n**t
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发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十一）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Mon May 16 14:19:57 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低， |
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n**t
发帖数: 45 | 2 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（一）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST
本文献给YL
引子
2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，
书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意
识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材。这本书深深的吸引了我，
因为里面记录的实验十分经典，涵盖了蛋白质纯化中可能用到的大部分手段，并且对实验细节有十分详尽的解释。
我对这本书爱不释手，于是就买了下来, 而且当时就动了上这门课的念头。这是一个很模糊的想法，没有想到
的是，五年以后这个想法竟然实现了。
这一系列文章是我对这次上课经历的全面总结，一部分是八卦，一部分是流水账般的记叙，还有一些是从
这课程学到的tricks, 最 |
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n**t
发帖数: 45 | 3 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（四）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:50:21 2005) WWW-POST
本文献给YL
（四）Hydrostatic pressure和跑小柱子的trick
Dr. Burgess 假定我们对蛋白质纯化一无所知，所以讲得很细致。比如他特别提到了disposable
column的用法。这种小柱子很简单，把beads倒进去，冲洗一下就可以用来纯化蛋白了，很方便。
唯一的问题是，由于是依靠重力跑，速度有时候会十分慢。液体流经柱子速度由hydrostatic pressure
(静流体压力）来决定。而hydrostatic pressure又是由实际柱高(即液体经过的长度)来决定。如果你
嫌液体流得太慢（尤其是洗柱子的时候），可以在柱子下端出口连一个长的塑胶管子或者针管，这样速
度会快很多。这是很简单的小trick, 但我觉得对初做蛋白质纯化的人还是很有帮助的。 |
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r****o
发帖数: 105 | 4 本文献给YL
引子
2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，
书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意
识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材。这本书深深的吸引了我，
因为里面记录的实验十分经典，涵盖了蛋白质纯化中可能用到的大部分手段，并且对实验细节有十分详尽的解释。
我对这本书爱不释手，于是就买了下来, 而且当时就动了上这门课的念头。这是一个很模糊的想法，没有想到
的是，五年以后这个想法竟然实现了。
这一系列文章是我对这次上课经历的全面总结，一部分是八卦，一部分是流水账般的记叙，还有一些是从
这课程学到的tricks, 最后也掺杂着自己过去做蛋白质纯化的心得。想到哪说到哪，文字挺松散的，见笑了。
我来解释一下标题。课程结束之后，每一个学员都有一份证书，印着Per Pura Ad Astra 几个大字。
这是拉丁语，直译就是”从纯化到星辰“ 。原始的谚语是,Per Aspera Ad Astra, 意思是through |
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r****o
发帖数: 105 | 5 本文献给YL
（十六）浮起来的细胞膜
休息了一整天，晚上全体学员和老师去一家sushi店饱餐了一顿生鱼片。第二天
早上，第三个模块的实验开始了。老师是Sue-Hwa Lin，这一个模块是从大鼠肝脏里
面提取胰岛素受体并且做一些鉴定。四个模块的实验之中，我最喜欢这个模块。主要
是因为这是唯一一个设计膜蛋白纯化的实验，而膜蛋白纯化是所有蛋白质纯化中最麻
烦的一类。受体蛋白纯化尤其麻烦，往往可能找不到又快又准确的测活办法。胰岛素
受体即使溶解在去垢剂里面也能与胰岛素接合，所以用简单的binding assay就可以
测活了。相比之下有些受体就不那么好伺侯了，比如我研究的Notch受体，配体也是
膜蛋白，Notch和配体必须都簇集在细胞表面或者固体表面才能有接合，溶液中的游
离状态下根本没法相互作用。
Sue-Hwa Lin是一个好老师，喜欢在做实验之前详细给我们讲解背景知识，这一
点上她比其他三位老师都做得好。另外她的助手是一位台湾的中年妇女，在Sue-Hwa
实验室做research assistant professor。这位助手特别nice，给我帮助很大。
好了，现在聊一聊纯化的 |
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r****o
发帖数: 105 | 6 本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence specific转录因子是极其重要的一类蛋白质，真核生物的基因有5~10%是用来编码
这种蛋白的。这个模块涉及的一些实验是最经典的一些分离转录因子的方法，所以很有用。
怎么才能分离纯化呢？首先要确定要纯化什么因子，换句话说就是要决定纯化跟什么特异DNA
序列相结合的转录因子。决定了这个，才能有一个活性检测系 |
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r****o
发帖数: 105 | 7 本文献给YL
（十七）何去何从
上一章提到从大鼠肝脏提取质膜的方法。质膜准备好了，下一步就得考虑
怎么溶解质膜。最主要的问题是：用什么去垢剂呢？Dr.Lin在这一步试验里面
要求每一组中的四个人各选一种去垢剂来溶解质膜，纯化完之后再比较不同去
垢剂的蛋白质纯化效率，看看哪一种去垢剂最有效。选择去垢剂很简单，无非
是想让膜蛋白能被充分的溶解解离下来，同时又不使蛋白变性。事实上，纯化
膜蛋白时去垢剂的选择是没有规律可循，除了一些显而易见的不适和做纯化的
去垢剂(比如SDS)外，很难讲什么去垢剂好什么去垢剂不好。所以，只能具体
问题具体分析，一个一个去尝试。我们这一组人选的四种去垢剂分别是:
Triton X-100, Sodium Cholate, Chaps, 和Octyl glucoside。我选的是
Octyl Glucoside。
好了，我先来讲讲去垢剂的小常识。去垢剂其实是很大一门学问，我几年
前就花过好多力气来学习其中的一些知识，但到现在为止还是只懂了一些皮毛。
这里就权当抛砖引玉了。首先，什么是去垢剂(detergent)呢？就是同时具有
疏水和亲水两种基团 |
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r****o
发帖数: 105 | 8 本文献给YL
（二十）钙调蛋白
纯化胰岛素受体的模块结束之后，我们这一组人进入到最后一个模块，
做钙调蛋白的纯化和分析。钙调蛋白(Calmodulin)十分重要，几乎在所有
真核细胞里面都能找到。这个蛋白只有148个氨基酸，大概16KD，比较
小。有Ca2+结合的情况下，钙调蛋白的构象可以发生较大的改变，从而激
活一系列酶的活性，比如cyclic nucleotide phosphodiesterase, 一些
protein kinases, phosphatases 和ATPase等等。这一个模块的实验中，
我们是从鸡胗里面提取和纯化钙调蛋白，然后再做一些分析。
这一个模块的纯化设计，可以说是最大限度的利用了钙调蛋白的特殊
性质，我觉得设计的很精彩。不过我对这个模块的实验经历并不是很满意。
教员的实验助手只有一个人，而且非常不称职，对实验本身似乎不太了解，
也不是很helpful，感觉比前几个模块的实验助手差多了。教员叫Constantin，
是一个俄罗斯人，在rutgers当教授。我起初对他印象不佳，后来发现这个人
其实很nice,非常和蔼。 |
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c********o
发帖数: 31 | 9 事情是这样的 国内的生物公司招聘 希望找一个懂发酵又纯化做得好的人
不过，发酵是上游的，纯化是下游的。一般做纯化的很少做上游的发酵。
有什么实验室又做大点规模的发酵，同时也做蛋白的纯化呢？
实验室的劳苦大众们应该会从发酵一直做到纯化，有什么实验室做这个呢？
有没有认识这样的人的呢？求推荐？ |
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i***s
发帖数: 39120 | 10 牙膏管尾不同颜色条纹红圈处只与包装有关。
近日，一则关于“牙膏管颜色条代表成分”的消息在网上传得沸沸扬扬，称牙膏底部的颜色条暗藏天然与化学成分信息，尤其是黑色的颜色条，暗示牙膏为纯化学制品。这一传闻引发网友们关注，并疯狂转发。中国口腔清洁护理用品工业协会近日出来辟谣，表示这些颜色条用于牙膏灌装时的定位与识别，与成分没有任何关系。
传言：牙膏管颜色条暗示成分？
“立刻检查一下你家里的牙膏管底部，如果是黑色条马上扔掉！晕死！不要盲目相信所谓品牌，买牙膏时注意牙膏管反面底部的颜色条，共分4种：绿、蓝、红、黑。绿色：纯天然；蓝色：天然+药物；红色：天然+化学成分；黑色：纯化学。尽量选择绿色和蓝色的吧！居然儿童牙膏大多都是化学的，太过分了！”
近段时间，这段关于牙膏管底部颜色条的微博在网上疯传，引发不少人的担忧。网友纷纷拿出自己家里的牙膏验证，“平时都没注意过，原来牙膏管底部还真有不同的颜色！”不少网友反映，自己买的牙膏管底部颜色条为黑色或蓝色，“纯化学”牙膏让网友气愤。
辟谣：光标用于包装灌封时定位识别
记者昨日走访超市，随机查看了各种品牌牙膏，发现虽然功效各有侧重，但软管底部的色条大多是黑色... 阅读全帖 |
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n**t
发帖数: 45 | 11 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（二）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:44:32 2005) WWW-POST
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（二）同学和老师
冷泉港的《蛋白质纯化与鉴定》培训班历史相当悠久，从1989年开始每年都开课，到今年是第十六次。每
年都是四月初开始，持续两个星期。值得一提的是，冷泉港有相当多的培训班和会议，是一个科学家交流和
学习的中心。这是冷泉港享有盛名的最主要原因。
2004年底, 我下定决心上这门课，于是递交了申请。二月份的时候的到消息，我被录取了，并且还有
1000刀的tuition waiver。可我还是高兴不起来，因为还得解决1600刀(学费一共2600刀)。老板人很nice,
但是他实在没钱了，所以我只好咬咬牙自己套腰包解决了，去年的退税就这样全搭进去了, 欲哭无泪啊。
四月五号下午我赶到冷泉港，办完登记手续后被告知晚上七点全体开会，与教员和同学见面。老师一共有四 |
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n**t
发帖数: 45 | 12 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（七）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 18:15:35 2005) WWW-POST
本文献给YL
（七）古怪的CDC6
这里再给大家讲一个在大肠杆菌中表达蛋白质的例子，一个很夸张的例子，但是很有启发性。
Bruce Stillman 是冷泉港的现任主管，是一个绝对的牛人。不但科学做得很好，而且还很爱
国。他是澳洲人，在美国待了N年，却从没有加入美国国籍，所以他只是外籍院士。我们的晚间报
告有一个是他作的。他主要研究真核生物的DNA复制。这是一个到现在为止都没有完全弄明白的领
域。在报告里面，他特别提到了表达纯化CDC6蛋白的经历，我觉得十分有意思。这个蛋白, 用他
的话说，是"a pain in the ass"。
CDC6是干什么的呢？这要从ORC说起。真核生物的DNA有多个复制起始位点(replication
origin)，ORC(Origin R |
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n**t
发帖数: 45 | 13 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（九）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sun May 1 22:44:00 2005) WWW-POST
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（九） 沉淀，沉淀，沉淀
上一部分我匆匆提到了用硫酸氨沉淀来去掉PEI(Polyethyleneimine）的步骤。
不常做生化的同学可能对硫酸氨沉淀的方法不熟悉。但其实这种沉淀是蛋白质纯化中
及其重要的一种方法。说实话我过去也很少接触，但是在这个课里面，四组实验中有
三个都用到了这个方法，可见其重要性。
硫酸氨沉淀是怎么做的呢？其实很简单，把磨细了的硫酸氨粉末往样品溶液里
倒就行了，蛋白就会相继沉淀下来。由于不同的蛋白，在不同的硫酸氨浓度下被分
别沉淀下来，这种方法把蛋白质样品粗粗的分离一下。这种方法对大量样品尤其好
用，因为比较方便快捷便宜。硫酸氨沉淀的优点是什么呢？最大的优点是这东西虽
然能让蛋白质沉淀下来，但是不会让蛋白质变性，所以沉淀下来的蛋白 |
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n**t
发帖数: 45 | 14 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Wed May 11 20:43:26 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十） 永远的转录因子
第一个模块的实验结束以后，我们进入第二个模块的实验。这个实验的指导教授叫Al Courey。
这个模块的实验主要是要从Hela细胞里纯化AP-1。AP-1是一种很重要的sequence specific转录因
子，在很多生理过程里都有作用。AP-1其实不是一种均一的蛋白质，实际上一种二聚体结构，要么
是Jun-Jun 或者是Jun-Fos dimer。Jun和Fos都是alpha helix的结构。Helix的一边有很多Leu,和
另一个helix形成Leucine Zipper的结构，而helix另一边就是碱性的氨基酸居多，所以可以和DNA
结合。这个转录因子看起来就象一双筷子夹着DNA。
sequence spec |
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r****o
发帖数: 105 | 15 本文献给YL
（四）Hydrostatic pressure和跑小柱子的trick
Dr. Burgess 假定我们对蛋白质纯化一无所知，所以讲得很细致。比如他特别提到了disposable
column的用法。这种小柱子很简单，把beads倒进去，冲洗一下就可以用来纯化蛋白了，很方便。
唯一的问题是，由于是依靠重力跑，速度有时候会十分慢。液体流经柱子速度由hydrostatic pressure
(静流体压力）来决定。而hydrostatic pressure又是由实际柱高(即液体经过的长度)来决定。如果你
嫌液体流得太慢（尤其是洗柱子的时候），可以在柱子下端出口连一个长的塑胶管子或者针管，这样速
度会快很多。这是很简单的小trick, 但我觉得对初做蛋白质纯化的人还是很有帮助的。
我知道一个例子。我原来很喜欢女生A, 有一天晚上主动等在她实验室等她做完实验，就开车送她回家。
这一等不得了，从晚上七点等到了凌晨一点。这个过程中，她好像没什么事情，但是每隔20分钟，她就会去
一次cold room。作完实验了之后，我好奇的问她，到底是什么试验花了这么长时间，结果她说她在用一个dispo |
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r****o
发帖数: 105 | 16 本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低，所以由于渗透压的影响，
hela细胞膜会变得比较脆弱。这个时候呢，把重悬的细胞用Dounce 匀浆器处理一
下,把细胞膜弄破。低渗buffer里头虽然盐浓度很低，但也不是没有盐在里面。主要
有两种成分，一个是10mM KCl ,另一个是 1.5mM MgCl2。KCl没有什么好说的，
可以换成NaCl。MgC |
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r****o
发帖数: 105 | 17 本文献给YL
（十八）凝集素层析
我们用去垢剂溶解了膜蛋白之后，紧跟着的一步就是用Wheat Germ
Aglutinin(WGA) agarose来部分纯化insulin receptor。WGA是凝集素
(Lectin）中的一种，而Lectin指的是可以与糖基结合的蛋白质。现在常用
来做蛋白质纯化的凝集素绝大部分是从植物中提取出来的。绝大部分膜蛋
白的extracellular domain和分泌蛋白都有N-linked glycan 的糖基修饰。
根据这个性质，用固定有适当的凝集素的beads，比如WGA agarose或
者ConA agarose可以部分提纯膜蛋白。注意，只能是部分提纯，凝集素
层析并不能一步登天，让蛋白质比活力一下子提高上千倍，至多几十倍就
已经很不错了。但尽管如此，凝集素层析是一种很好的办法，因为buffer
条件非常温和，洗脱液是加了糖的buffer，透析什么的也方便，非常非常
适合于和其他层析方法偶连起来用。
纯化膜蛋白用的最主要的两种凝集素是WGA和ConA。谈到这里，
我先向大家介绍一下N-linked glycans。N |
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r****o
发帖数: 105 | 18 本文献给YL
（二十一）离子交换层析
做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后，下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单，利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样，属于
absorption/desorption型的层析方法，与gel filtration完全不一样，其中
一个最大的优点是，样品体积可以很大，最后的洗脱样品的体积可以小很
多，这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是，离子交换层
析其实不需要柱子，可以用batch 的方法（在离心管里面混合beads和样
品）。当然如果beads量多情况下，batch方法平衡得不是很好，导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会，以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化，原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团，所以实际上可以看成是 |
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r****o
发帖数: 105 | 19 本文献给YL
（二十三）正相与反相
我们纯化出钙调蛋白之后，就开始进行一些蛋白质化学的分析。主要是蛋
白酶消化，反相HPLC分析，MALDI-TOF质谱之类的分析。我觉得在这个课程
里面加一个质谱分析并不是那么有用，因为基本上只是演示实验，只是讲了讲
皮毛而已。相比之下反相HPLC在蛋白质纯化中要重要得多。
HPLC的全称是High Performance Liquid Chromatography （高效液
相色谱），这个名称听起来好像很尖端的样子，其实HPLC组成部件非常简单，
主要是三部分，泵，柱子，和UV monitor。反相HPLC跟一般的色谱的一个显
著不同是压力。为了保证纯化蛋白的分辨能力，反相HPLC柱的matrix材料颗
粒非常精细，所以必须施加很大的压力才能跑得动柱子。相比之下，反相HPLC
所需压力比一般gel filration柱子压力大十倍都不止。反相HPLC的分辨度十分
惊人，远远超过其他色谱方法。分辨度高到什么地步呢，我举一个自己的例
子。我原来在E.Coli里面表达EGF repeat，大概有7到8KD的样子，然后用体
外反应加上一个fuc |
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e********r
发帖数: 147 | 20 我们用最常用His tag + Ni-NTA（未加detergent）纯化到了一个可溶的细菌膜蛋白（
pET30a, 两个跨膜区）。虽然量很少，但有活性。Western blot和MS都鉴定该蛋白是正
确的。我们用这个蛋白做了论文里所有的实验。诱导条件是12度，24小时，0.5 mM
IPTG。
论文审稿后问题不大，但有个审稿意见让我们说明一下是“怎么纯化得到膜蛋白的”。
我猜专家是做蛋白结构的所以觉得很意外，但我怎么回答他比较合适呢？总不能说“我
纯化到了，所以我纯化到了吧”，这样审稿人会发怒滴，呵呵。请各位给个合理的建议
，谢谢。 |
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e********r
发帖数: 147 | 21 我们用最常用His tag + Ni-NTA（未加detergent）纯化到了一个可溶的细菌膜蛋白（
pET30a, 两个跨膜区）。虽然量很少，但有活性。Western blot和MS都鉴定该蛋白是正
确的。我们用这个蛋白做了论文里所有的实验。诱导条件是12度，24小时，0.5 mM
IPTG。
论文审稿后问题不大，但有个审稿意见让我们说明一下是“怎么纯化得到膜蛋白的”。
我猜专家是做蛋白结构的所以觉得很意外，但我怎么回答他比较合适呢？总不能说“我
纯化到了，所以我纯化到了吧”，这样审稿人会发怒滴，呵呵。请各位给个合理的建议
，谢谢。 |
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e********r
发帖数: 147 | 22 我们用最常用His tag + Ni-NTA（未加detergent）纯化到了一个可溶的细菌膜蛋白（
pET30a, 两个跨膜区）。虽然量很少，但有活性。Western blot和MS都鉴定该蛋白是正
确的。我们用这个蛋白做了论文里所有的实验。诱导条件是12度，24小时，0.5 mM
IPTG。
论文审稿后问题不大，但有个审稿意见让我们说明一下是“怎么纯化得到膜蛋白的”。
我猜专家是做蛋白结构的所以觉得很意外，但我怎么回答他比较合适呢？总不能说“我
纯化到了，所以我纯化到了吧”，这样审稿人会发怒滴，呵呵。请各位给个合理的建议
，谢谢。 |
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n**t
发帖数: 45 | 23 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（三）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:44:52 2005) WWW-POST
本文献给YL
（三） 不溶的sigma32
四月六号早上，我们开始了第一模块的实验，Burgess教授负责。这老兄研究了一辈子E.Coli的RNA polymerase。E.Coli RNA polymerase 核心酶是一个蛋白质复合体，只有合成RNA的活性，却没有
识别DNA的能力。Sigma系列因子能够识别启动子, 并且与核心酶结合，从而实现转录。我们这个实验
的核心主角就是其中一个因子，叫sigma32。Sigma32可以识别heat shock genes的启动子。Sigma 32
过表达在大肠杆菌里面的时候，绝大部分形成了不溶的包涵体(inclusion body),我们的任务就是要用变性
剂溶解变性不溶的蛋白，然后做重折叠。
所有的buffer几乎都已经配好了 |
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n**t
发帖数: 45 | 24 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
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标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（五）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 17:57:06 2005) WWW-POST
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（五）"万金油"buffer
Dr. Burgess 这人特有意思，喜欢吹嘘他发现的小trick。比如，他得意说他是全美国最早用
coomassie blue染蛋白胶的人。据他说，六几年的时候他看到一个澳洲的老兄的一片文章,讲述
一种新奇的染料叫考马市亮蓝, 比当时流行的染料amido black灵敏十倍以上。所以他就写了一
封信要了一些，结果效果奇好。我们听得都目瞪口呆。
不过Burgess最自豪的，还是他的“万金油”buffer。他告诉我们说，他几十年了，总喜欢用这
个buffer的配方，什么蛋白都喜欢这种buffer, 可以说到了包治百病的神奇地步。尽管他吹得神
乎其神，配方却十分简单。这个buffer叫TGE,就是Tris, glycerol 和 EDTA。配方 |
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n**t
发帖数: 45 | 25 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
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标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（六）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 18:08:46 2005) WWW-POST
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（六）兴风作浪的乳糖(lactose)
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，
但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌钟表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是
Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7 噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction
system(pET 系列质粒)的发明者。
T7 系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个
系统。长话短说，pET系列的质粒都用T7 promoter来控制基因的表达。T7 promoter只能被T7 RNA
pol |
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n**t
发帖数: 45 | 26 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（八）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Fri Apr 29 11:14:36 2005) WWW-POST
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（八）”液体DEAE“
绕了这么大一圈，现在再回到第一个模块的实验来。前面提到Dr.Burgess要我们
试Gudn HCl溶解sigma32之后的重折叠，结果很糟糕。我们接着试了用sarkosyl做
变性剂的蛋白重折叠。步骤和前一个类似，只是这一次是突然稀释至25倍体积。效果
好了很多，至少没有浑浊现象了。接着我们用Poros HS 50，一种阳离子交换柱，
来把可溶的sigma 分离了出来。为什么这一次用Poros HS 50 而不是前面用的阴离
子交换柱呢？因为sarkosyl带负电，会与阴离子交换柱结合得很好。再加上sigma32
很奇怪，既有负电的表面，又有带正电的表面，所以可以用阳离子交换柱。值得一提
的是绝大部分蛋白质都是偏酸性，所以阴离子交换柱用 |
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r****o
发帖数: 105 | 27 本文献给YL
（十四）anfinsen的疑虑
跑完sephacryl柱子，组分就可以过DNA affinity column。DNA affinity column虽然很重
要，但是这一步技术上来说要求很低。买来CNBR活化好的agarose，然后让特定序列的寡聚核
苷酸固定上去就行了，柱子也是最简单便宜的一次性柱子。
亲合层析是目前最常用也最强大的一种蛋白质纯化技术, 纯化效率比别的层析方法可以高出一
两个数量级。这种方法诞生是六十年代的事情。当时是在NIH的Anfinsen实验室。Anfinsen是一
个诺贝尔奖获得者，可以说是蛋白质折叠研究的老祖宗。他主要贡献是通过研究ribonuclease 的
变性和重折叠证明氨基酸序列就可以决定蛋白质最后的三维结构。他实验室那时侯有一个学生一
个project是从葡萄球菌里面提取大量核酸酶，然后研究enzyme-inhibitor interaction。这个纯
化可是很麻烦的事情，用gel filtration, ion-exchange, hydrophobic interaction, 效率都很
低。有人可能会问，怎么不在E.Coli |
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r****o
发帖数: 105 | 28 本文献给YL
（十九）MDA-BF-1的启示
凝集素层析实际操作起来很简单，跟过简单的Ni柱子一样。拿到洗脱
的蛋白之后，我们就着手开始测活，分析纯化的效率和倍数。胰岛素受体
不是酶，所以测活是利用胰岛素与受体的特异结合。具体的测活步骤非常
简单，就是把I-125标记的胰岛素和纯化的组分混合然后孵育一段时间。然
后加PEG（Poly ethylene Glycol ) 6000沉淀胰岛素受体，而游离的胰岛
素不会被沉淀下来。说到PEG沉淀，Dr.Lin讲了她自己闹的一个笑话。是
这样的，她实验室发现了一个蛋白质因子 MDA-BF-1。这个因子对Osteoblast
（成骨细胞）的增长有促进作用。然后呢，她就想把这个因子的受体给找
出来。首先一步呢，就是得有一个测活方法。所以她就比照insulin
receptor的测活方法而设计了一个方法, 其中连PEG沉淀都是一样的。
结果呢，这个测活试验完全失败了。问题出在PEG沉淀这一步。PEG作
为一种多元醇，可以想像为一种“分子海绵”，可以吸附水分子。这样样
品中蛋白的有效浓度实际变大了好多，容易出现聚集然后沉淀的现象 |
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r****o
发帖数: 105 | 29 本文献给YL
（二十二）失败中的启示
离子交换层析之后是最后一步纯化，疏水作用层析(hydrophobic
Interaction Chromatography, HIC)。HIC和硫酸铵沉淀是同一个原理。
蛋白质表面有一些疏水区域，如果在蛋白质样品溶液里面加足够的盐，
就会与这些疏水区域争夺水分子。没有了足够的分子，这些疏水区域倾向
于与其他疏水区域结合。HIC的beads上衍生有非极性基团，可以与蛋白
质的疏水区域结合，这样蛋白质就能bind到柱子上。要想把蛋白质洗脱
下来，则要用低盐缓冲液冲洗，盐浓度下降之后蛋白质与柱子的疏水相互
作用也被削弱，所以能被冲洗下来。由于HIC要求样品的起始盐浓度很高，
所以特别适于作为硫酸铵沉淀或者离子交换层析后续步骤。因为硫酸铵沉
淀（无论是上清还是沉淀）和离子交换层析的产物，盐浓度都非常高，如
果直接再跑HIC，不但省了透析脱盐的一步，还进一步纯化了蛋白。现在
常用的HIC resin上的疏水基团有两种，一种是Phenyl 另一种是Octyl。比
较而言，Octyl group更加疏水一些。我们这一次的实验中用的是Phenyl
se |
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r****o
发帖数: 105 | 30
本文献给YL
（二十四）尾声
蛋白质纯化第十三天，也就是最后一天的时候，大家基本上都松弛了
下来，开始准备狂欢。先是每人发了一件纪念T shirt，然后在CSHL的酒
吧里面开酒会，再接着就是龙虾宴。不过气氛最热烈的还是龙虾宴之后
的诗会。诗会我还是第一次碰到，要求每人写一首跟蛋白质纯化有关的
诗，并且当众朗读，场面十分热闹和搞笑。我好不容易写了一首，是这
样的：
My protein
My protein used to be wild,
Like a naughty child,
He likes to play seek and hide,
which makes me feel really tired,
But now I can find him no matter it is day or night,
Because from Dick, Al, Sue-hwa and Constantin,
I have learned how to Purify!
诗会之后，绝大部分同学和老师都在活动室打乒乓球 |
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l*********g
发帖数: 41 | 31 我这个蛋白大概60多kd，在pet29a上表达还可以。现在我在大概22-23aa那里突变出了
个bamhi位点，然后呢插进去一个15aa的avi-tag，策序什么的都正确，可是表达和纯化
出了问题。
在BLR（DE3）里面表达，只有一次纯化到了我的蛋白，后来就是重复不出来，至少有四
五次了，我检查诱导前后的带，也没有发现明显的表达带，但是即使在我纯化到了蛋白
那次也没有看到明显表达带。我怀疑质粒丢失，但是在overnight培养后也提到了
plasmid，现在真的找不到什么原因了。 以前大概相似蛋白在同样载体上，随便一表达
，至少可以看到一条表达的带，但是现在什么也没有了。我在想即使蛋白折叠不好，但
是至少肽链在那里，电泳也应该看到的，除非它被彻底讲解了，真是郁闷啊。请高手指
点！！ |
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a*****3
发帖数: 565 | 32 想请教纯化蛋白的专家几个问题
1,用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白，收集到的样品是带有完整的6xhis序列的蛋白
还是洗的时候被洗脱了。
2,有没有人碰到过纯化蛋白没有活性的情况？听说还是很有可能的。
3,如果有可能失活，哪类蛋白比较容易过柱后失去活性呢？
先谢谢了 |
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m********r
发帖数: 124 | 33 版上牛人多，上次的菌落PCR感谢各位已经解决，现在有个新蛋白纯化的问题，快半年
了始终没解决，特上来求救：
是一个粘菌中的小蛋白13KD左右，遗传学认为在信号通路里起抑制作用。表达用His-
GB1-tag大约50%可溶。GST差不多的样子。GB1的表达量大很多。可是纯化总是有问题，
在100%的buffer B （300mM咪唑）下来，总是还有很多别的杂蛋白，这些杂蛋白似乎洗
不干净。过个Gel filtration 也分不开。
这个蛋白确实知道的很少，BLAST就出来10个左右，第三个e-value已经是1.5了。我怀
疑是降解得问题，因为去预测结构的时候，只有后面的70个氨基酸给了预测的结果，前
面都没结果，而且这段结构也是loop居多。而且纯化过程是分子量比它小的杂蛋白。但
是我加了蛋白酶抑制剂，没啥作用。
在黏菌的基因组中，它是跟另一个蛋白在一块的，我可以尝试共表达他们两个，但问题
是，我们的目的是验证这两个蛋白的相互作用，如果这样，我得到了稳定的蛋白
complex，再怎么分开他们呢？
确实很头大，眼看着这个蛋白拿不到，（另一个蛋白早就拿到了，HSQC也有了）想做的
蛋白相... 阅读全帖 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 34 你把这个蛋白跟另外一个共表达，一个有tag，一个没有
如果出来complex，（native gel, SEC），不是也是一个他们相互作用的证据么？
另外你his-tag纯化的时候wash buffer里面离子浓度多少？
还有如果实在不行，可以denature条件下纯化这个蛋白
13 kDa这么小，重折叠不是什么大问题
另外既然怀疑这个蛋白二级结构也不多，不如试试你的GST-tag的那个
虽然一开始表达的少
但大不了多摇点菌
GST应该可以帮助稳定这个蛋白
前70aa没有什么可以预测的二级结构的话正好可以在GST-protein里面当linker
纯化好了蛋白再把GST切掉（我假设你的fusion protein是有特异性蛋白水解酶酶切位
点给你切GST的） |
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l*****5
发帖数: 197 | 35 大家好，现在遇到一个问题不知道怎么解决，希望在此得到帮助，不甚感激！
我用recombinent protein 做一个in vitro assay，最终希望得到一个比较纯，浓度比
较高的dimer，所以一个是His tag，另外一个是GST tag，计划用两次纯化得到最终产
物，其间涉及到另外三种enzyme,实验室以前别人做的，都是His tag。
按理说，整个反应的过程没有多大难度，有一些文章也有receipe，但因为我需要的是
最终的产物，然后再接着往下做别的，所以希望能做的多一些，也需要浓度大一些。但
我已经试了3、4次了，基本上每次做都会缓慢的出现絮状的沉淀，就好像蛋白变性的那
种感觉，会不会是我用的反应浓度比paper上的浓？但我需要的量比较大啊。。。lab以
前的师兄做过，效果还可以，我的浓度是他的5倍，而且总体的量也多很多，他以前做
的量都比较少，也不需要纯化之类的，师兄毕业走人了，而且他一直就用比较稀的浓度。
还有，我试着将离心后的上清过Thermo Pierce的glutathione agarose beads,可以看
到蛋白有吸附（有YFP tag），但我最后... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 2939 | 36 不知道LZ的制备级是指多大量？其实一般3-5ml的柱子就能解决大部分需求了。
我以前一直是GE的忠实用户，整天在ATKA上折腾。现在我全面转向Pierce的柱子了，他
家有0.2, 1 and 3 ml的centrifuged columns，nickle和cobalt都有，都很方便。最大
的优点是可以同时纯化多个蛋白。3 ml的Ni柱子理论可以纯化到>100 mg，Co柱子能到
30 mg.Co柱子非常好，我已经用它一步纯化超过5个蛋白做结晶，全部成功。 |
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m***c
发帖数: 177 | 37 Tag的作用是用来提纯。对于产量低、纯化困难的旦白是有效的。但是对于production
level来说，还要考虑单位产量的问题，除纯度外。有Tag的就需要増加纯化部骤，因此
就会增加纯化过程中的损耗。 |
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h*******u
发帖数: 126 | 38 请教各位大牛，我们用CRISPR/CAS9腺病毒敲除基因，在纯化之前的检测PCR和T7EN1有
效果，而用腺病毒纯化试剂盒纯化以后，就不能够切割DNA了？试了两种不同的试剂盒
都是这样，着急死了，怎么回事呢？ 谢谢各位！ |
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e*****i
发帖数: 149 | 39 我其实是搞生物 的，要用到很多小分子化合物做药理实验
sigma卖得贵死
其他卖的也不便宜
据说sigma都是 买国内的便宜货，然后自己有一个很好的纯化系统，过一下纯化系统就
ok了。然后就 卖得死贵。
是这样的吗？ |
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h******g
发帖数: 600 | 40 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: hawkping (鹰平), 信区: Chemistry
标 题: 请问：低分子量的PEG如何纯化。谢谢了。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 13 23:36:47 2014, 美东)
通过EDC coupling合成了一个双功能化的PEG，PEG分子量很低，只有900左右，反应
后用沉淀法纯化，用冷冻乙醚作溶剂，每次沉淀出来的都是油状物，沉淀了五次。打核
磁，还是一堆杂峰。请问这种低分子量的PEG衍生物有什么好的方法纯化吗？谢谢了。 |
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g*****1
发帖数: 666 | 41 几点猜测
1.FDA不喜欢带tag的最终产品
2.切掉tag需要工业上生产GM Plevel的蛋白酶，成本和QC难度指数增长
3.现有的process足以应付untag的蛋白药物。
4.工业纯化要大量，快速，低成本，易操作，纯化的步骤简洁，产量高。和实验室里迅
速得到一个蛋白的思路完全不一样。工业纯化中象sizing column是不会或极少出现的
。 |
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g*****1
发帖数: 666 | 42 几点猜测
1.FDA不喜欢带tag的最终产品
2.切掉tag需要工业上生产GM Plevel的蛋白酶，成本和QC难度指数增长
3.现有的process足以应付untag的蛋白药物。
4.工业纯化要大量，快速，低成本，易操作，纯化的步骤简洁，产量高。和实验室里迅
速得到一个蛋白的思路完全不一样。工业纯化中象sizing column是不会或极少出现的
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l****n
发帖数: 445 | 43 《爱情的结构与纯化》
南大出来的穷小子们，大都染上了两个病：理性和理想主义，甚至执拗地把她们带到了
很不适合的领域-爱情。一篇风花雪月的文章也会不由自主的变成了论文的格式，看客
们自当谅解。
晶体生长里有一个方法叫‘区溶发’，是利用温度梯度将杂质去除的方法。其中的关键
在于晶体有趋于完美的热动力学基础，晶格的结构使得杂质被变得不受欢迎，吉布斯自
由能总是趋小。
爱情的自由能极难用公式表达，理论上讲也跟结构有关。我们也可以假定好的结构是取
得高纯度爱情必要条件。
首先是合理的价键结构合理，由于爱情势能的特殊性，我们通常只考虑双原子结构。主
要方面有：
1. 性的和谐和完美。一百年前敢于把这个因素归于第一的人早已经成名了，其
中包括D.H.劳伦斯【1】。最近的研究发现，好的感情这一因素反而占少，而许多失败
的感情都由此而起。严格的相关统计分析，还有待进一步研究。
2. 思想上的沟通与理解。鸡同鸭讲或者talk to a rock是使原子游离的重要原
因。其范畴包括情感，生活，事业上的理解，包容，支持。越能从彼此的交流当中获得
认同，取得动力，更深层次的认识问题，创造... 阅读全帖 |
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a*******c
发帖数: 39 | 44 ft 这些 trick 也太简单了，蒙外行的，哈哈
国最早用
章,讲述
就写了一
总喜欢用这
他吹得神
样的:
很多蛋
他的
实验室里干，主要是纯化细菌RNA
放冰
。
活性还
成
们做。
分成两部
孔10微升，
我们有一
试了所有这
glycerol,这四种
以实时监控折
涂，没有
是hampton
果都很好。
还学到的一 |
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h*d
发帖数: 19309 | 45 【 以下文字转载自 CampusInfo 讨论区 】
发信人: wingzero (wingzero), 信区: CampusInfo
标 题: [12.10晚]纯化信仰，结晶未来——与施一公面对面
发信站: 水木社区 (Fri Dec 4 01:23:17 2009), 站内
纯化信仰，结晶未来
——与施一公面对面
从醉心科研到躬身桃李，圆教书育人梦；
自普林斯顿到水木清华，怀朴素爱国情。
他是焦点，是期盼，是浩瀚学海绽放的夺目光芒。
他有担当，有胸怀，是纯正信仰凝成的闪耀结晶。
昨日寒窗学子，今日学界精英，他一路游刃奋勇，建树生物，深探结构，硕果累累。
任教普林斯顿，投身祖国科研，他放弃优厚条件，不问得失，毅归清华，另辟天地。
心系天下大任，悉心树德树人，他研究执教并重，践行爱国，传播信念，培育精神。
连他的名字，都包含着“施德育人，一心为公”的深切寓意。
他，就是施一公。
施一公教授是世界著名结构生物学家，海外华人生命科学界的领军人物。清华大学
生物学与技术系1985级校友，1995年获美国约翰霍普金斯大学医学院生物物理专业博士
学位。他是普林斯顿大学分子生物学系历史 |
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r****o
发帖数: 105 | 46 本文献给YL
（二）同学和老师
冷泉港的《蛋白质纯化与鉴定》培训班历史相当悠久，从1989年开始每年都开课，到今年是第十六次。每
年都是四月初开始，持续两个星期。值得一提的是，冷泉港有相当多的培训班和会议，是一个科学家交流和
学习的中心。这是冷泉港享有盛名的最主要原因。
2004年底, 我下定决心上这门课，于是递交了申请。二月份的时候的到消息，我被录取了，并且还有
1000刀的tuition waiver。可我还是高兴不起来，因为还得解决1600刀(学费一共2600刀)。老板人很nice,
但是他实在没钱了，所以我只好咬咬牙自己套腰包解决了，去年的退税就这样全搭进去了, 欲哭无泪啊。
四月五号下午我赶到冷泉港，办完登记手续后被告知晚上七点全体开会，与教员和同学见面。老师一共有四
个，每人负责一个模块的实验，持续三天时间, 每个老师都有一两个助手帮忙。学生则一共有16个，分成四
组，轮转式的做完四个模块。我这一组其他三个人是:来自colorado Boulder 的chad,做有丝分裂的;来自
Princeton的Adam,做海洋生物学的。Chad和Adam都是博士后。第三个是来自丹 |
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r****o
发帖数: 105 | 47 本文献给YL
（七）古怪的CDC6
这里再给大家讲一个在大肠杆菌中表达蛋白质的例子，一个很夸张的例子，但是很有启发性。
Bruce Stillman 是冷泉港的现任主管，是一个绝对的牛人。不但科学做得很好，而且还很爱
国。他是澳洲人，在美国待了N年，却从没有加入美国国籍，所以他只是外籍院士。我们的晚间报
告有一个是他作的。他主要研究真核生物的DNA复制。这是一个到现在为止都没有完全弄明白的领
域。在报告里面，他特别提到了表达纯化CDC6蛋白的经历，我觉得十分有意思。这个蛋白, 用他
的话说，是"a pain in the ass"。
CDC6是干什么的呢？这要从ORC说起。真核生物的DNA有多个复制起始位点(replication
origin)，ORC(Origin Replication Complex)是一个很大的蛋白复合体，可以识别这些复制起始位
点。ORC在整个细胞周期里面都是与DNA结合的。在G1期里面，CDC6这个蛋白会与ORC结合，同
时让MCM(DNA解旋酶)也装载到ORC上，形成一个pre-replication protein complex。这个co |
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r****o
发帖数: 105 | 48 本文献给YL
（九） 沉淀，沉淀，沉淀
上一部分我匆匆提到了用硫酸氨沉淀来去掉PEI(Polyethyleneimine）的步骤。
不常做生化的同学可能对硫酸氨沉淀的方法不熟悉。但其实这种沉淀是蛋白质纯化中
及其重要的一种方法。说实话我过去也很少接触，但是在这个课里面，四组实验中有
三个都用到了这个方法，可见其重要性。
硫酸氨沉淀是怎么做的呢？其实很简单，把磨细了的硫酸氨粉末往样品溶液里
倒就行了，蛋白就会相继沉淀下来。由于不同的蛋白，在不同的硫酸氨浓度下被分
别沉淀下来，这种方法把蛋白质样品粗粗的分离一下。这种方法对大量样品尤其好
用，因为比较方便快捷便宜。硫酸氨沉淀的优点是什么呢？最大的优点是这东西虽
然能让蛋白质沉淀下来，但是不会让蛋白质变性，所以沉淀下来的蛋白质一般可以
重新溶解。
其实沉淀蛋白质的方法有很多种，但是对于娇贵的蛋白质来说，很多常用方法
都太harsh了。我举两个例子把：TCA沉淀大家都熟悉的。TCA是个强酸，施放出
来的质子中和了蛋白质的负电荷，只留下正电荷与TCA形成不溶物，从而变性。
丙酮沉淀，通过改变介电常数来降低蛋白质的溶解度，从而沉淀， |
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r****o
发帖数: 105 | 49 本文献给YL
（十五）AP1的活性测定
第二个模块的实验，DNA affinity chromatography之后我们又跑了一个更精细的
Gel filtration，用的是Amersham卖的Superose 6预装柱子。纯化步骤就只有这么多了。
剩下的就是一些活性测定。无论是sephacryl分出来的组分还是DNA affinity column分出
来的组分，我们都测试了AP-1的活性。方法呢就只有两种，一种是凝胶迁移率变动分析
(EMSA)，另一种是DNA水解酶I 足迹分析 (DNase I footprinting assay)，都可以用来分析
蛋白与特定DNA的结合能力。我过去没做过这两种实验，所以感觉很新奇，做的也格外卖
力，结果也还不错。
Gel Mobility-shift assay 原理很简单，把蛋白质样品和P32标记的寡聚核苷酸探针
一起孵育十几分钟, 然后拿去跑一个低浓度acrylamide胶。如果探针结合上蛋白了，速度
会变慢很多，就会停滞在胶的上段；如果没有结合上，探针就会自由的跑到胶的下段去。
然后把胶拿去做放射自显影就行了。跑胶的装置 |
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p*****n
发帖数: 981 | 50 ☆─────────────────────────────────────☆
elity (elity) 于 (Sun Feb 4 12:10:55 2007) 提到:
实验室要新添一台纯化蛋白质的仪器，不知道大家觉得什么样的较好。现在在考虑的有
： ActaPrime, BioRad 的 BioLogic DuoFlow, 以及ISCO的Foxy。不知道大家有什么建
议。 谢谢。
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anoia (阿诺) 于 (Sun Feb 4 12:16:28 2007) 提到:
FPLC?
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goodpop (姚期智老师对我说不要自满) 于 (Sun Feb 4 15:09:47 2007) 提到:
蛋白纯化系统还是akta系列最好
有钱就买purify,甚至explorer
钱不够就FPLC
prime这种破烂货就别要了
你要是买了prime,大部分prepacked columns就别想用了
只要钱 |
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