y**q
发帖数: 570 | 1 根据项目需要，要设计突变基因的 primer；本人在primer design方面纯属外行，请教
，如果知道基因的突变点，到哪个相关网站可以search到这个突变基因的sequence？
有什么好的建议，请指教！ 多谢了！ |
|
e********r
发帖数: 147 | 2 我们研究一个病原细菌的蛋白酶A，发现它能把一个受体B的信号识别区降解掉。A能够
切割B的生化证据和蛋白互作的证据都是明确的，已经拿到手了。
但遗传分析不知该作如何解释，请大家看一看：
事实一：蛋白酶A突变以后会使细菌致病力下降
事实二：受体B突变以后也会使细菌致病力下降
结果我们在蛋白酶A突变体里过表达受体B，细菌致病力照理说恢复一些是正常的，可这
个菌株的致病力下降得更严重！
做A和B双突的结果还没出来，所以暂时木有更多的提示。
这个我怎么解释，或者用什么样的model，才能把遗传数据和生化数据捏到一起呢？ |
|
v*******e
发帖数: 11604 | 3
突变是相当于去掉这个蛋白的功能，但是基因表达并不应该就一定低，失去功能并不一
定是依靠表达低，也可以是因为蛋白的某些变化使得它的某些基团的功能丧失，比如磷
酸化和去磷酸化等。如果P53突变，但是它的promoter，regulator并没有突变，我们并
不能指望它的表达会降低。 |
|
p*******1
发帖数: 495 | 4 实验室一直用Unmarked Mutagenesis（using Flp Recombinase）做定点突变，用Tn5做
随机突变。
不知道这几年有什么最新的技术可以采用来创建细菌突变体，CRISPR技术就不用提了。
谢谢了先！ |
|
l****a
发帖数: 4017 | 5 可怕。刚看到中文版的，贴上来吧。
【环球网报道实习记者 赵朔苇】据澳大利亚新快网8月13日报道，日本研究人员称，福
岛核电站泄露的核辐射已造成了国内大量的蝴蝶品种出现畸形。科学家还怀疑其它物种
是否也已基因突变。
报道称，研究人员分别在核泄漏事件后的数周和数月内收集了几百只蝴蝶，并发现
超过10%的蝴蝶已变畸形，其翅膀变得异常小。这些蝴蝶繁殖出来的第二代，其畸形率
大增至33%，甚至有一些蝴蝶过早死亡。
科学家在英国《自然》期刊上发表文章称，相信核泄漏是引起蝴蝶基因突变的原因
。科学家们还呼吁对其它动物进行进一步研究，看看是否也有基因突变的情况出现。
据悉，日本福岛核电站于2011年3月11日因地震发生泄漏。2011年4月12日，日本政
府宣布，对福岛核电站的核泄漏等级评定为7级。这意味着它达到了与切尔诺贝利核事
故同样的等级，属于最高级别。 |
|
A*******e
发帖数: 12486 | 6 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: Augustine (hehe), 信区: Military
标 题: 不要怕基因突变
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Mar 20 22:50:39 2010, 美东)
总是要变的，突变无非变得快一点而已 |
|
l**********e
发帖数: 3149 | 7 可能这个问法太简单了，似乎渐变和突变的例子都有。可以说民主共和的思想从古罗马
的元老院，到英国的议会制，到法国大革命和人权宣言，再到美国的独立宣言，这是一
个渐变的过程。
然而比如韩国，比如台湾，比如日本，这些亚洲国家的民主制度的建立仿佛与西方国家
相比简直是发生在一夜之间的事情，而且这些地区在现代民主制度建立之前似乎也没有
经历很长时间的启蒙运动，所以民主制度在一个国家的建立似乎也可以不经历长时间的
开启民智的过程。
渐变？还是突变？ |
|
c***s
发帖数: 70028 | 8 长8条腿的猪 南川畜牧兽医渔业局供图
在南川福寿乡大石坝村五社唐勇修家的猪圈里，有一只8腿小猪，才出生5天，已成为远近闻名的大明星。“昨天大约25个人过来给小猪拍照、摄像。”63岁的老唐兴奋地说。
老唐介绍，8腿小猪出生于8月2日早上8点左右，母猪共下猪崽8只，它大约是第3个出来，刚出生时没有发现异常。他晚上回家，老伴告诉他：“猪生了一只有6条腿的怪物。”老唐跑到猪圈，拨开小猪腿一看，更吃惊了，竟然长了8条腿！
“这条小猪看起很正常，吃了几天奶，长大了不少。”老唐说，“肚子上前面两条腿很细，约三四厘米长，悬在腹下，后面两条腿要大些，约七八厘米长，拖在地上。脚里是骨头，但不能走动。”他不知道是否与身子骨相连，“没敢摸，怕摸坏了。”
这8条腿的小猪，老唐当成奇物，“我想把它喂大。”老唐说。
母猪为何会产出这样的猪崽？养了几十年猪的老唐也不清楚。他说，母猪是两年前在南川畜牧站买的，今年是第二胎，以前没下过这样的猪崽。平时母猪吃的是家里剩饭剩菜，以及玉米、土豆、青草等农作物，没有喂过饲料。
重庆畜牧科学院、养猪科学研究所所长郭宗义说，小猪长有8条腿并长在肚子下，至今没见过。常见5只脚的猪，但多... 阅读全帖 |
|
s*******w
发帖数: 2257 | 9 张洁平：佔领香港笔记──从广场到马路的72小时突变
(2014-10-02 07:23:20) 下一个
来源:天下杂志
一切都发生得太快，打乱了所有严密佈局的计划，无论是起事者的，还是管治者的。而
一切又发生得太自然，像一场压抑已久的高烧，淋漓尽致。
香港人大概从来没有想过，有一天自己会去佔领全城的马路。争取民主普选是一场长达
30年的谈判，而如果争取失败，则有一套按部就班的抗命行动──这大概才是香港人做
事的方式──在9月28日之前，他们自己也这麽认为。
「佔领中环」运动酝酿了整整20个月。从去年一月，法学教授戴耀廷在报纸上提出构想
开始，历经舆论预热、民主商讨、公民投票，先礼后兵，直到全国人大真的否决了香港
真普选的希望，才启动行动，预备要「佔领中环」。如果行动按原计划进行，这恐怕会
是世界历史上姿态最卑微的「公民抗命」：我们讲尽道理，不得不「抗命」，「抗命」
的方式，不是最初构想的「瘫痪金融中心」，而是选择在节假日，以对公共秩序影响最
小为前提，坐在马路中间（这条马路节假日会被批准为行人专用区），等待被捕，用自
我牺牲，结束整场运动。
「佔中」核心团队的成员曾私下告诉我，在人大决... 阅读全帖 |
|
c***s
发帖数: 70028 | 10 陈从焕在家玩玩具。
近日，陶女士在自己的朋友圈里发了一组照片。照片中的男孩有着一双大大的眼睛，长长的睫毛，额头前庭饱满，笑起来好看极了。不过，照片下的评论却出奇的一致。“这哪来的洋娃娃？”“谁家的混血儿？”……类似这样的话，从出生开始，就伴随着照片中的主角陈从焕成长。
班级里来了一位“洋娃娃”
陈从焕现在是合肥市竹溪小学四年级的一名学生。开学第一天，陈从焕就听到了有同学议论他。 “有同学说我是俄罗斯人，法国人，觉得我跟他们长得不一样。”陈从焕每次都要辩解一下。尽管4年过去了，陈从焕一个人上学的时候，还是会听到有大人说他长得像外国人。
不过，这种声音一直伴随了他十年。陈从焕的妈妈陶女士告诉记者，孩子刚出生一个月，母子二人就回到了无为老家的小镇上。
见过孩子爸爸的就会问孩子，妈妈是不是外国人；看过陶女士的人，便会拉着陈从焕问他爸爸是不是外国人。
“基本上，小镇上见过我儿子的人都会说他是混血儿。”陶女士称解释多了，也觉得无所谓了。现在只要有人问起来，陶女士都只是微微一笑。
小帅哥还是位淘宝达人
昨天下午，记者在陶女士的家中见到了今年10岁的陈从焕。
相比那一组照片，小从焕显然长大了不少。不过... 阅读全帖 |
|
o***s
发帖数: 42149 | 11 本月8日，记者来到万州区长岭镇老土村，采访了头大如脸盆的男子夏元海。视频播出后，夏元海的遭遇受到社会各界关注。
昨日，52岁大头叔叔夏元海和家人来到新桥医院整形外科做检查，他的大头之谜能否就此揭开呢？
病后很少和人交流
记者看到，夏元海的头跟中号洗面盆差不多大。由于颧骨和下巴凸出明显，夏元海的脸就像蘑菇，很像神话中的南极仙翁。因为鼻孔太小，他一直张着嘴呼吸。
夏元海的哥哥夏元昌说，弟弟小时候相貌同常人一样，身体健康，因为聪明，是家里6个兄弟姐妹中唯一读初中的孩子。
13岁那年，他的脑袋开始一圈一圈长大，脸开始变形，之后越来越听不清别人说话，语言表达也受影响。“上课听不清老师说的话，初二就辍学了，也是很可惜。”夏元昌说，由于家里穷，弟弟从未到医院检查过。
当地村民告诉记者，夏元海耳朵不好口齿不清，村里人很少跟他有深入交流，他更喜欢一个人在公路上散步。“他不会走太远，连长岭镇都没去过几次。”一位女邻居说。
乐意配合他人拍照
“我的天，从没有看过这种……”昨日，夏元海走在人群里，一些人吃惊地议论，拿起手机拍他。视力模糊的夏元海安静地站直，等别人拍完照才跟随医护人员指引继续走。
“他从没有和村... 阅读全帖 |
|
d*********t
发帖数: 4393 | 12 我觉得人类进化退掉体毛可能是一个随机的基因突变的过程，退不退体毛从演化的压力上来讲可能没有太大的差别。就像前一阵子有动物园的黑熊生病之后把体毛退掉了很多，但是也保留了一小部分头上的毛。原因可能是细菌或病毒感染。如果这些细菌或病毒的基因最后嵌入到宿主的基因里面去，这个退毛就会被保留并遗传下去了。前一段时间有研究说人类的基因里有很多片段是来自于微生物的。可能某些古猿因为这样的原因发生基因突变，就导致现在人不长体毛但是长头发了。只是个猜测。不过如果仔细研究人体里控制毛发生长的基因，比如对比正常人、猩猩、返祖的毛人之间的相关基因，或许能找到人类脱掉体毛的原因。 |
|
O*******d
发帖数: 20343 | 13 任何进化都是基因突变。 突变后的基因如果有生存优势，就会在自然选择中扩散。 |
|
p****t
发帖数: 11416 | 14 很多时候基因型和表现型的关系非常复杂，因为基因要起作用，不仅和其它
基因的表达有关，也和环境有关，还和基因的表达顺序和水平有关
就好像癌症，至今已经知道很多基因突变可能引起癌症，但是没有人能确定
地说某个、某几个基因突变就一定会/一定不会致癌 |
|
d*********t
发帖数: 4393 | 15
同意。想补充的是，我觉得有些突变可能仅仅是无害的，也可以在演化中扩散，也许不
如那些非常有利的基因扩散的快，但至少可以保留下来。我觉得人类裸猿的基因可能就
是一个不一定有利、但是无害的突变，因为当时在非洲，比较热，保暖的压力不大，后
来古人类智力发展了，气候冷了可以穿些东西到身上，没有毛发也能生存。 |
|
l**********r
发帖数: 4612 | 16 同源染色体的基因重组本是用于降低有害突变保留的几率、维持遗传完整性的，但Y染
色体因不能与X染色体发生重组，被认为容易发生损毁而导致退化。人类的Y染色体在其
演变的过程中丢失了原本拥有的1,438个基因中的1,393个(还剩下45个，换句话说97%都
已经消失了，是当之无愧变化最大的染色体，而不是唯一不变的)，约每一百万年丢失4
.6个基因。据推算，若Y染色体仍以这样的速率丢失基因，它有可能在一千万年后完全
丧失。作为对比，1号染色体包含基因数量最多，达3141个
Y染色体的出现是偶然的（~1.7亿年前的一次基因突变），Y染色体的消失目前看来是必
然的。人类包括其它生物不因Y染色体的出现而出现，也不因Y染色体的消失而消亡 |
|
n******d
发帖数: 35 | 17 【 以下文字转载自 ChinaNews 讨论区 】
发信人: littlecookie (小点心), 信区: ChinaNews
标 题: 老百姓的思想意识是完全可以突变的
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Aug 2 23:56:14 2011, 美东)
世界上民主化的过程有人分析过了，有一些国家是渐变，另外一些是突变。
渐变的国家启蒙运动时间长，革命流血多，那些国家和民族经历了整个民主制度的探索
期，人头滚滚，代价巨大。巨大的代价换来的是民智的开启和对民主的广泛接受，人们
之间达成了一种妥协，这种妥协即是公民与政府之间的妥协，也是每个人自身利益与其
他人利益的妥协。
二战后更多的民主国家的诞生，靠得是外来势力的干预和本国精英的引导。本国多数老
百姓自身并没有参与到民主化的过程当中，更多的人只是被动地接受了这个结果。靠这
个模式成功的很多亚洲国家，台湾日本南韩，马来西亚，以及最近的越南，局部的冲突
是有的，但大多数老百姓其实是坐享其成的受益者，其思想上并没有经历长时间的启蒙
，也没有参与民主制度的探索。
说有什么样的人民就有什么样的政府，或者具体说，中共专制政权是中国老百姓... 阅读全帖 |
|
T**********e
发帖数: 29576 | 18
't
突变导致残障病患的比例比产生天才的比例要高不知道几个数量级。
如果突变那么好大家都住核电厂边上，每个月照个X光片不是对人类最大贡献？ |
|
m********3
发帖数: 3280 | 19 近日，陶女士在自己的朋友圈里发了一组照片。照片中的男孩有着一双大大的眼睛，长
长的睫毛，额头前庭饱满，笑起来好看极了。不过，照片下的评论却出奇的一致。“这
哪来的洋娃娃?”“谁家的混血儿?”……类似这样的话，从出生开始，就伴随着照片中
的主角陈从焕成长。
班级里来了一位“洋娃娃”
陈从焕现在是合肥市竹溪小学四年级的一名学生。开学第一天，陈从焕就听到了有
同学议论他。 “有同学说我是俄罗斯人，法国人，觉得我跟他们长得不一样。”陈从
焕每次都要辩解一下。尽管4年过去了，陈从焕一个人上学的时候，还是会听到有大人
说他长得像外国人。
不过，这种声音一直伴随了他十年。陈从焕的妈妈陶女士告诉记者，孩子刚出生一
个月，母子二人就回到了无为老家的小镇上。
见过孩子爸爸的就会问孩子，妈妈是不是外国人;看过陶女士的人，便会拉着陈从
焕问他爸爸是不是外国人。
“基本上，小镇上见过我儿子的人都会说他是混血儿。”陶女士称解释多了，也觉
得无所谓了。现在只要有人问起来，陶女士都只是微微一笑。
小帅哥还是位淘宝达人
昨天下午，记者在陶女士的家中见到了今年10岁的陈从焕。
相比那一组照片，小从焕显然长大了不少。不过，... 阅读全帖 |
|
c***l
发帖数: 2490 | 20 一旦发生突变，鳖国财富必定被别有用心的人席卷一空，老百姓一夜回到解放前。
共产党也不是不能批评和反对，但是，想以突变方式结果共党的，必定是鲸吞人民财富
的既得利益者——只有结果共党，他们的财产才能洗白亦或合法化。 |
|
t*d
发帖数: 8340 | 21 鳖国突变的可能性太多了，二杆子朝鲜一个核弹扔到北京也不是没可能。
关键看是什么类型突变，是党内政变，军事政变，群众暴动，地方部队起义，中美战争
，还是领导人突然死亡导致权利层真空各个地方和派系群雄割据？
每一种情况不同，结局自然也不同。 |
|
|
V*****2
发帖数: 7930 | 23 单个细胞突变成永生细胞，是有可能出问题。但是如果是精子或者卵子突变，形成一个
永生的个体呢？ |
|
A*****1
发帖数: 1029 | 24 发生突变很正常，但谁能说突变后传染性加强？
这个结论一定是谣言 |
|
发帖数: 1 | 25 说突变的赶紧抓起来
不要乱逼逼。。。突变要拿出证据 等着看paper |
|
v*******e
发帖数: 11604 | 26
突变各种都有，传染性强的就传播开了，被发现。所以一般都是突变后传染性加强，毒
性减弱。 |
|
p*****o
发帖数: 302 | 27 从病毒突变来说，种类越少越说明是源头，后面才突变出好多种 |
|
发帖数: 1 | 28 武汉／湖北的采样率太低
得不出已经突变的结论， 可能所谓的突变，武汉本来就有，只是没有测到 |
|
l**********e
发帖数: 3149 | 29 可能这个问法太简单了，似乎渐变和突变的例子都有。可以说民主共和的思想从古罗马
的元老院，到英国的议会制，到法国大革命和人权宣言，再到美国的独立宣言，这是一
个渐变的过程。
然而比如韩国，比如台湾，比如日本，这些亚洲国家的民主制度的建立仿佛与西方国家
相比简直是发生在一夜之间的事情，而且这些地区在现代民主制度建立之前似乎也没有
经历很长时间的启蒙运动，所以民主制度在一个国家的建立似乎也可以不经历长时间的
开启民智的过程。
渐变？还是突变？ |
|
D**s
发帖数: 6361 | 30 美国移民政策突变 高技术移民受影响损失惨重
2015年10月02日 来源：中国新闻网
中新网10月2日电 据美国侨报网编译报道，美国国务院的政策突变使得成千上万的
高技术人才移民无法成为永久居民。他们本该在10月1日就能够申请这项身份。根据一
项诉讼请求，他们中很多已经缴纳了高昂的律师费用和医疗费用。受影响的移民多来自
于印度和中国，很多都拥有高等学历，并在顶尖技术公司或医药公司工作。
据美联社(AP)9月30日报道，据称，他们每人都已经为此花费了几千美元，加起来
至少有200万美元。他们说政府在感情上戏弄了他们，他们因为此事还取消了旅行，没
能参加婚丧仪式，耽误了工作，但最终一无所获。
美国国务院9月9日发布了一项公告，详述了在美的哪类人能够在周四提交绿卡申请
文书。这项举动是为了响应去年奥巴马总统的行政命令，争取改进并简化移民制度。
这项公告令许多正在申请工作签证的人激动万分。此举预计将有助于整合常年积压
的来自中国和印度的移民的申请。许多人立刻开始为此作准备，他们整理了自己的文书
，雇佣律师，进行体检并接种疫苗。
但是在9月25日，政府在没有解释的情况下修订了那项公告，严重缩减... 阅读全帖 |
|
s********0
发帖数: 4152 | 31 貌似绿巨人 = =
发信人: hunzaimeiguo (showmethemoney), 信区: Texas
标 题: Re: Houston饮用水遭放射物质污染多年，饮用可诱发DNA突变
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 16 00:11:16 2010, 美东)
基因突变。。。看来我要变身了。。。不知道能变成什么。。。 |
|
T******e
发帖数: 18290 | 32 很有科学道理。基因突变有恒定速率吧，过了三十岁，基因突变过的几率可能有99%。 |
|
a***e
发帖数: 829 | 33 偶用的是two-step PCR, 把要突变的点设计在一对互补的引物上，最好在中间，第一步用
normal ５' primer+mutant 3'primer以及mutant 5'primer+normal 3'primer分别得到基
因前段和后段的PCR产物，第二步用正常的5' and 3' primers 做引物，以第一步PCR的两
个产物为模板，得到含有突变的全长DNA，再clone到质粒上拿去测序鉴定就行乐。 |
|
v*********i
发帖数: 40 | 34 要别人一个拟南芥突变体；对方要求签一个协议。
协议包括：不用于商业用途；不转给第三方；要用这个材料发表论文的话需要提前30天
把论文手稿给对方。
前两条都很正常；最后一个要求是不是比较奇怪啊？还是要突变体都要签这个？
以前没有要这种材料的经验，请教一下。
谢谢。 |
|
d*********t
发帖数: 4393 | 35 我觉得人类进化退掉体毛可能是一个随机的基因突变的过程，退不退体毛从演化的压力上来讲可能没有太大的差别。就像前一阵子有动物园的黑熊生病之后把体毛退掉了很多，但是也保留了一小部分头上的毛。原因可能是细菌或病毒感染。如果这些细菌或病毒的基因最后嵌入到宿主的基因里面去，这个退毛就会被保留并遗传下去了。前一段时间有研究说人类的基因里有很多片段是来自于微生物的。可能某些古猿因为这样的原因发生基因突变，就导致现在人不长体毛但是长头发了。只是个猜测。不过如果仔细研究人体里控制毛发生长的基因，比如对比正常人、猩猩、返祖的毛人之间的相关基因，或许能找到人类脱掉体毛的原因。 |
|
g**********t
发帖数: 475 | 36 我记得蛇没了胳膊也是单基因突变？
力上来讲可能没有太大的差别。就像前一阵子有动物园的黑熊生病之后把体毛退掉了很
多，但是也保留了一小部分头上的毛。原因可能是细菌或病毒感染。如果这些细菌或病
毒的基因最后嵌入到宿主的基因里面去，这个退毛就会被保留并遗传下去了。前一段时
间有研究说人类的基因里有很多片段是来自于微生物的。可能某些古猿因为这样的原因
发生基因突变，就导致现在人不长体毛但是长头发了。只是个猜测。不过如果仔细研究
人体里控制毛发生长的基因，比如对比正常人、猩: 伞⒎底娴拿酥涞南喙鼗颍
蛐砟苷业饺死嗤训籼迕脑颉 |
|
e*r
发帖数: 103 | 37 有没方法能够大规模突变氨基酸？就想大规模诱导DNA突变一样。 |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 38 大规模DNA突变的一个直接后果难道不就是大规模氨基酸突变么。。。 |
|
m******5
发帖数: 1383 | 39 在做一个大片段大质粒连接 insert是 POI-IRES-DSRED
期中 IRES region有一些突变，请问对此有经验的同志么，这要紧么？ IRES位点突变
后容易引起功能缺失么？
非常感谢！ |
|
V********n
发帖数: 305 | 40 看突变位置，IRES 跟序列和高级结构都有关。即使是点突变也可能对高级结构有很大
影响，造成IRES 活性改变 |
|
v**p
发帖数: 15 | 41 只有一条带， 比正常大 大约20kd的位置，这个蛋白其它氨基酸点突变都很正常，就是
这个突变这个样子的。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 42 磷酸化和降解可以有间接关系，和很多蛋白的结合也可能有关系，还是和
非常非常多的通路都可能有关系， 所以很难直接推测。
一般是把磷酸化的氨基酸突变了，看看会引起什么表型，然后再推测。
可以突变成不能磷酸化的集团，或者把serine, thronine变glutamate 来
模拟磷酸化后的结果 |
|
z*******o
发帖数: 1794 | 43 看看你的模板质粒是不是也是这个突变了，见过好几次，更本不是PCR的问题。
如果懒得重新连接，做回复突变吧，貌似不是很大。 |
|
y***i
发帖数: 11639 | 44 编者按：艾滋病一直被科学家认为是绝症，然而如今却有一名艾滋病人被治好了，而且
是彻底根治了。这位美国旧金山的50岁白人男子，曾经被艾滋病纠缠了整整10年。去年
在德国的一所医院接受治疗，在经过骨髓治疗后，一个由德国三所大学医学部研究人员
组成的七人小组在著名科学杂志《血液》上发表在线论文称，“我们的研究结果证明这
个病人的艾滋病被治愈了”。据纽约时报报道，旧金山市立总医院艾滋病诊所近日称，
蒂莫西·布朗体内再无检测到HIV病毒的记录。这应该是一个激动人心的结果自艾滋病
病毒1981年被发现以来，世界上还从未有任何一位病人被治愈。
艾滋在他体内寄居了10年
奇迹发生在德国柏林的夏洛特医院，故事主角是美国人蒂莫西·布朗。他自从2000年被
查出感染艾滋病后，就一直在这里治疗。他的对手则是30年前被发现之后迅速肆虐全球
，杀死了成百上千万病人的艾滋病。
在布朗治愈前，它已在他体内寄居了10年。在积极的治疗下，艾滋病毒并没有经常找布
朗的麻烦。但不幸的是，在2007年，这个倒霉的男人被确诊为严重的骨髓性白血病。在
两种“绝症”的夹击之下，他几乎失去了生存下去的希望。
艾克哈德·迪尔是布朗的主治... 阅读全帖 |
|
s******s
发帖数: 13035 | 45 有一个很变态的方法，如果你一直要做这样的检测可能有用，
否则你就deep seq吧
这个方法类似的去年好像有一个检查癌症单碱基突变的nature还是
science文章有，为你的改编一下大概是这样：首先PCR把你要的这段
P出来(cycle不要太多), 然后加热退火杂交，因为你的突变型很少，
所以大多数是完美双链，小部分是有一个mismatch的dsDNA. 这个东西
克隆到特定的载体里面，转化有识别mismatch的ecoli. 有mismatch的
就切开修了，顺便把载体里面下游的一个特定结构（比如loop)的致死
或者抗药基因也修掉了；否则不开修，这个转化子活不了。这样，你
spike几个不同比例的control，用转化colony多少做标准曲线就可以估计了 |
|
s******s
发帖数: 13035 | 46 有一个很变态的方法，如果你一直要做这样的检测可能有用，
否则你就deep seq吧
这个方法类似的去年好像有一个检查癌症单碱基突变的nature还是
science文章有，为你的改编一下大概是这样：首先PCR把你要的这段
P出来(cycle不要太多), 然后加热退火杂交，因为你的突变型很少，
所以大多数是完美双链，小部分是有一个mismatch的dsDNA. 这个东西
克隆到特定的载体里面，转化有识别mismatch的ecoli. 有mismatch的
就切开修了，顺便把载体里面下游的一个特定结构（比如loop)的致死
或者抗药基因也修掉了；否则不开修，这个转化子活不了。这样，你
spike几个不同比例的control，用转化colony多少做标准曲线就可以估计了 |
|
z**m
发帖数: 50 | 47 请教版上有没有了解E.coli beta galactosidase结构功能的大牛？目前准备个试验，
需要构建无活性的beta galactosidase突变体做control，因为不是生物背景，查了很
多文献，还是没有头绪，不知道哪些位点的突变或者缺失可以完全abolish beta
galactosidase的活性但是又不影响酶的正常tetramer结构的。有没有哪位大牛可以指
点一下或者提供一两篇类似的文献报道？包子答谢！谢谢！ |
|
h**********8
发帖数: 650 | 48 不好说， 我做的一个蛋白， 某位点也是这样突变。
问题是， 这个位点报道可以磷酸化， 不知道如此突变会影响磷酸化效率么。 |
|
s********8
发帖数: 619 | 49 又测序了一个克隆,目前为止没有突变.看来还是polymerase的问题.
问题是这个基因有2.5kb,还得接着测,但愿没突变了. |
|
