b*********2
发帖数: 35 | 1 用Cy3标记的siRNA很久了。一直都是红色荧光。
最近读两篇文章多说CY3是绿色荧光。
WiKi上也是这么说的：Cy3 dyes are green (~550 nm excitation, ~570 nm emission
and therefore appear green)。
到底怎么回事呢？ |
s*********y
发帖数: 387 | 2 both green laser at 514 nm or red (actually yellow) laser at 568 or 550 nm
can activate cy3.
for the emission, 570nm is the peak (thus green), however, over 700nm can
still be detected, thus red.
not 100% sure though.
emission
【在 b*********2 的大作中提到】
: 用Cy3标记的siRNA很久了。一直都是红色荧光。
: 最近读两篇文章多说CY3是绿色荧光。
: WiKi上也是这么说的：Cy3 dyes are green (~550 nm excitation, ~570 nm emission
: and therefore appear green)。
: 到底怎么回事呢？
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M*****n
发帖数: 16729 | 3 why not google it?
520 and 550 are excitation peaks
570 is the emission peak
however, there is also an emission shoulder at 600
if you excite with 550, it is difficult to observe emmision at 570 with dichrome filter, unless you have confocal with slit or Leica's AOTF. |
s*****j
发帖数: 6435 | 4
dichrome filter, unless you have confocal with slit or Leica's AOTF.
为什么? confocal with slit 是个什么东西? Leica's AOTF? 所有公司都用AOTF呀
.
【在 M*****n 的大作中提到】
: why not google it?
: 520 and 550 are excitation peaks
: 570 is the emission peak
: however, there is also an emission shoulder at 600
: if you excite with 550, it is difficult to observe emmision at 570 with dichrome filter, unless you have confocal with slit or Leica's AOTF.
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M*****n
发帖数: 16729 | 5 你要一个可以调节的emission filter, 只能detect 570nm+-几个nm.
否则你的550nm激发光会干扰的。
我以为AOTF是leica的专利呢。 |
c**p
发帖数: 36 | 6 Should be AOBS, acoustic optical beam splitter。
AOTF is acoustic optical tunable filter. You can get it everywhere, but
Leica patented AOBS.
【在 M*****n 的大作中提到】
: 你要一个可以调节的emission filter, 只能detect 570nm+-几个nm.
: 否则你的550nm激发光会干扰的。
: 我以为AOTF是leica的专利呢。
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M*****n
发帖数: 16729 | 7 sorry, 我记错了
应该是AOBS。
【在 c**p 的大作中提到】
: Should be AOBS, acoustic optical beam splitter。
: AOTF is acoustic optical tunable filter. You can get it everywhere, but
: Leica patented AOBS.
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e****l
发帖数: 204 | 8 Cy3在 532 nm 激光的激发下，出来的荧光应该是绿色的
但是在普通的光线条件下，标记的样品看起来是粉红色的。这时候看见的应该不是荧光。
同样，Cy5的荧光是红色的。但标记的样品在普通光线条件下看起来是蓝色的。
emission
【在 b*********2 的大作中提到】
: 用Cy3标记的siRNA很久了。一直都是红色荧光。
: 最近读两篇文章多说CY3是绿色荧光。
: WiKi上也是这么说的：Cy3 dyes are green (~550 nm excitation, ~570 nm emission
: and therefore appear green)。
: 到底怎么回事呢？
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f*******e
发帖数: 628 | 9 吸收最强的在绿色光谱，所以白光的自然光下，肉眼看到的是绿色的互补色，也就是红
色。而荧光的 emission 最强在 570，所以荧光检测到的应该是绿色。
emission
【在 b*********2 的大作中提到】
: 用Cy3标记的siRNA很久了。一直都是红色荧光。
: 最近读两篇文章多说CY3是绿色荧光。
: WiKi上也是这么说的：Cy3 dyes are green (~550 nm excitation, ~570 nm emission
: and therefore appear green)。
: 到底怎么回事呢？
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b*********2
发帖数: 35 | 10 我用confocal拍的Cy3-siRNA，一直都是红色荧光。 |
T**********t
发帖数: 1604 | 11 那是软件里为了区分不同荧光标记而设置的pseudo color吧，可以改的。你可以把它设
成自定义的任何颜色。显微镜捕捉记录下来的只是单色图像而已，颜色什么的都是软件
做的后处理。我曾经给它设过很漂亮的蓝紫色。
而且cy3和cy5的荧光用肉眼很难看见的，不信你直接用目镜看，绝对没有电脑屏幕上那
么亮的点。但是如果你眼力够好，用肉眼能看见，那荧光应该是绿色的。
据说女生的眼睛对cy3的荧光更敏感一些。
【在 b*********2 的大作中提到】
: 我用confocal拍的Cy3-siRNA，一直都是红色荧光。
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b*****l
发帖数: 9499 | 12 相机未必是单色的。还可能是三色的。我一直不理解为啥有人买三色相机。但是，对于
录像来说，可能很重要 -- 毕竟不能随时切换镜头么，分光到不同录像机上又太奢侈。
【在 T**********t 的大作中提到】
: 那是软件里为了区分不同荧光标记而设置的pseudo color吧，可以改的。你可以把它设
: 成自定义的任何颜色。显微镜捕捉记录下来的只是单色图像而已，颜色什么的都是软件
: 做的后处理。我曾经给它设过很漂亮的蓝紫色。
: 而且cy3和cy5的荧光用肉眼很难看见的，不信你直接用目镜看，绝对没有电脑屏幕上那
: 么亮的点。但是如果你眼力够好，用肉眼能看见，那荧光应该是绿色的。
: 据说女生的眼睛对cy3的荧光更敏感一些。
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Z**********g
发帖数: 222 | 13 这也取决于显微镜的emission filter吧.Filter设在570nm以上,肉眼看也应该是黄色的
,而不是绿色.Cy3的emission peak在570nm,已经是浅绿偏黄了,所以说Cy3是黄色也没错.当然,一切取决于detector filter.
【在 T**********t 的大作中提到】
: 那是软件里为了区分不同荧光标记而设置的pseudo color吧，可以改的。你可以把它设
: 成自定义的任何颜色。显微镜捕捉记录下来的只是单色图像而已，颜色什么的都是软件
: 做的后处理。我曾经给它设过很漂亮的蓝紫色。
: 而且cy3和cy5的荧光用肉眼很难看见的，不信你直接用目镜看，绝对没有电脑屏幕上那
: 么亮的点。但是如果你眼力够好，用肉眼能看见，那荧光应该是绿色的。
: 据说女生的眼睛对cy3的荧光更敏感一些。
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