w******e 发帖数: 1187 | 1 有没有遇到过过后即使做了etoh precipitation,OD curve还是不正常的情况?
我遇到过好几次A260 peak shift到 270了,对下游的实验ms也有影响。 |
T**********t 发帖数: 1604 | 2 270nm是phenol的峰,应该是你的phenol没有除干净。phenol extraction之后用氯仿再
提一次,然后再做ethanol precipitation。做ethanol precipitation的时候,用95%
的乙醇比用100%的乙醇要好。 |
w******e 发帖数: 1187 | 3 多谢啦!你干脆到我们lab来做吧,我们一帮土人每天自己瞎折腾,郁闷啊~
我用PLG column,还以为可以省了氯仿这一步呢,被欺骗了。。。你说95% vs 100
%是指沉淀那一步?不太明白为什么会有区别。
【在 T**********t 的大作中提到】 : 270nm是phenol的峰,应该是你的phenol没有除干净。phenol extraction之后用氯仿再 : 提一次,然后再做ethanol precipitation。做ethanol precipitation的时候,用95% : 的乙醇比用100%的乙醇要好。
|
T**********t 发帖数: 1604 | 4 你们招人么?我刚被我第一次面试的PI糗了一通,说我达不到他的要求还敢要H1B,让
我再表一下忠心他才考虑要不要招我,郁闷透了。说 If you are still seriously
interested in the postdoc position in my laboratory, please tell me why I
should revise my concerns listed above. 简直了。。。
做phenol extraction,氯仿这一步是不能省的,否则除不干净phenol。
乙醇蒸馏是和水共蒸馏的,最纯只能达到95%。工业上制备100%纯酒精是要在95%的基础
上再除水的,我忘了是怎么除了,反正依稀记得说是最后出来的纯酒精里,会有痕量的
苯。一般如果用做溶剂没什么问题,可是如果用来做DNA沉淀的话,如果酒精的质量不
过关,反而会影响后续的实验。
【在 w******e 的大作中提到】 : 多谢啦!你干脆到我们lab来做吧,我们一帮土人每天自己瞎折腾,郁闷啊~ : 我用PLG column,还以为可以省了氯仿这一步呢,被欺骗了。。。你说95% vs 100 : %是指沉淀那一步?不太明白为什么会有区别。
|
w******e 发帖数: 1187 | 5 多谢啦!看信
【在 T**********t 的大作中提到】 : 你们招人么?我刚被我第一次面试的PI糗了一通,说我达不到他的要求还敢要H1B,让 : 我再表一下忠心他才考虑要不要招我,郁闷透了。说 If you are still seriously : interested in the postdoc position in my laboratory, please tell me why I : should revise my concerns listed above. 简直了。。。 : 做phenol extraction,氯仿这一步是不能省的,否则除不干净phenol。 : 乙醇蒸馏是和水共蒸馏的,最纯只能达到95%。工业上制备100%纯酒精是要在95%的基础 : 上再除水的,我忘了是怎么除了,反正依稀记得说是最后出来的纯酒精里,会有痕量的 : 苯。一般如果用做溶剂没什么问题,可是如果用来做DNA沉淀的话,如果酒精的质量不 : 过关,反而会影响后续的实验。
|
T**********t 发帖数: 1604 | 6 回了。
其实你也是被我忽悠住了,我们实验室也是一帮土人在瞎折腾。都是半路出家的,拿两
篇paper大家学习一下就开做了,走了不少弯路。。。
【在 w******e 的大作中提到】 : 多谢啦!看信
|
w******e 发帖数: 1187 | 7 呵呵,搭平台确实很痛苦。最恶心的是前面的人没好好搭,随便搞点数据发了
paper,然后老板就觉得我们技术很nb了,对后面的人再做optimization就
很不爽。郁闷啊~
【在 T**********t 的大作中提到】 : 回了。 : 其实你也是被我忽悠住了,我们实验室也是一帮土人在瞎折腾。都是半路出家的,拿两 : 篇paper大家学习一下就开做了,走了不少弯路。。。
|
T**********t 发帖数: 1604 | 8 偷偷的说一句,我想换方向就是对Aptamer这东西有点儿小失望,等它做到antibody这
么成熟的程度,我怕我就成炮灰了。当然,我是悲观了一点。
【在 w******e 的大作中提到】 : 呵呵,搭平台确实很痛苦。最恶心的是前面的人没好好搭,随便搞点数据发了 : paper,然后老板就觉得我们技术很nb了,对后面的人再做optimization就 : 很不爽。郁闷啊~
|
w******e 发帖数: 1187 | 9 nod,我进lab之后也经过一阵郁闷期,后来想通了:比aptamer更忽悠的东西多了去了,
加上现在好歹aptamer专利快过期+借siRNA的东风RNA的PKPD study会越来越多,RNA
chemistry会越来越成熟廉价,现在逢低买入,观望个一两年,实在不行尽早止损~
【在 T**********t 的大作中提到】 : 偷偷的说一句,我想换方向就是对Aptamer这东西有点儿小失望,等它做到antibody这 : 么成熟的程度,我怕我就成炮灰了。当然,我是悲观了一点。
|
T**********t 发帖数: 1604 | 10 赞逢低买入。:D 向你学习!
洗洗睡了,我这都快天亮了。
了,
【在 w******e 的大作中提到】 : nod,我进lab之后也经过一阵郁闷期,后来想通了:比aptamer更忽悠的东西多了去了, : 加上现在好歹aptamer专利快过期+借siRNA的东风RNA的PKPD study会越来越多,RNA : chemistry会越来越成熟廉价,现在逢低买入,观望个一两年,实在不行尽早止损~
|