A***g
发帖数: 191 | 1 实验室要合成很多条siRNA，我建议最好每条siRNA都做HPLC纯化，但是合成这个siRNA
好贵啊，每条加上HPLC要260刀。
今天听说不用HPLC纯化也是可以的，版上有没有人做过呢，哪个公司合成RNA会便宜点
啊？ |
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m*****g
发帖数: 21 | 2 我合成过的
自己根据文献给序列
但是是国内的公司，广州的现在好像做的挺好的了
人民币大约是1300？赠送不多的controlsiRNA
好像也是HPLC纯化，效果不错，不做HPLC纯化的就不知道了 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 3 还有你induce你的细胞之后，有没有直接看细胞 表达蛋白的mw? 如果是35kd,纯化后变
成20kd那就是纯化过程中的问题
了。
His |
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b******n
发帖数: 4225 | 4 取决于你的目的啦
Talon基于cobalt跟his tag结合，
优点是不太容易被lysate里面的巯基乙醇，DTT等还原
跟E.coli内源的含his的蛋白(如SlyD)结合力弱，纯化效果好
缺点嘛，就是有时候跟目的蛋白都不能结合
Ni-NTA的缺点差不多跟Talon反过来吧
NI-NTA 和 Talon mental beads 相比， 纯化的效果那个好些？
谢谢！ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 5 "2.buffer里面是250mM,应该不低吧"
——250 mM还好啦
试试看500 mM
给你看个我的某个his蛋白纯化的比较
另外我说GST tag帮助你这个没什么二级结构的蛋白折叠不是说GST tag小
我反而觉得大一点的tag可能更有帮助
refold能不能回到native？这个问题不好回答。所以一般而言denature条件纯化是最后
一个选择 |
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l********g
发帖数: 26 | 6 用高浓度NaCl是因为蛋白不是很稳定。
我是用M2-beads纯化的，说明书上直接推荐了一款产品作为lysis buffer，
我查了一下这种lysis buffer的盐浓度是150 mM，但是在这个浓度下我蛋白可能不稳定
。。
另外，我的lysis buffer还加了15%的甘油。
我新手，不是很清楚用flag tag纯化的时候需要注意什么。
还请大牛们指点指点 |
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M*******h
发帖数: 294 | 7 我有一个his tag的蛋白A，和从rabbit血清里纯化出来的抗体B（我用protein A
agarose纯化
的，应该是各种不同IgG的mix吧。。。），想用affinity purification来得到对A比较
specific
的抗体。我能大概想出来的流程是：把A挂到Ni柱上，然后把B通过柱子，再然后把B从
柱子上洗下
来，但是不知道具体应该怎么操作（从来没做过蛋白，真是惭愧）。想请教版上大牛们
有没有具
体的protocol可以参考。万分感谢！ |
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h**********r
发帖数: 671 | 8 我一般在Invitrogen合成引物。好奇的问一下大家，一般大家用来做表达的引物是什么
纯化级别的？我知道做突变的引物至少是PAGE纯化的。普通表达的我以前订的都是最低
要求的。
多谢！ |
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j****x
发帖数: 1704 | 9 普通PCR，引物长度在25以下的话desalted足够了，大部分qPCR用desalted也没什么问
题。长度超过30bp，特别是用于突变的，推荐用HPLC/PAGE纯化的，但是价格自然就飙
升十倍以上了。不过听很多人讲用desalted的引物做突变也没什么问题。
记得以前在国内的时候，合成引物的默认纯化方式就是PAGE，很便宜价格没这么离谱啊
，不知道为什么 |
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k****n
发帖数: 158 | 10 新手做一次蛋白纯化，求推荐一个GST tagged 蛋白的纯化试剂盒 |
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c**********5
发帖数: 653 | 11 纯化前的血清 western blot 抗原灵敏 很低，为排除WB 系统问题， 不想对纯化的抗
体试WB，
什么别的方法可以检测抗体特异识别我的抗原。 |
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a******g
发帖数: 71 | 12 endostatin的refolding是一件极其困难的事情，Folkman最早的paper里他们提到有99%
的蛋白沉淀而无法复性，所以罗的工艺在此处有独到之处。
罗的工艺基本是遵循纯化，复性，再纯化（不依赖Ni柱）的途径，最后产品纯度高当然
不只是蛋白质，并且元素检验也没有Ni残留，至于你说的endotoxin更是检测不出。
如果你不了解具体的过程，就不要着急trivialize别人的东西。 |
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a******g
发帖数: 71 | 13 第一步从包涵体中纯化是用Ni柱，第一步结束之后需要透析到酸性环境下除去所有尿素
且确保不沉淀，然后在一个特定配方内进行复性和S-S正确配对，然后有一个再纯化的
过程去除没有复性而聚集的蛋白，这一步不用Ni柱。最终产物走HPLC，走gel
filtration，结果都非常好。
在实验室里，罗从来不会公布复性的方法，因为这个是商业机密，没有哪个学生知道。 |
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h******g
发帖数: 600 | 14 【 以下文字转载自 Macromolecules 讨论区 】
发信人: hawkping (鹰平), 信区: Macromolecules
标 题: 请问：高分子纯化的ultrafiltration如何做？谢谢了。
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 18 13:26:32 2011, 美东)
文献上讲用ultrafiltration纯化，是不是需要特殊的仪器，还是跟dialysis一样？
谢谢了。 |
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b*******g
发帖数: 1040 | 15 本人没做过蛋白纯化，对其一无所知。现以构建了GST表达质粒，要转化到rosetta 2
感受态细胞中，然后纯化蛋白，请大家推荐beads. 请告知详细信息，如公司，catalog
number.
本人菜鸟一个，望大家帮助！
谢谢！！！！！！ |
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L*****t
发帖数: 56 | 16 我习惯用IDA挂Zn纯化His，果然是少数派么。
一次纯化多个蛋白其实也不一定要用spin column, 用Pharmacia P-3之类的三道蠕动泵
也可以 |
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C********4
发帖数: 308 | 17 传统的complex纯化，不应该是加了tag的蛋白，很strigent的条件(500 mM NaCl etc)
拉下来，在银染上看到带，才切下来去打，然后一系列实验，比如gel filtration，体
外重组蛋白重组这个complex等, 验证了，才敢说是complex吗。
现在很多文章所谓的纯化蛋白 complex，都是不需要看到清晰的条带，直接把elution
全部去打质谱（或者在切整个胶），看到三四十个蛋白，随便找几个自己想要的，就说
是interaction。
不知道哪个可信啊。 |
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h*********e
发帖数: 55 | 18 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。 |
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a********g
发帖数: 558 | 19 最近做GST-tag的蛋白纯化，蛋白纯化出来后，在sepharose-４bbeads上切，elusion下
来蛋白总有杂带，一条大概７０kd，一条２７kd后者经检验发现是GST。前者未知，请
大牛们帮忙判断下是什么原因？ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 20 最近做一个蛋白A
高pI（>9)
已知蛋白A跟蛋白B，或者蛋白B+C有相互作用
于是共表达然后纯化复合物
纯化过程中用detergent啊，lyzosome啊
DNase还有RNase啊
结果破碎细胞以后离心得到的pellet，还有得到的复合物pellet都超级难resuspend的
一整块像Jelly的东西
能弄成大小碎块但是没有办法混匀
用针头反复吸吹也不行
加Uear到5M也不行
参考了一些提纯histone protein的protocol，
加HCl到0.25M也没有办法完全溶解
求建议！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 21 打算去买一个杂交瘤细胞收集上清然后纯化抗体做western。
请教几个问题，请内行指点一下。
1. 杂交瘤细胞培养的时候需要血清，也含有IgG，纯化的时候会造成干扰，怎么排除这
个干扰？
2. 哪家公司的kit好用一些？
谢谢！ |
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o*****4
发帖数: 1245 | 22 主要看啥叫个大规模，啥叫纯化做得好。几十升长长大便菌，提提可容蛋白，会的人多
了去了。
要是一做做几百升，又能精通纯化各种难容蛋白，那就难了。 |
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l*****t
发帖数: 175 | 23 我在公司又做发酵又做纯化。这是因为我们部门特殊，不可以和其它部门的人员混合起
来。另外部门都是upstream和downstream分开的。
我觉得同时做大规模发酵+纯化的人应该是很少的。估计小公司会有。 |
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s**********a
发帖数: 92 | 24 就是先处理细胞一段时间，然后纯化上清液，通过蛋白质谱等方法鉴定出都有哪些分泌
物。
大家做过类似的实验么？用的什么方法？
不纯化直接取点上清液做质谱是不是不靠谱？
谢谢！
ps: NgAgo有点玄（悬）！ |
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h******g
发帖数: 600 | 25 【 以下文字转载自 Macromolecules 讨论区 】
发信人: hawkping (鹰平), 信区: Macromolecules
标 题: 请问：高分子纯化的ultrafiltration如何做？谢谢了。
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 18 13:26:32 2011, 美东)
文献上讲用ultrafiltration纯化，是不是需要特殊的仪器，还是跟dialysis一样？
谢谢了。 |
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h******g
发帖数: 600 | 26 这是一种跟沉淀法一样的纯化方法，需要用这种纯化方法除去小分子单体，反应物。
谢谢了。 |
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h******g
发帖数: 600 | 27 通过EDC coupling合成了一个双功能化的PEG，PEG分子量很低，只有900左右，反应
后用沉淀法纯化，用冷冻乙醚作溶剂，每次沉淀出来的都是油状物，沉淀了五次。打核
磁，还是一堆杂峰。请问这种低分子量的PEG衍生物有什么好的方法纯化吗？谢谢了。 |
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n**o
发帖数: 3 | 28 本人原是pharmaceutical背景，做的是formulation, HPLC，PK/PD这些热门技术。不过
因为有些了解，所以对化学制药的前景和研究方式不是很看好。于是在master degree
时就转成跟生化和免疫相似的课题，做了许多蛋白，单克隆抗体的纯化，生物分析，细
胞培养方面的工作。现在想找蛋白纯化和生物分析的工作，尽管我的skills和job
description的要求match的一塌糊涂,可是interview却没几个。请教各位在业内工作的
前辈，能够指点迷津吗 |
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h*********e
发帖数: 55 | 29 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。 |
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h*********e
发帖数: 55 | 30 我在实验室纯化蛋白时常先用His-,GST- tag纯化再切掉tag,但是发现在工业化蛋白纯
化中很少用tag。请问这是为什么？万分感谢。 |
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w********u
发帖数: 133 | 31 克隆，蛋白表达纯化，酶活方面工作求内推
博士和postdoc期间做过克隆，蛋白表达纯化，酶活
有绿卡，可以relocate（最好还在加州）
目前在san diego，求前辈帮忙内推。 |
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发帖数: 1 | 33 纯种猪就是肉长的多，比起野猪，纯种猪在生存、繁衍上没有任何进化优势。
同样人如果通过近亲结婚获得纯种，有可能得到高智商、长得美、高等某种优势性状，
但是同时可能会纯化出大量致病的纯合。 |
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w*p
发帖数: 16484 | 34 分析的不错，看着像生物博士后
: 纯种猪就是肉长的多，比起野猪，纯种猪在生存、繁衍上没有任何进化优势。
: 同样人如果通过近亲结婚获得纯种，有可能得到高智商、长得美、高等某种优势
性状，
: 但是同时可能会纯化出大量致病的纯合。
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发帖数: 1 | 35 我最近纯化一个膜蛋白，昨晚跑了一晚上柱子，然后今天一大早送去旁边楼里的core
facility要做个质谱。可能是昨晚熬夜，肠胃出了问题，送完sample我突然就想拉屎。
这楼特旧，厕所不干净，通风也不好，巨臭。我一般是不在这楼里拉屎的，可是没办法
，这回，实在是想拉了。打开坑门儿一看，太他妈恶心了，马桶圈子上沾着屎粑粑星子
。我忍着恶心劲儿，扯了10张擦手纸，5张沾了洗手液，5张不沾。然后我先用沾了洗手
液的擦了5次，又用不沾洗手液的擦了5次，总算把马桶圈儿擦得像新的一样。
因为刚用手擦完沾屎粑粑星子，我决定再忍一分钟，把手洗干净再拉屎，以防传染性病
。他妈的，我刚开水龙头洗手，一个黑影就以迅雷不及掩耳盗铃之势冲进了坑位，把门
关上了。
我愣了10秒钟吧，然后我就开始敲门。我说Why you take me seat? Why you take me
seat? Why you take me seat? 我一直敲了一分多钟，里面的人只管拉屎，也不理我。
我摇摇头正要认倒霉，结果里面一个河南口音骂了一句“神经病”
我一听气得太阳穴都炸了，我说你他妈的你丫才有神经病，草尼玛妈妈的。你他... 阅读全帖 |
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x**k
发帖数: 358 | 36 【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: xork (xork), 信区: SanFrancisco
标 题: 湾区蛋白纯化的工作机会
关键字: 蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 7 12:07:24 2011, 美东)
Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Requirements:
PhD, BS, MS or equivalent in biochemistry or a related discipline;
5+ yrs of relevant protein biochemistry experience;
Experience with FPLC and HPLC;
Hands on experience with cell culture techniques is highly p... 阅读全帖 |
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x**k
发帖数: 358 | 37 【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: xork (xork), 信区: SanFrancisco
标 题: 湾区蛋白纯化的工作机会
关键字: 蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 7 12:07:24 2011, 美东)
Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Requirements:
PhD, BS, MS or equivalent in biochemistry or a related discipline;
5+ yrs of relevant protein biochemistry experience;
Experience with FPLC and HPLC;
Hands on experience with cell culture techniques is highly p... 阅读全帖 |
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m****m
发帖数: 395 | 38 求审稿机会，膜蛋白、不可溶性蛋白、可溶性蛋白，X射线晶体衍射、核磁共振，结构
生物学、蛋白结构与功能、蛋白表达和纯化技术
站内联系，多谢！！
邮箱： [email protected]/* */ |
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y********n
发帖数: 269 | 39 我一同学帮我联系了一家投资公司，愿意出2000W协助我成立个生物技术公司。我想利
用我的专业做单克隆抗体纯化。不知道两年2000W够不够用 |
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f****b
发帖数: 314 | 40 there are too many 单克隆抗体纯化 company in CHina already... |
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l**********k
发帖数: 189 | 41 做抗体纯化是很不错，但市场竞争也很大，不管是国内还是美国。如果你的市场是面向
国内，在盈利面上的 margin 会很小。估计你想面向西方国家（比如美国）客户。
不关怎样，在开始的时候，还没有信誉的情况下，找客户可能不是很容易，即使你有很
好的技术。
在钱确实可以到位的情况下，我觉得你或许应该先组建一个团队。不管自己能力多强，
做这种公司也不是一两个人可以做好的，而是需要一个合得来的 team。最重要的，
你可能需要找到合适的 partner 有能力为你在美国找到客户渠道。即使如此，我觉得
如果两年内公司能够开始正常运转，就算成功了。
一步一步来，脚踏实地最重要。愿你成功。 |
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m****m
发帖数: 395 | 42 求审稿机会，膜蛋白、不可溶性蛋白、可溶性蛋白，X射线晶体衍射、核磁共振，结构
生物学、蛋白结构与功能、蛋白表达和纯化技术
站内联系，多谢！！
邮箱： [email protected]/* */ |
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l****n
发帖数: 445 | 43 南大出来的穷小子们，大都染上了两个病：理性和理想主义，甚至执拗地把她们带到了
很不适合的领域-爱情。一篇风花雪月的文章也会不由自主的变成了论文的格式，看客
们自当谅解。
晶体生长里有一个方法叫‘区溶发’，是利用温度梯度将杂质去除的方法。其中的关键
在于晶体有趋于完美的热动力学基础，晶格的结构使得杂质被变得不受欢迎，吉布斯自
由能总是趋小。
爱情的自由能极难用公式表达，理论上讲也跟结构有关。我们也可以假定好的结构是取
得高纯度爱情必要条件。
首先是合理的价键结构合理，由于爱情势能的特殊性，我们通常只考虑双原子结构。主
要方面有：
1. 性的和谐和完美。一百年前敢于把这个因素归于第一的人早已经成名了，其
中包括D.H.劳伦斯【1】。最近的研究发现，好的感情这一因素反而占少，而许多失败
的感情都由此而起。严格的相关统计分析，还有待进一步研究。
2. 思想上的沟通与理解。鸡同鸭讲或者talk to a rock是使原子游离的重要原
因。其范畴包括情感，生活，事业上的理解，包容，支持。越能从彼此的交流当中获得
认同，取得动力，更深层次的认识问题，创造性的解决问题，两个原子... 阅读全帖 |
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s******t
发帖数: 1956 | 44 英国《每日电讯报》 11月18日的报道说，Michael Kirby法官用一年时间访问了一批从
朝鲜逃离出来的人，据此撰写出一份有关朝鲜政府侵犯人权的372页报告。他说，自己
当法官已经很多年了，自认为已修炼成了一幅不为犯罪情节所动的铁石心肠，但“脱北
者”所讲述的那些暴行还是使他好几次禁不住流下了眼泪。他个人认为朝鲜政府最为骇
人听闻的侵犯人权暴行中包括 “种族纯化”行为。致力于保护朝鲜人“种族纯净性”
的平壤当局不能容忍国内有朝鲜人和其他种族的人生下的孩子，特别是那些朝鲜女子与
邻国中国的男子生下的孩子。一名目击证人说，他看到有朝鲜官员将一名被从中国遣返
回的女子刚刚生下的婴儿放进一个桶里带走，这些官员说，这名婴儿由于血统不纯，不
配活下去。 |
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s****r
发帖数: 736 | 45 地点在NY/NJ交界靠NY侧， 职位是senior scientist或更高（根据经验背景），主要从
事蛋白或聚糖纯化。
职位开放还没有公告，感兴趣的校友私信我。 |
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s****r
发帖数: 736 | 46 地点在NY/NJ交界靠NY侧， 职位是senior scientist或更高（根据经验背景），主要从
事蛋白或聚糖纯化。
职位开放还没有公告，感兴趣的校友私信我。 |
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f*******s
发帖数: 3 | 47 请大侠推荐几本经典的蛋白表达/蛋白纯化的教材.
多谢了先!!!! |
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z*******g
发帖数: 12 | 48 准备从细胞里提取MicroRNA做Microarray。
先用Trizol（Invitrogene）提取总RNA后，请问还要用什么方法纯化？
请问哪个公司的kit比较好用？
谢谢！ |
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l*********g
发帖数: 41 | 50 我每次纯化都是从平板上挑一个克隆，所以从不保留种子，所以那次得到了蛋白也没有
种子：（ |
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