i*********0
发帖数: 915 | 1 最近做个一个gene ko,发现胚胎在3.5-6.5之间几死掉了,所以我一直认识也不可能拿到
-/- 的ES cells.
这几天发现用F/F的ES细胞,在表达cre transgene以后,发现居然可以拿到-/-的ES cell
(PCR genotyping和southern 都证
明了-/-的存在).
唯一都的解释,就是这个东西和ES细胞的maintenance无关,而和发育有关. |
s******y
发帖数: 28562 | 2 这不挺正常的么？
有些基因可能对分化什么的有关啊。
cell
【在 i*********0 的大作中提到】
: 最近做个一个gene ko,发现胚胎在3.5-6.5之间几死掉了,所以我一直认识也不可能拿到
: -/- 的ES cells.
: 这几天发现用F/F的ES细胞,在表达cre transgene以后,发现居然可以拿到-/-的ES cell
: (PCR genotyping和southern 都证
: 明了-/-的存在).
: 唯一都的解释,就是这个东西和ES细胞的maintenance无关,而和发育有关.
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i*********0
发帖数: 915 | 3 举个例子撒。
我看到现在大多的paper都是直接说老鼠能不能活，然后ES细胞的东西什么都没有。
另外问一下：现在撇开动物，纯粹做gene在ES细胞里面的功能算不算一个不错的方向。 |
a******n
发帖数: 392 | 4 你是用MEF培养ES细胞的吗？会不会MEF提供了你的细胞的需要的某种蛋白呢？ |
s******y
发帖数: 28562 | 5 很多结构蛋白，都是胚胎发育必需的，但是和单个细胞的维护没有关系的。
具体例子我倒不清楚，但是，如果我要猜的话，这几个蛋白应该都符合
你说的条件：
beta-actin
talin-1
N-cadherin
【在 i*********0 的大作中提到】
: 举个例子撒。
: 我看到现在大多的paper都是直接说老鼠能不能活，然后ES细胞的东西什么都没有。
: 另外问一下：现在撇开动物，纯粹做gene在ES细胞里面的功能算不算一个不错的方向。
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f*****Y
发帖数: 20 | 6 胚胎是一个比cell culture复杂的多的系统，需要很多signaling的协调才能正常的发
育。而ES cells只是胚胎的一个cell lineage的culture adaptation，是一个简单的多
的系统。比如说，cdx2 mutant embryo因为trophectoderm defect 无法存活(
embryonic lethal E3.5-5.5), 但是cdx2 ES cells 是可能的。还有nanog mutant
embryo is lethal，Nanog null ES cells 据说可以proliferate many passages. |
i*********0
发帖数: 915 | 7 不是吧，200多KD的蛋白也能在MEF和ES细胞之间流动吗？ |
j********r
发帖数: 156 | 8 请问楼主用adeno-cre 拿到ko的ES细胞吗？And you might try self-renewal and
differentiation assay. |
i*********0
发帖数: 915 | 9 我用的是pcag-gfp-cre 作的transfection，然后sort out gfp positive cells 作培
养。
【在 j********r 的大作中提到】
: 请问楼主用adeno-cre 拿到ko的ES细胞吗？And you might try self-renewal and
: differentiation assay.
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A******d
发帖数: 571 | 10 没actin细胞能活？
【在 s******y 的大作中提到】
: 很多结构蛋白，都是胚胎发育必需的，但是和单个细胞的维护没有关系的。
: 具体例子我倒不清楚，但是，如果我要猜的话，这几个蛋白应该都符合
: 你说的条件：
: beta-actin
: talin-1
: N-cadherin
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s******y
发帖数: 28562 | 11 能，有好几个不同亚基呢。敲掉一个对细胞并不是晴天霹雳的事情。
当然，细胞看起来形态不太一样就是了。
【在 A******d 的大作中提到】
: 没actin细胞能活？
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Z**********g
发帖数: 222 | 12 搭车问一下Cre的毒性问题:我用MSCV retrovector在乳腺瘤细胞中表达Cre,感觉毒性很
大.改用CreERT2,效率又很低.大家有没有什么好的方法进行in vitro recombination? |
i*********0
发帖数: 915 | 13 pCAG-GFP-Cre 貌似也是toxic,而且表达量也比较低得(从荧光强度来判断),不过
transient transfection + sorting,也就差不多了. |
