F**********6
发帖数: 90 | 1 请教大家，打抗体用的HIS-FUSION蛋白由于表达在包涵体里，所以纯化时加了尿素，请
问最后纯化出来的融合蛋白里含有的8M尿素需要去掉吗？
谢谢各位的回复 |
n***w
发帖数: 2405 | 2 I think you need to do dialysis. |
j****g
发帖数: 406 | 3 Depending on which company you use, you might not need to do that.
I purified my proteins in denatured condition and the company it is fine for
injection. So I just sent them the protein in 8M urea.
And I got quite good antibodies.
The problem is if you are going to affinity purify your antibody.
If you are, then you will need to get protein in native condition.
In my case, I lowered the IPTG concentration and lowered the temperature for
induction and only got a tiny amount of protein.
But that was enough for me to couple it to the beads and the affinity
purification worked.
And by the way the company that I used for antibody production is Cocalico.
http://www.cocalicobiologicals.com/about.html
【在 F**********6 的大作中提到】
: 请教大家，打抗体用的HIS-FUSION蛋白由于表达在包涵体里，所以纯化时加了尿素，请
: 问最后纯化出来的融合蛋白里含有的8M尿素需要去掉吗？
: 谢谢各位的回复
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s******y
发帖数: 28562 | 4 无所谓。
【在 F**********6 的大作中提到】
: 请教大家，打抗体用的HIS-FUSION蛋白由于表达在包涵体里，所以纯化时加了尿素，请
: 问最后纯化出来的融合蛋白里含有的8M尿素需要去掉吗？
: 谢谢各位的回复
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C*******e
发帖数: 4348 | 5 为什么不能打个电话问问看帮你们做抗体的公司呢？
每个公司可能protocol不一样 |
F**********6
发帖数: 90 | 6 谢谢大家的回复
我以前自己做的几个抗体都没有透析掉尿素（自己打的兔子），用来纯化抗体的抗原也
直接用溶在尿素里的DENATIVE的，但纯化抗体的效率不高，但后来做染色，WESTERN还
挺好的。
这次找公司打兔子，他们说要把尿素去掉。
再次感谢大家的回复! |
