w******e
发帖数: 1187 | 1 又来请教了：话说我用filter binding assay测我aptamer pool跟target
protein的kd，测出的signal最高只有upper limit（probe不加protein不过
filter直接加到scintillation vial里的读数）的20％。。。虽说protein
理论上可能有一部分被wash off吧，但80％ loss也太离谱了吧。。。但
signal确实是plateau了，能fit出kd来（还挺好hiahia）。
请问牛人这种现象可能正常吗？btw我根本没敢多洗，加了mixture之后就
洗了1次1ml，不过neg control挺低的了。 |
w******e
发帖数: 1187 | 2 ding
【在 w******e 的大作中提到】
: 又来请教了：话说我用filter binding assay测我aptamer pool跟target
: protein的kd，测出的signal最高只有upper limit（probe不加protein不过
: filter直接加到scintillation vial里的读数）的20％。。。虽说protein
: 理论上可能有一部分被wash off吧，但80％ loss也太离谱了吧。。。但
: signal确实是plateau了，能fit出kd来（还挺好hiahia）。
: 请问牛人这种现象可能正常吗？btw我根本没敢多洗，加了mixture之后就
: 洗了1次1ml，不过neg control挺低的了。
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a****o
发帖数: 1786 | 3 I think it is normal. Since you use pool, not all mmbers can bind to your
protein. if only 20% of the pool are real aptamers, it fit the result very
well. Even with real defined aptamer, you may not get 100% binding. RNA
aptamers can form different structures, maybe only one or a few of them bind
to your target.
【在 w******e 的大作中提到】
: 又来请教了：话说我用filter binding assay测我aptamer pool跟target
: protein的kd，测出的signal最高只有upper limit（probe不加protein不过
: filter直接加到scintillation vial里的读数）的20％。。。虽说protein
: 理论上可能有一部分被wash off吧，但80％ loss也太离谱了吧。。。但
: signal确实是plateau了，能fit出kd来（还挺好hiahia）。
: 请问牛人这种现象可能正常吗？btw我根本没敢多洗，加了mixture之后就
: 洗了1次1ml，不过neg control挺低的了。
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w******e
发帖数: 1187 | 4 thanks a lot! Now I'm relieved:)
bind
【在 a****o 的大作中提到】
: I think it is normal. Since you use pool, not all mmbers can bind to your
: protein. if only 20% of the pool are real aptamers, it fit the result very
: well. Even with real defined aptamer, you may not get 100% binding. RNA
: aptamers can form different structures, maybe only one or a few of them bind
: to your target.
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