e*n
发帖数: 1511 | 1 什么研究啊？
给个link。
力上来讲可能没有太大的差别。就像前一阵子有动物园的黑熊生病之后把体毛退掉了很
多，但是也保留了一小部分头上的毛。原因可能是细菌或病毒感染。如果这些细菌或病
毒的基因最后嵌入到宿主的基因里面去，这个退毛就会被保留并遗传下去了。前一段时
间有研究说人类的基因里有很多片段是来自于微生物的。可能某些古猿因为这样的原因
发生基因突变，就导致现在人不长体毛但是长头发了。只是个猜测。不过如果仔细研究
人体里控制毛发生长的基因，比如对比正常人、猩: 伞⒎底娴拿酥涞南喙鼗颍
蛐砟苷业饺死嗤训籼迕脑颉 |
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q****2
发帖数: 208 | 2 目前在研究的蛋白中间有个flexible loop，如何做突变才能把这个flexible的linker
变成刚性（Rigid）的呢？ 谢谢 |
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q****2
发帖数: 208 | 3
除了delete掉这个loop，应该对哪些氨基酸突变呢？谢谢了 |
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p******h
发帖数: 68 | 4 相同上样量的wt蛋白和突变一个活性位点的该蛋白，做western blot，显色会有差异么？
有遇到过这样问题的么？ |
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g*********r
发帖数: 9366 | 5 只要你这一个aa不会影响抗体和蛋白的结合，就没事
（好像等于没说啊，呵呵）
我不是研究抗体的，但是觉着现在的特异性抗体， 应该不会被一个点突变影响结合吧
么？ |
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q*****d
发帖数: 445 | 6 NMD，是什么意思呀？我的启动子和基因的ORF部分完全正确，就是TAA之后的终止子部
分有几个突变！不知道会不会影响蛋白的表达和活性，还望高人给指点一下！多谢 |
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a****o
发帖数: 1786 | 7 应该不会影响
担心的话，把它突变回去不就行了，挺容易的 |
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g*****n
发帖数: 241 | 8 我研究两个基因（a和b），各自的null mutant都有共同的表型X,但是penetrance很低
（小于10%）。Null mutation的双突变致死（synthetic lethal），但是a和b的各自的
weak allele的组合不致死，但是导致的表型X的penetrance达到了70%。请问该怎么解
释啊？
PS: a和b都是membrane receptor，有各自不同的ligand和signaling pathway，但有研
究表明它们可能可以形成co-receptor，但是ligand和signaling pathway未知。
谢谢 |
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o******n
发帖数: 511 | 9 我们想突变一个基因的一部分,最好是能像cut and paste那样,把这部分切下来,换一块
放进去,请问有什么办法做到吗? |
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o******n
发帖数: 511 | 10 我们想把一个细菌的某个基因突变一部分，然后把别的细菌的相对应的基因片段插进去
看有什么变化没 |
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s********n
发帖数: 2939 | 11 QuikChange,Agilent的kit，作定点突变的经典，如果是小片段的置换没问题，但片段
太大效率就会很低。 |
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K*F
发帖数: 120 | 12 如果我理解的没有错的话，lz应该是想做基因组上的基因突变，我想应该做同源重组吧
。那就自己构建一个热敏质粒，然后转化到细菌里面去做交换，最快一个月做出来吧。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 这个还是有差别的，比方说别人弄不好想分开mRNA sequence 和蛋白质的作用呢？
话说回来，难道没有什么奇怪的药品，可以导致tRNA和密码子的识别出现大规模
的差错，从而导致胡乱合成多肽么？ 这个在理论上看起来蛮可行的嘛。
或者，弄一个核糖体上的突变，导致核糖体不检查tRNA 和密码子的符合程度，
应该也可以呀？ |
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e*****t
发帖数: 642 | 14 知道一个mRNA snp和它在genome上的位置。如何知道编码的蛋白突变位点？genome
browser，ensembl或者ncbi应该都行，但是看了半天没看出来。高手帮帮忙 |
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l******n
发帖数: 520 | 15 好像有个online程序可以把你的DNA seq map到amino acid seq上
然后看你的突变点处于intron还是exon，对翻译产物有无影响一目了然
其实也可以写个perl |
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v**p
发帖数: 15 | 16 请教大家，把一个蛋白其中的一个氨基酸进行点突变之后，western检测的时候发现分
子量大了20KD左右，有可能是啥原因？ 测序没有问题，抗体也能识别。
谢谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 18 这个就不像是posttranslational modification了，否则至少能看到主带的。
可能就是因为突变的氨基酸是带电的，所以改变了蛋白结合SDS的性质，导致
在胶里跑起来不一样。
要确认这个的话，把纯化的蛋白送去飞一下质谱MALDI-TOF看看真实分子量到底
有多大 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 19 嗯，质谱看的分子量才靠谱，跑胶只能毛估估的。
还想到一个可能，是不是这个质粒上出现了读码框位移突变啊。不过那样的话好像抗体
应该不太可能识别。还是做个质谱先确认一下吧，比跑胶快多了。 |
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V***b
发帖数: 3419 | 20 有可能是糖基化了。你说说突变了什么，周边序列是什么。 |
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s*****r
发帖数: 223 | 21 我搭车问一个，磷酸化的功能。
我做的一个蛋白，正常情况下在核内（RNA/DNA binding protein)，我诱导细胞凋亡后
，它跑到细胞质，并且磷酸化(ser/thr)(大概10KD左右）。现在知道这个蛋白突变会引
起凋亡。
我现在在设计实验，想知道这个磷酸化的功能意义。
我是新手(应该多读点文献），
不知道磷酸化，1。跟蛋白的降解是否有关系？
2。磷酸化RNA/DNA binding protein 的功能关系？
3。其它还有啥可能
谢谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 他这个貌似是用recombinant DNA 作的，应该不存在这个剪切的问题吧？
就算不小心引入突变后把原来的cDNA 变成了intron出现了剪切，也应该是
被剪的更小.
mRNA |
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b*****l
发帖数: 9499 | 23 我是在猜，会不会因为这个突变导致了 post-transcriptional modification 的不同
，比如说某个片段在 w.t. 的 mRNA 中被 splice 掉了，而在 mut 里则没有。估计 lz
说的 sequence 没问题是指 PCR 了一下 mut 点附近的位置的 mRNA？
另外一个可能性就是 post-translational modification。所以建议在 E.Coli. 里重
复一下 mut vs w.t. 看一看。
当然了，最直接的方法是用 MS 做个 protein sequencing -- 这个俺就更不熟了。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 24 我之前也遇到过，不过是在E. coli里表达的蛋白，单个氨基酸突变导致蛋白变大很多
（30 kDa，大概double），SDS-PAGE观察到的，没做western，不是主要问题就放一边
了，现在想起来，还是没想通为什么。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 25 呵呵，的确是这么说，只是做了这么多的突变只发现这样一个例外的确是觉得挺奇怪的。 |
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v**p
发帖数: 15 | 26 谢谢大家的热烈讨论，这几天比较忙，所以没有上来
情况是这样的，我是把R突变成S，这个蛋白的结果现在还不知道，但是这个位点据坐结
构的合作实验室说很可能与该蛋白形成2聚体有关系。 |
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l*****m
发帖数: 98 | 27 RT-PCR后酶切,产物2.3kb,跑胶后提纯,浓度很低(5ng/ul).载体酶切,跑胶后提纯(15ng/
ul).连接一个小时,转化.有两个菌.其中一个菌不对.另外一个有一个突变.pcr产物测序
没有问题.请问怎么解决?谢谢. |
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w******n
发帖数: 767 | 29 PCR可以检测单碱基突变，算比例，我想可以用realtimePCR,但是可能误差很大。 |
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w******n
发帖数: 767 | 30 PCR可以检测单碱基突变，算比例，我想可以用realtimePCR,但是可能误差很大。 |
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l******g
发帖数: 1623 | 31 用COLD-PCR最低监测过0.1%含量的突变，你这个估计要用deep sequencing |
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j*****9
发帖数: 716 | 32 在一遗传病大家系中先linkage定位，（前段时间出了一篇GWAS也是这段区域，没
有明确基因）然后在候选区域内通过exon sequencing找到两个错义突变（分属两个不
同的基因），都跟疾病共分离。两个基因跟疾病关系的研究文献都不多，其中一个基因
的功能目前还不太清楚。请教各位，如果不做功能研究，除找散发病例做大规模筛查之
外，有啥其他更好的方法确定到底哪一个是致病基因？谢谢！ |
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c****d
发帖数: 501 | 33 测序以后发现一个点突变
如果不想重新做构建的话
有什么办法可以correct it？
谢谢啦 |
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b******s
发帖数: 1089 | 34 做cloning，我觉得要是有问题，干脆重做。要是只是插入片段上有突变，重新扩增，
酶切，ligation也不算麻烦。一时偷懒，下面的步骤可能麻烦会更多，经常到最后还要
重新来过。 |
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w******2
发帖数: 64 | 35 直接在突变位点设计引物overlapping. 用保真酶pcr, DapI 消化PCR产物， 转化， 挑
克隆测序。 |
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e**r
发帖数: 1144 | 36 Hela之类传了很多年的细胞系
与最初分离时相比是不是会有很多突变？ |
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b****r
发帖数: 17995 | 37 有什么性状不是由基因突变引起的？这题目看着就特民科 |
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g*****n
发帖数: 241 | 38 谢谢回复。
如果是两个null mutant的话，4代表同一个，1代表parallel，但我这里说的情况是两
个weak allele.
我的课题有一个基因的null allele是死的，所以没法做双突变 |
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g*****n
发帖数: 241 | 39 谢谢诸位同僚的探讨，不是我不肯说细节，而是因为这个问题属于经典孟德尔遗传学里
面非常常见的双突变分析（不包括数量遗传学），属于generic question。即使我告诉
你们细节（比如我研究的phenotype属于cell migration defect），对于我问题的解答
帮助并不大。
我知道如何解释其中的一种情况，就是当两个hypomorph导致synergistic effect （
strong phenotype/penetrance），表示这两个基因在同一个pathway。
Ex: http://wormbook.org/chapters/www_geneticenhancers/geneticenhancersfig2.jpg
我这次问这个问题其实是想了解一下如果出现其他情况，该如何解读实验结果。
无论如何，还是很谢谢大家热心的讨论和建议。 |
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b******n
发帖数: 4225 | 40 我觉得应该没问题，关键是引物设计要合适
你这4个总共才8bp，就算全突变了也不是什么大事
关键还是要引物 |
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B****w
发帖数: 48 | 41 RT
我有一个长3KB的转录因子，中间的1000-2000是DNA binding domain。我想对中间
的1000-2000 DNA binding domain用PCR构建突变体库,两端的序列（1-1000和2000-
3000）保持不变。不知道有什么好办法？
谢谢！ |
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f**u
发帖数: 346 | 42 不是高人，试着回答一下你的问题。
heterozygous有表型其实就是dominant，你说的dominant lethal的突变一般是拿不到
的，因为果蝇死了。如果要有dominant visible phenotype的话，有很多。 |
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g*****n
发帖数: 241 | 43 我做遗传但不做果蝇。
你如果要在别人发表过的论文或者数据库找，就去找 dominant mutation （比如
dominant-negative和gain of function）.
如果你是想自己做突变筛选，我觉得直接从F1里面找有表型的，这种往往是dominant
mutation |
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P**y
发帖数: 337 | 44 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: Pocy (皛卌), 信区: WaterWorld
标 题: 自闭症是基因突变造成的
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Feb 1 01:41:36 2014, 美东)
比如 T-Brain 1转录因子蛋白等，导致杏仁核出问题，这不是大妈们拍拍脑袋就可以确
诊，更与逻辑无关。
有些买买提的ID坚持认为自闭症是地沟油喝多后引起的，这种看法暂时没有被大部分科
学家认可。 |
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a*****t
发帖数: 288 | 45 这个测铁方法可以区分外膜和周质以及细胞内的铁吗？
有没有可能这个突变虽然取消了iron transport 功能但是iron 还是被受体结合富集到
外膜上。 |
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e********r
发帖数: 147 | 46 我脚着好象不应该会是这样。这个突变使整个蛋白都没了，这样的话，它也就不能把铁
吸附在表面了吧。 |
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j****n
发帖数: 3370 | 47 啥突变？为啥不直接ko？
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6 |
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o*******a
发帖数: 242 | 48 这个铁转运蛋白是在细菌的细胞膜上还是在宿主的细胞膜上？
怎么是反的呢， 一点都没反。突变使得更多的铁转运进细胞，比正常情况多了。但不
能说它存在时抑制细菌对铁的吸收，或者说反向运铁。 |
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q******g
发帖数: 3858 | 49 到底是某个氨基酸突变？还是把基敲除？
如果是前者，可能是转运活性提高了。
如果是后者，可能是某种补偿机制，引起其他转运蛋白的表达提高。 |
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y**q
发帖数: 570 | 50 如果我从ncbi search出突变基因sequence，想copy 还有mutant gene sequence 片段
前后 500bp 到相关primer design soft website 运行，找找出primer design
software 推荐 primer. 请问相关 primer design software link 推荐， 多谢！ |
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