍下，多谢
|
b**********8
发帖数: 349 | 9
2/
这位战友用不着惊讶，因为我们实验室很少handle genomic DNA，所以你说的那些kit
我们确实没有，这次我只有两个sample，就想用传统的蛋白酶K消化酚氯仿抽提得了，
以前做过组织的，现在是培养的贴壁细胞，处理上应该有点差别，而且样品比较宝贵，
所以想搞个可靠地protocol，kit就不考虑了。老板虽然钱不多，但是该买的东西从来
不眨眼的，不过为了两管DNA还要去买个kit，我自己都不好意思开口啊。
另外，有谁知道TNE buffer的配方不？我们组之前的posdoc一直用这个buffer+蛋白酶K
消化细胞，然后直接加饱和氯化钠，离心取上清后用乙醇沉淀。不过最近这个buffer找
不到了，她也没留下配方，网上找了几个貌似差别还蛮大，谁用过的，确实可靠的，甩
一个给我吧，谢了。
【在 j****x 的大作中提到】
: 这是讲相声呢吧...啥时候这种Kit也成奢侈品了？那提个质粒不是还得自己配溶液1/2/
: 3？
: 这种kit满大街白菜价了吧，我们使的不到2sample,据说美国卖的更便宜。这个钱都
: 不愿花的话，其他实验还咋开展啊。。。
|
c********b
发帖数: 363 | 10 好吧，轮到我说別费劲了，上kit,7.14刀而已，可以提4个。从midsci或者amresco买
http://www.ibisci.com/product_view.cfm?cat=79
kit
酶K
【在 b**********8 的大作中提到】
:
: 2/
: 这位战友用不着惊讶，因为我们实验室很少handle genomic DNA，所以你说的那些kit
: 我们确实没有，这次我只有两个sample，就想用传统的蛋白酶K消化酚氯仿抽提得了，
: 以前做过组织的，现在是培养的贴壁细胞，处理上应该有点差别，而且样品比较宝贵，
: 所以想搞个可靠地protocol，kit就不考虑了。老板虽然钱不多，但是该买的东西从来
: 不眨眼的，不过为了两管DNA还要去买个kit，我自己都不好意思开口啊。
: 另外，有谁知道TNE buffer的配方不？我们组之前的posdoc一直用这个buffer+蛋白酶K
: 消化细胞，然后直接加饱和氯化钠，离心取上清后用乙醇沉淀。不过最近这个buffer找
: 不到了，她也没留下配方，网上找了几个貌似差别还蛮大，谁用过的，确实可靠的，甩
|
j****x
发帖数: 1704 | 11 这位战友，你早说你就2个样本啊，而且还比较宝贵，那就更应该考虑kit了。不过允许
我嘲笑一下读书读傻了都，呵呵。
最简单的办法，打个电话给公司，直接要一个demo，大部分公司（尤其中小公司）都会
屁颠颠的立即给你寄一个4-10个样左右的demo kit，足够你用的了。而且这种基本试剂
盒原理简单，不存在不同公司效率差别很大的可能，放心使用，比你用传统酚仿抽提肯
定靠谱。
对BTW，于提取基因组DNA，基本上组织样本和培养的贴壁细胞没有本质差别，以前的
protocol都是一致的，现在的kit也都是两者通用。
kit
酶K
【在 b**********8 的大作中提到】
:
: 2/
: 这位战友用不着惊讶，因为我们实验室很少handle genomic DNA，所以你说的那些kit
: 我们确实没有，这次我只有两个sample，就想用传统的蛋白酶K消化酚氯仿抽提得了，
: 以前做过组织的，现在是培养的贴壁细胞，处理上应该有点差别，而且样品比较宝贵，
: 所以想搞个可靠地protocol，kit就不考虑了。老板虽然钱不多，但是该买的东西从来
: 不眨眼的，不过为了两管DNA还要去买个kit，我自己都不好意思开口啊。
: 另外，有谁知道TNE buffer的配方不？我们组之前的posdoc一直用这个buffer+蛋白酶K
: 消化细胞，然后直接加饱和氯化钠，离心取上清后用乙醇沉淀。不过最近这个buffer找
: 不到了，她也没留下配方，网上找了几个貌似差别还蛮大，谁用过的，确实可靠的，甩
|
t*d
发帖数: 1290 | 12 好主意。
如果以前没有干过这个，样本有这么珍贵，最好弄几个无关样本练练手。
【在 j****x 的大作中提到】
: 这位战友，你早说你就2个样本啊，而且还比较宝贵，那就更应该考虑kit了。不过允许
: 我嘲笑一下读书读傻了都，呵呵。
: 最简单的办法，打个电话给公司，直接要一个demo，大部分公司（尤其中小公司）都会
: 屁颠颠的立即给你寄一个4-10个样左右的demo kit，足够你用的了。而且这种基本试剂
: 盒原理简单，不存在不同公司效率差别很大的可能，放心使用，比你用传统酚仿抽提肯
: 定靠谱。
: 对BTW，于提取基因组DNA，基本上组织样本和培养的贴壁细胞没有本质差别，以前的
: protocol都是一致的，现在的kit也都是两者通用。
:
: kit
|
