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Biology版 - Ab purification from hybridoma cells
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6his-tagged protein purification
请教纯化抗体!急,谢谢!!
还是一些Co-IP问题
IP的elution
Re: His tag的蛋白质不能纯化, 救命
急问, 纯化出来的蛋白怎么保存?
问一个纯化蛋白的问题。ionic exchange column pools 浓缩后不经过dialysis直接上size exclusive column 是否会影响分离.
纯化蛋白过柱的洗出液内含有很多目标蛋白...
请问纯化蛋白complex
his-tagged蛋白纯化问题
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f*******g
发帖数: 35
1
请教高手一个问题, 我从hybridoma cells 纯化抗体, 得到的抗体 跑胶, 除了重链
(55KD)和轻链 (25KD)外,还有一条 带,在轻链下面。 请问这可能是什么原因造
成的呢?
谢谢了!!!
j********8
发帖数: 21
2
marker跟俺用的一样 其余的不知道:)
帮顶
V********n
发帖数: 305
3
how u purified the ab, more details please
f*******g
发帖数: 35
4
培养hybridoma cells, 收集上清, 用gamma-bind plus beads (protein G) 纯化 抗体
,然后concentrate elute. buffer change to PBS
谢谢!
m*******r
发帖数: 7495
5
你的空(不产抗体细胞)control是什么?

【在 f*******g 的大作中提到】
: 请教高手一个问题, 我从hybridoma cells 纯化抗体, 得到的抗体 跑胶, 除了重链
: (55KD)和轻链 (25KD)外,还有一条 带,在轻链下面。 请问这可能是什么原因造
: 成的呢?
: 谢谢了!!!

V********n
发帖数: 305
6
俺用的方法。也是用Protein G的办法,Buffer 用Pierce的Binding Buffer和Elution
Buffer。得到的Elution,直接用Millipore的Spin Column清洗加浓缩,选大一些的Cut
(比如50KD),避免小片段污染。
看你的胶,有小片段(~20 KD),可能是蛋白降解,也可能是小片段污染。另,高
分子处还有条带(~200KD),可检查蛋白变性是否彻底。
f*******g
发帖数: 35
7
没有control, 抗体纯化, 用什么做negative control呢? 我binding buf
fer 用的PBS, Elution buffer 用的是 Acetic A
cid,用NaOH中和, 然后用 Millipore的Spin Column
清洗 浓缩, cut好像用的是30 KD的,
浓缩的时候,很困难! 需要半小时到一小时的样子,才能浓缩,而且有很多precipitates, 不知道原因?
谢谢楼上的回复,小片段污染常见么?
c********o
发帖数: 135
8
血清里的牛IgG?
V********n
发帖数: 305
9
呵呵,RE这个。没注意LZ的培养条件,俺一般是从ascites开始提的。

【在 c********o 的大作中提到】
: 血清里的牛IgG?
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