T**********t
发帖数: 1604 | 1 说说你的胶是怎么制备的吧。跑了半年胶，不能说没经验了，只能说是没用心学。
自制的胶跑成这样，多半都是buffer的问题。 |
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发帖数: 1 | 3 糊弄不过内行，其实就是往哪一扔，跑去灌水，一high，胶跑过了 |
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k****o
发帖数: 589 | 4 减少APS或者TEMED的量，自己把握。用水，丁醇，乙醇，异丙醇封都行。APS无所谓，
我放三个多月了照样用得开心。做胶的时候没什么好紧张的，不好重新灌就是了，便宜
。只是注意千万不要沾有害物质了。一旦你灌习惯了，反而不喜欢用现成的胶。我用自
己的胶跑出来的效果比直接买的好不少。 |
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F******p
发帖数: 2099 | 5 没穿透力？？？？？
你试试不戴手套直接制胶摸胶跑胶，再用荧光照照你的手看看染成什么样子。
EB致癌力是不高，但致癌就是致癌，没必要拿身体健康去试。 |
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e********r
发帖数: 147 | 8 用甲醛-MOPS变性琼脂糖胶跑细菌总RNA电泳，发现样品完全降解。做实验逐一排除，发
现MOPS缓冲液，去离子甲酰胺和总RNA分别混合后65度处理都没问题，而只要把甲醛和
RNA混合后就会降解。奇怪的是，换了几瓶甲醛都是这个结果，而别人的总RNA用同样的
甲醛没问题，极为郁闷，难道我们的总RNA和甲醛不对付？RP不够？
各位说说看这该如何是好？ |
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m****m
发帖数: 395 | 9 歪的胶跑出来的条带就不可信了，所以我一定要做好。
但是我不想每次一做胶就很紧张，可不可以从容地、对速度要求不那么高的情况下做完
啊？
配方要怎么改一下吗？ |
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r******m
发帖数: 5550 | 10 因为要detect的protein浓度比较小，所以每个sample都要上没有稀释过的5 ul mouse
serum. 这让sample狠粘，跑出来的条带都歪歪斜斜的~ 没有办法放在paper里。
请问有经验的xdjm,怎么再不减少sample浓度的情况下，调整哪些条件让胶跑的整齐漂
亮点？
我们用的是全套invitrogen nupage system
sample 70度煮15分钟 (nupage LDS buffer instruction上的，说是比100度煮，条带
可以sharp点。instruction说10分钟，我还加了5分钟）
4%-12% bis-tris gel， 160 v 跑1个半小时的样子。
非常感谢~~~~~~~！！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 11 一般来说凝胶浓度越低分辨率也越低。
2kb左右的片段完全可以用1.5%或者2%的agarose胶跑。2.2kb和2kb应该能分开的。 |
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t*****y
发帖数: 10 | 12 2017 Ventura Mountains 2 Beach (M2B) Marathon
2017 May 28th, Sunday, starting at 6:00am
成绩：
3:24:11 (pace 7:47/mile, 26.24mile), 顺利完成A goal (3:25:00)
Race detail statistics:
1st half: 1:40:51 (13.1mile), average pace: 7:42/mile
2nd half: 1:43:20 (13.14 mile), average pace: 7:52/mile,
Positive split: 2:29 (-19sec for extra 0.04 mile)
Elevation gain: 469ft; Elevation Loss: 1230ft
Average temperature: 67F(=20C), min/max=57F/77F (14C/25C)
Avg/max heart rate: 162/176 bpm
Avg/max r... 阅读全帖 |
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w****y
发帖数: 8 | 13 每个跑马者都有自己的故事。两年前当我刚开始练习跑步时，还只能用龟速跑不到5公
里，从来没有想到过自己会与这个词沾边 - Marathon Finisher。那时对马拉松的比赛
是那么的仰视，那么的憧憬，但还没想着哪天也要去跑个马拉松。
2015年10月18日下午，在多伦多市中心的 Bay/Queen 路口北侧，多伦多湖滨马拉松赛
终点线红色的拱门渐渐的进入眼帘，随着脚步的移动，那拱门越来越近，止不住地扬起
嘴角，这是从未有过的喜悦，张开双臂冲过了终点线。从义工手中接过锡箔，披在身上
。首次体验了全马，很开心；但内心也很平静，完成42.2公里，真的很不容易，但我知
道这是可能的，而且自己也做到了，对于成绩，也是在计划和情理之中。
今年五月初的密市半马后，心中就已经有了目标--跑全马，这只是个时间早晚的问题，
只是不确定是跑秋天的湖滨多马还是明年春天的密马，因夏季、秋季是出游玩耍的季节
，很清楚训练计划的执行会有问题。
半马后休息了一个星期，然后就开始了隔三差五的慢跑，同时周末和小伙伴们跑trail,
踩点，准备6月中的 Oak Ridges Moraine 160公里的越野接力赛。接着6... 阅读全帖 |
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w****y
发帖数: 8 | 14 每个跑马者都有自己的故事。两年前当我刚开始练习跑步时，还只能用龟速跑不到5公
里，从来没有想到过自己会与这个词沾边 - Marathon Finisher。那时对马拉松的比赛
是那么的仰视，那么的憧憬，但还没想着哪天也要去跑个马拉松。
2015年10月18日下午，在多伦多市中心的 Bay/Queen 路口北侧，多伦多湖滨马拉松赛
终点线红色的拱门渐渐的进入眼帘，随着脚步的移动，那拱门越来越近，止不住地扬起
嘴角，这是从未有过的喜悦，张开双臂冲过了终点线。从义工手中接过锡箔，披在身上
。首次体验了全马，很开心；但内心也很平静，完成42.2公里，真的很不容易，但我知
道这是可能的，而且自己也做到了，对于成绩，也是在计划和情理之中。
今年五月初的密市半马后，心中就已经有了目标--跑全马，这只是个时间早晚的问题，
只是不确定是跑秋天的湖滨多马还是明年春天的密马，因夏季、秋季是出游玩耍的季节
，很清楚训练计划的执行会有问题。
半马后休息了一个星期，然后就开始了隔三差五的慢跑，同时周末和小伙伴们跑trail,
踩点，准备6月中的 Oak Ridges Moraine 160公里的越野接力赛。接着6... 阅读全帖 |
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e***o
发帖数: 344 | 15 最近跑DNA胶很邪门，首先是基因组DNA的条带大小在不同的胶里跑得不一样。做3C-
library，所以在提取的过程中没有除去蛋白质，用裂解液裂解细胞后，离心收集细胞
核，再分别用SDS和Triton X-100裂解细胞核后跑的琼脂糖胶。
其中2，3泳道是刚提取完时跑的电泳条带，1，4孔道是将同样的样品放置6个小时左右
后跑的电泳条带，结果条带大小就发生了改变，有15000bp左右减小到了几百bp，而且
每次跑胶，电泳条带的大小都不固定，大多都只有几百bp，和基因组大小不符！
然后是回收cDNA500-700bp的带加adapter,扩PCR也出现这种飘移现象。到别的lab也试
了，还是这样。跑别的特异PCR扩增和酶切质粒都是好好地。真是邪门了。
请大家分析下是什么原因造成的。谢谢！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 16 不太明白你的描述，是说跑完后胶本身变成梯形的还是每条lane从上到下由窄变宽？我
也用过他家的precast胶，虽然用得不多，但是胶本身变成梯形的情况好像没遇到过。
样品lane从上到下由窄变宽的情况倒是经常遇到，但也不光是跑biorad的胶会这样，
invitrogen的胶也这样，我自己配的胶也这样，可能像楼上说的那样，如果外电泳槽的
buffer加得少的时候会比较明显一点，但我也没特别注意过。我觉得只要resolution够
了就行了吧，反正大部分时候跑的胶都不是拿来publish用的。 |
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a********n
发帖数: 844 | 17 如果lz在讲附上的胶，我的看法是：
1.上面那个带是well里边滞留的，下面那个是free CTP还是free RNA不好说。但整个胶
曝光时间不够长。我做过无数EMSA，也是RNA aptamer，RNA 从MAXIscript得到后不用
纯化，直接取1 ul去跑denaturing gel，看看有没有transcripts，产量有可能因为变
化的，所以每批都要检验。我组里有个博后不信邪，在这上面浪费了几个星期，一直以
为是这个那个仪器不好用。
2.lz提到protine minus也有多条带，这在native gel里边太正常了，因为RNA有多种
folding的可能性，即使mfold只给出一种结构，我在胶里也能看到很多条带。蛋白特异
性的带可能跟RNA一下带superimpose，但是你会看到下边一条带变弱，上面一条带变强
，这样你要换种浓度的胶跑跑。
3.制胶和电泳液可以用1/4xTBE或者1/2xTGB，前者我用的比较多，这个每个蛋白性质有
关，一般都要试试。
4.ARGA胶有些时候可以替代page，想B52的RNA APTAMER只能在ARGA胶才能看到shift，
原因不... 阅读全帖 |
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r*********y
发帖数: 124 | 18 我做M2 FLAG IP后的蛋白在0.5mg/ml 3XFLAG 室温1小时可以很好的 洗下来（4ml 洗脱
体积)。在跑胶之前需要除去过量的3XFLAG,同时把体积浓缩到100-150ul。我先用GE
G25 gel filtration column除去3XFLAG, 然后用vivan spin 6浓缩，发现还有很多
3FLAG在样品里。
另外我的样品在浓缩之后很粘，上样的体积加大后胶就跑的很慢还smeared（我的bait
蛋白最多200ng)。所有纯化，浓缩都用同样的buffer, 20mMTris pH7.5, 150NaCL, 10%
Glycerol, 1%NP-40, 1mM DTT, 1mM EDTA.我想请教高手;
(1) 如何除去多余的3FLAG
(2)如何避免浓缩是样品过粘影响跑胶。
谢谢 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 19 TBE的pH是8.3左右，你的蛋白如果pI是5应该跑得没问题的。但是250kD确实太大了，8%
的胶可能浓度还是高了。你要不要试试用5%的胶或者干脆用Agarose胶跑跑？我没用过
Agarose胶跑蛋白但我知道是可以用的。另外你最好还是确认一下在这个条件下蛋白有
没有aggregation，可以用Analytical Ultracentrifugation来看蛋白的aggregation，
不过那个实验用的蛋白量比较大。 |
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v********a
发帖数: 646 | 20 我们现在都是用的invitrogen的precast胶做WB
用的BUFFER也是Invitrogen的
但是跑出来的带
每个人之间区别很大
有人也许或说样品处理不一样
但是同样的marker，不同的人，在同一块胶上跑出来却有很大差异
有些人跑出来的marker，像公司的广告一样
有些人跑出来的marker，像国内实验室时那样的熊样
请问，如何能提高蛋白质SDS-PAGE胶的分辨率呢？
求大神指点。
谢谢。 |
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a********u
发帖数: 325 | 21 要用4－15％gradient胶跑样品，同时要native的。我做好的胶当蓝色的考马斯亮兰的
前沿跑到接近下端三分之一处时，就完全扭曲了，看上去就像是山峦起伏，怀疑是15％
的胶先凝了，而且没有横向分布好，于是降低15％胶里的TEMED和APS用量，但是改善不
大。做了很多次，改变倒胶的速度，而且倒胶时横向移动杯子，让胶流下时更均匀点儿
，但是都没用。
各位高手有没有好办法解决这个问题？ |
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s*********t
发帖数: 600 | 22 做的那种20cm的长胶系统，下层胶没混匀就凝固了，做胶的时候没发现。
现在跑胶之后，样品跑得很慢，而且看到下层胶里面有两道折光线。
样品很珍贵，准备做银染的，还能做吗？唉，郁闷。有人遇到过这种情况吗？ |
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c*******r
发帖数: 293 | 23 我老人家自从迷上跑步，瞎琢磨了一些跑姿中常见的问题，搞了一个物理数学模型，觉
得能解释一些问题，而且也有可能对训练有所指导。这里给大家看看。
任何模型都是不完善的，包括这个模型。通过近似，这个物理数学模型试图解释一下几
个问题。
1． 为什么脚跟着地不好，而前脚掌着地是最好的？
2． 为什么跑步要小步高频？
3． 为什么步频不能无限高?
4． 什么是自然步频？如何实现自然步频？
为什么前脚掌着地是最好的？
咱们瞧瞧下面的示意图，看看脚落地的一瞬间有哪些不同。
脚跟着地必然导致身体的重心在脚落地点的后方。这个姿势就有很多问题。
首先，脚是以后跟着地，所有的冲力都集中在了脚后跟着地的那一点上，因而对关节冲
击很大。再者，这个姿势脚着地的瞬间，脚和身体的相对速度是零，但是脚和地面的相
对速度就是跑步的速度了，因而这个冲击力是很大的。同时这个落地姿势很自然就使前
腿伸直，成为所谓的Knee-lock，这样冲击力没有任何缓冲就作用在膝和髋关节上，容
易造成关节损伤。这个冲击力的方向是向后上方的，由于力的分解，就有一部分向后方
的阻止力，会使人跑不快，也容易累。
反之，如果... 阅读全帖 |
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u****d
发帖数: 1278 | 24 这个是不是重心脚的问题？
【 以下文字转载自 Running 讨论区 】
发信人: chirunner (跑得爽), 信区: Running
标 题: 理工琐男之逆袭：关于跑姿的一些物理数学模型
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jan 17 19:48:05 2014, 美东)
我老人家自从迷上跑步，瞎琢磨了一些跑姿中常见的问题，搞了一个物理数学模型，觉
得能解释一些问题，而且也有可能对训练有所指导。这里给大家看看。
任何模型都是不完善的，包括这个模型。通过近似，这个物理数学模型试图解释一下几
个问题。
1． 为什么脚跟着地不好，而前脚掌着地是最好的？
2． 为什么跑步要小步高频？
3． 为什么步频不能无限高?
4． 什么是自然步频？如何实现自然步频？
这个模型有三大结论：
1，赤足跑姿，前脚掌着地，重心落在脚掌上，是最好的跑姿。
2，自然步频或稍高一些可以实现最高的能量效率。低步频不好，太高步频也不行。
3，可以在跑步机上以高坡低速来习惯自己的自然步频。
为什么前脚掌着地是最好的？
咱们瞧瞧下面的示意图，看看脚落地的一瞬间有哪些不同。
脚跟着地必然导... 阅读全帖 |
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u****d
发帖数: 1278 | 25 这个是不是重心脚的问题？
【 以下文字转载自 Running 讨论区 】
发信人: chirunner (跑得爽), 信区: Running
标 题: 理工琐男之逆袭：关于跑姿的一些物理数学模型
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jan 17 19:48:05 2014, 美东)
我老人家自从迷上跑步，瞎琢磨了一些跑姿中常见的问题，搞了一个物理数学模型，觉
得能解释一些问题，而且也有可能对训练有所指导。这里给大家看看。
任何模型都是不完善的，包括这个模型。通过近似，这个物理数学模型试图解释一下几
个问题。
1． 为什么脚跟着地不好，而前脚掌着地是最好的？
2． 为什么跑步要小步高频？
3． 为什么步频不能无限高?
4． 什么是自然步频？如何实现自然步频？
这个模型有三大结论：
1，赤足跑姿，前脚掌着地，重心落在脚掌上，是最好的跑姿。
2，自然步频或稍高一些可以实现最高的能量效率。低步频不好，太高步频也不行。
3，可以在跑步机上以高坡低速来习惯自己的自然步频。
为什么前脚掌着地是最好的？
咱们瞧瞧下面的示意图，看看脚落地的一瞬间有哪些不同。
脚跟着地必然导... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 26 别人需要会杀老鼠会跑胶么？呵呵，你不如祝愿她跑一辈子胶，轮回跑胶跑到老婆都跑
了。
你这300万美金存款的，不去海滩上烤乳猪，成天陪我们娱乐，你是买买提的灵魂大师
啊。
beijingren |
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s****r
发帖数: 742 | 27 星期天,突发奇想,想要自己修鞋.说实在的,真不忍心就此扔
了老爸送我上大学的鞋.
念头一起,再也按捺不住,跳下床冲向网球场旁的鞋摊.可怜兮
兮连哄带骗的向修鞋师傅借502,师傅二话没说递给了我.我那着胶
往回跑,边跑边嘀咕:这么容易就到手了,看来好人还是多啊.
只可惜我的鞋病入膏肓,无药可医.我拿了几毛钱又匆匆返回到鞋
摊,递给修鞋师傅说:"算我借胶费好了,"他说:"你把钱拿回去."
我扔下钱和胶跑了.
回到宿舍,全宿舍的人都在笑.我解嘲道:"等我老的时候,一定
要告诉我的孙子,想当年,你奶奶在兰大的时候,还自己修鞋,用的
胶是向修协师傅借的." |
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f*********r
发帖数: 1233 | 28 与细胞/组织匀浆不同，血清中dna极低。粘稠主要因为蛋白和血脂。楼上说超高速离心
，是个不错的办法。能够去掉很多悬浊微粒。如果样品量有限，可以加过lysis buffer
以后再离心。
稀释总蛋白浓度。如果5ul/well这个量不能再降低，可以象楼上所说，用大胶、厚胶，
想办法增加volume/well。
如果有条件，可以用filter过滤掉不需要的蛋白。一般，条带扭曲多发生在小分子量。我估计你要的蛋白就不大。那么，你可以根据分子量，过滤掉大分子蛋白。millipore就有很多不同孔径的过滤系统可供选择。
条带形状不规整，很大程度上还因为蛋白denature得不够好。可以适当在loading buffer里增加sds浓度。
由于loading buffer与running buffer之间在表面活性上有差异，可以造成条带的扭曲
。为此，可以选用taurin buffer（代替glycin buffer）以弱化条带扭曲。甚至，有的
pi曾经建议，在上样之前，空跑至少10分钟。
用一般的样品跑胶，那么胶的品牌与型号之间的优劣不是很明显。你的sample比较特殊
，可能就放大了各厂家产品之间 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 29 invitrogen blue native gel与自己配的胶跑出来有差别
blue native gel的文献链接在invitrogen那个产品下面的说明里有
你可以自己去看
不过我觉得如果不是有特别需要
就是偶然跑一下的话
还是用Lammli PAGE胶的那个配方就可以了
就是配胶的时候不加SDS，跑胶的buffer里不放SDS，
样品不煮，直接加上DNA loading dye就上样
就可以了
如果你的蛋白不是high pI的话
根本不需要我后面提的那两个系统 |
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q**********0
发帖数: 335 | 30 最近作了几个DNA样本的胶回收（ng级)，同时跑胶，回收完后以此DNA作模板作PCR检测
，发现阴性对照的也扩增出带来。现怀疑是同时跑胶时样本间相互污染。由于需要同时
处理大量标本，请问哪里可以买到带分格的电泳槽？ 或者比常规 6 x 7.5cm gel tray
还小的电泳槽？这样就可以同时跑多个样本而不互相污染？多谢！ |
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o***s
发帖数: 42149 | 31 “我到底花了多少时间？”随着一个后滚翻，9月5日，47岁的环卫工人疯贰完成环成都不间断跑挑战。25小时30分，225公里，他仅靠能量胶、能量棒和几碗粥，完成了一个不可思议的挑战。
挑战225公里长跑
他25小时30分完成挑战
疯贰，本名陈学军，47岁的环卫工人。9月4日10点13分，疯贰在起终点绿洲足球场正式迈出了挑战的第一步。在经过了魔鬼训练营、咕咚、R.I.D、sioeye、成都跑 客 、Rise-Running、023Run-Club、ACD、IRC南充爱等跑团和组织的跑友陪跑之后，疯贰在第二天11点43分返回绿洲足球场，完成环成都不间断跑的挑战。赛后经过精确计算，疯贰本次挑战时间为25小时30分，挑战距离长达225公里。
超过一天的时间不吃不喝？“每20公里左右，我会有个小调整。”据疯贰介绍，挑战过程中的能量补给全靠野行家提供的能量胶、能量棒，“能量没问题，但饥饿感影响很大，还是停下来喝了四五次粥。”
现在疯贰会两三个月跑一次三环，而他用这样的方式也在不断提高着自己的马拉松成绩。其实一个马拉松对于痴迷于跑步的疯贰来说远远不够，在疯贰的心里一直就有挑战长距离的梦想。在北京，有一位... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 33 那还不自己做胶？
十有八九是胶有问题，他们家的胶质量经常出问题。
你把胶放平看看，是不是下边缘比上边缘宽？
这个毛病我们去年就见过了，打电话他们还不承认，居然还敢质疑我跑胶的能力？
气得我一连扫了十几张坏胶的图给他们传过去，顺便臭骂了他们一通。
他们公司的precast gel 质量很差。我就是因为老板实验室里只有他们的系统，
又没有钱买另外的系统，所以只好忍着而已。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 34 一起跑没问题，不过跑的速度会不一样。7%的胶先跑好，15%的胶跑得慢。不过只要分
辨率够了，不用跑完整块胶也可以。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 35 目的不一样，工作原理也不一样。
loading buffer里的dye是tracking dye，一个作用是显色，把样品溶液从无色透明变
成比较深的颜色，方便上样，样品孔加没加，有没有溢出一目了然。另一个作用是示踪
，因为每个染料组分的分子量大小不同，在电泳时的迁移速度相当于不同分子量的蛋白
，让你知道电泳跑到什么时候应该停止以免小分子蛋白跑到胶外面去了。tracking dye
不会结合蛋白，独立于蛋白而迁移，在电泳中只是起到一个指示作用。
跑完之后的染色是为了显示胶里的蛋白，用的染料最常见的是考马斯亮蓝，它特异性结
合蛋白质，让胶里的各种蛋白组分都能显示出来。 |
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r*****m
发帖数: 3619 | 36 以人数和规模计算，王晓东开创的跑胶领域可以算一个了，百万跑胶民工，被测序机器
和质谱机器代替，更是一个奇观。
“参加临床试验的84位病人都是处于癌症晚期、生命垂危的患者，服用我们的药物后，
病情或者得到控制、或者明显好转。”王晓东告诉记者，“晚期肺癌的生存期一般不超
过3个月，澳大利亚的一位患者吃我们的药已经一年零两个月了，现在还活得好好的。”
－－－－看到了吧，这个靠着给美国爹跑胶跑出来的院士，科学常识就是这样。大学没
有学过统计吗？对照组呢？你这个药，和大蒜的抗癌功能是一样的吧，有一位患者就是
吃大蒜，已经一年多了，活的好好的。 |
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c***s
发帖数: 70028 | 37 长发美女在等公交车时，头发被人从背后涂上强力胶，无奈，只得忍痛剪掉长发。近日，警方也介入调查此案件。昨日，一名女网友根据天府早报报道的“泼胶狂人”的特征，勾勒出该男子的素描图，期望对警方破案有所帮助。
此外，网友“刑警阿东”也在微博上发布“泼胶狂人”通缉令，称“遭遇过此事的，请尽快私信阿东！”
网友画素描期望对警方有帮助
不愿透露姓名的女性网友也有一头齐肩的头发，并且有美术功底。她说自己也曾拥有一头乌黑的长发，留了很多年，确实不易。“但没想到头发也会遭遇黑手。”这两天，该网友从天府早报上了解泼胶事件后，异常气愤。“虽然没有遭遇过此事，但应该做些什么，不然下次遭殃的就是你我了。”
昨日，她根据报道中受害人对“泼胶狂人”特征的描述，花了1个小时手绘出男子外形，期望对警方破案有帮助。她还称，因为受害人并没有看清楚“泼胶狂人”的正面，因此隐掉了面部特征，至于纸袋和胶水介绍不明晰，也只能按照自己的理解成图。
谁遇过此事快私信“刑警阿东”
针对近日出现的长发女性头发被涂胶水事件，武侯警方已介入调查。
昨日下午3点，网友“刑警阿东”也在微博上发布“泼胶狂人通缉令”，称“遭遇过此事，特别是没有报案的童... 阅读全帖 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 38 Lonza的预制胶可以在invitrogen的box里跑，比invitrogen的便宜30%左右。效果么，
没invitrogen的好，但是也OK了。
自己配胶我们用的都是bio-rad的mini protean的系统，不过它和invitrogen的胶盒不
兼容，得用bio-rad自己的盒子。
对了，lonza的预制胶也能在bio-rad的胶盒里跑。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 39 十有八九是胶有问题，他们家的胶质量经常出问题。
你把胶放平看看，是不是下边缘比上边缘宽？
这个毛病我们去年就见过了，打电话他们还不承认，居然还敢质疑我跑胶的能力？
气得我一连扫了十几张坏胶的图给他们传过去，顺便臭骂了他们一通。
他们公司的precast gel 质量很差。我就是因为老板实验室里只有他们的系统，
又没有钱买另外的系统，所以只好忍着而已。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 40 我们用的bistris系统。胶的performence一直不错。然后iblot，7分钟可同时转两快胶
。blockingbuffer是
oddessy的，直接用。licor成像系统一次扫描就行。不用反复胶片曝光。
这个哥们作老鼠的，样品收好后加上， 用96孔pcr板变性样品，排枪加样，Invitrogen
的17孔bistris胶正好。
这周他已经跑60多块胶了。。。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 41 跑歪倒不会，会越跑越宽， 每个空孔都要加上sample buffer。
多数蛋白都是梯度胶比较好，有些糖基化啥比较厉害的，可能普通胶好 |
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s******y
发帖数: 17729 | 42 跑胶是生物索南的必杀技
一般索南只跑分子量这种水平，扔进去就能跑。准确的说根据分子量大小在葡聚糖凝聚
当中的迁移率不一样分辨DNA，RNA，蛋白质等，也就一般烂马工都会的前端脚本语言当
中的python，perl这种
稍微复杂一点的就是2D，也叫二位电泳，一个维度是根据分子量，还有一个维度是根据
电荷，这个起码的Java C#这种扣腚水平
更古老的还有脉冲场凝胶电泳。那个跟复杂，很多新出道的索南别说跑，连见都没见过
。家伙大，设置也复杂，有个根据时间调整跑的角度。60度角，跑一定时间然后再旋转
角度跑
这个就是马工里面会C++的水准，科班出身扣腚高手？ |
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发帖数: 1 | 43 还有别的专业需要跑胶么？
另外，跑个胶需要多长时间？ |
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p*e
发帖数: 6785 | 44 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: KingOfMaoLun (毛轮之王), 信区: Military
标 题: 跑胶时上买买提过多，被老板逼得自杀ID，发伪币
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 30 00:07:45 2015, 美东)
老板说要不然连胶都不让我跑了。
还是工作要紧，等NIW下来再回来灌水。
2、3、4、5、6楼每人100。 |
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K**********e
发帖数: 188 | 45 350 mM KCl的buffer里的蛋白，加了loading buffer，就生成SDS－K沉淀了。怎么上样
跑SDS PAGE胶啊？加热倒是能
溶解沉淀，但是刚刚吸起来，马上又沉淀了，加到上样孔都是沉淀。
会影响跑胶吗？怎么办呢？（不能加水稀释，因为样品体积就是30ul了，再加loading
buffer，刚刚好） |
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S*****s
发帖数: 242 | 46 这个越来越有相声的潜力了，有木有？
问：谁周末还跑胶？
答：谁周末不跑胶？
问：你们还有周末？
答：我们的周末，说有就有， 说没有就没有。
问：到底有木有？
答：？
To be continued
【 在 AinWland (Boston Legal) 的大作中提到: 】
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s***i
发帖数: 160 | 47 周一到今天连续每天跑两个胶
结果每个都有问题
取成年小黑鼠样本
测PDK1，P-PDK1 还有其他protein
第一次的样本是上星期做的，结果pdk1 和P—pdk1 各出来bands，PDK比 P-PDK弱，第
一个不解
怀疑操作有问题，另取样本重新制作，第二次PDK没显示出来，P-PDK却一直存在，只不
过对比第一次稍弱
因为只load10ug跑胶，怀疑太少重复第三次，20ug，其他条件和第一次一样
结果PDK1还是没有显示 P—PDK1有显示
怀疑抗体浓度不够，今天使用一抗和二抗都用1：500，之前一直用1：1000
换用TPS—T 冲洗，之前都用PBS—T
另外操作过程反复检查过，把蛋白转到膜后ponceau检查没有问题，5%nonfat milk
incubate 1.30小时，冲洗都足15min，一抗体4度冰箱过夜，冲洗三次后二抗两小时，
再冲洗三次。抗体用的是cell signaling technology的。
百思不得其解，为啥第一次显示得出来~
另外同在一个胶跑的还有AKT和P-AKT，AKT显示正常，就是P-AKT有超多nonspecific
bands，有什... 阅读全帖 |
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c*****e
发帖数: 2043 | 48 不过老人家心底特宽厚善良，马上过来给我现场指导了，真要再那么打下去，我就从一
楼跳下去了。
这位是long pips专家呀，今晚儿真应该付费了，一晚上学的东西太多了，他基本全教
了，连发球都教了。
因为他是刀拍，我哥也是刀拍，所以我跑我哥那问问，他俩打法上有没有共同语言，闹
了半天，我哥还挺鄙视这么打的，都不愿意多谈，原来刀拍和刀拍也不一样。
今晚各个技巧老人都无私的告诉我了。 1. 如何发topspin short ball。 2.
bottomspin long ball. 3. 如何去挑spin ball，4， 如何搓bottomspin. 5.如何应付
short ball,long ball, 6,如何利用腰部和膝盖去控制长胶球的旋速防止出界，7，如
何反手主动击球。8，如何发球后抢退，再接短球，9，如何在左下角发球，但防守的是
右下角
后半场好多了，总共打了几百个，最后那一百，我接起来80多个了，老人跟我说，今晚
只要能接过他的10 hits，就算成功了，一开始接2个，后来4个，后来6个，后来12个，
他喊了一声awesome.他跟我说，需要接住他的50个hits才能打中级... 阅读全帖 |
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r*******g
发帖数: 2662 | 49 都按需要的比例自己配的嘛。跑胶不算麻烦，刮板子才叫苦逼。
[在 sharpdressed (man) 的大作中提到：]
：生化分子生物的本科就做过了，进实验室更是周周都要做。原来还要自己铺胶，现在
估计都买现成的了吧？ |
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C******n
发帖数: 941 | 50 ☆─────────────────────────────────────☆
tsingyuan (空空道人) 于 (Fri Apr 25 13:50:45 2008) 提到:
KT-105/107/109都行，就是那种带楞楞的手胶。看了精华区里边推荐的网站，上面都没
有这种手胶卖。有没有平时也用这种手胶的朋友，给俺指点一下哈。
sorry啊，俺新来乍到，问题多了点，斑竹见谅哈。
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kupo (一字电剑跑不死) 于 (Fri Apr 25 13:55:52 2008) 提到:
顶一下.
不过我个人不喜欢用有楞或者有花纹的手胶.觉得影响我换拍的速度.
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tsingyuan (空空道人) 于 (Fri Apr 25 14:22:23 2008) 提到:
“换拍”是什么意思啊？是买新拍子还是在空中调整拍子的方向啊？
斑竹的词语好专业的说，hoho
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