l**k
发帖数: 45267 | 1 扩增一个100bp片段，同时通过延长primer给两端各增加30bp的2 step pcr，要求尽可
能高的准确率，用哪个酶比较好？PfuUltra, kapa Hifi, 还是vent？ |
j****x
发帖数: 1704 | 2 100bp的片段，需要Hifi吗？什么样的downstream application？
【在 l**k 的大作中提到】
: 扩增一个100bp片段，同时通过延长primer给两端各增加30bp的2 step pcr，要求尽可
: 能高的准确率，用哪个酶比较好？PfuUltra, kapa Hifi, 还是vent？
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d**********t
发帖数: 20415 | 3 100bp。。。用taq也不容易出突变啊
干啥用的？
【在 l**k 的大作中提到】
: 扩增一个100bp片段，同时通过延长primer给两端各增加30bp的2 step pcr，要求尽可
: 能高的准确率，用哪个酶比较好？PfuUltra, kapa Hifi, 还是vent？
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C*******e
发帖数: 4348 | 4 除了楼上大家说的
100 bp + 30 bp + 30 bp也就160bp嘛
可以合成两个<100bp的oligo然后直接anneal，再加点PCR mix两端补齐啊 |
j****x
发帖数: 1704 | 5 这个错误率相比PCR可能更高
【在 C*******e 的大作中提到】
: 除了楼上大家说的
: 100 bp + 30 bp + 30 bp也就160bp嘛
: 可以合成两个<100bp的oligo然后直接anneal，再加点PCR mix两端补齐啊
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p*****m
发帖数: 7030 | 6 话说为啥要2 step?
【在 l**k 的大作中提到】
: 扩增一个100bp片段，同时通过延长primer给两端各增加30bp的2 step pcr，要求尽可
: 能高的准确率，用哪个酶比较好？PfuUltra, kapa Hifi, 还是vent？
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d***y
发帖数: 1850 | 7 这么短的片断，用你上面说的哪个都行吧。。。。
还有两端都加30bp需要2 step？？ |
l**k
发帖数: 45267 | 8 因为这个100bp是几千个seq组成的genomic文库，接下来要做单分子测序确定每个seq在
文库中的比例
【在 j****x 的大作中提到】
: 100bp的片段，需要Hifi吗？什么样的downstream application？
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C*******e
发帖数: 4348 | 9 这个倒是，现在IDT也不咋可靠了
【在 j****x 的大作中提到】
: 这个错误率相比PCR可能更高
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s******s
发帖数: 13035 | 10 随便找个seq library的protocol应该有。估计HifiTaq肯定没问题
【在 l**k 的大作中提到】
: 因为这个100bp是几千个seq组成的genomic文库，接下来要做单分子测序确定每个seq在
: 文库中的比例
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d****u
发帖数: 1553 | 11 Hi fi taq, accuprime pfx都挺好用的，前者效率更高。 |
l**k
发帖数: 45267 | 12 thanks all
【在 d****u 的大作中提到】
: Hi fi taq, accuprime pfx都挺好用的，前者效率更高。
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