w*p
发帖数: 16484 | 1 实验室检验科的水平太烂，医生跟病人交流的水平也非常烂
《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》（以下简称《规范》），严格进行。
一、HIV抗体检测
HIV抗体检测不同于其他病原微生物的检测，任何错误的诊断，包括假阳性或假
阴性，都会对被检者甚至他人造成重要的影响。因此，HIV抗体检测必须严格按照《规
范》要求，由接受过专门技术培训并获合格证书的技术人员在当地卫生行政部门审批合
格的实验室中进行，整个实验过程应有严格的质量保证体系。
HIV抗体检测分为筛查试验和确证试验，可用于诊断（确定个体HIV感染状况）、
监测（了解不同人群HIV感染率及其变化趋势）及血液筛查（防止输血传播HIV）。筛查
试验根据检测原理不同分为酶联免疫吸附法、凝集法和层析法，可对血液、唾液和尿液
标本进行常规或快速检测。临床用于血液筛查的方法包括酶联免疫试验（ELISA）、免
疫荧光法、化学发光法等，常用的为酶联免疫法（ELISA）。自1985年第一代ELISA试剂
问世以来，随着医学技术的发展，包被抗原已从一代的全病毒裂解物发展为目前以基因
重组和多肽抗原包被... 阅读全帖 |
|
Z*****l
发帖数: 14069 | 2 韩亮的车开到了一处小山坡下，山坡上方就是铁路，四周已经被警戒带围起，警戒带的
一旁摆着一个牌子，写着：“龙番市铁路公安处在此办案，请绕道行驶。”
我下了车，紧了紧领口，环顾四周，都是白雪皑皑。虽然雪下得并不大，但是铁路
附近人迹罕至，所以山坡的植被都已经被白雪覆盖。
我们顺着台阶走到了铁道旁，见几个民警正在一具被白雪覆盖了大部分的尸体旁边
拍照。
“你们来啦。”师兄看到我，很是高兴，脱下手套来和我们握手。
我点点头，说：“怎么回事？”
师兄指着身边一个穿着制服的男人，说：“这是老八发现的。清早，他例行检查他
管辖的路段，发现这里躺着一个人，身上盖了雪，于是他走过去推了推，发现人是硬的
，显然早已死去。所以，就报了警。”
老八是一个黑瘦男人，穿着深蓝色的制服，制服上写着“龙番铁路六段”。
显然，他是负责本路段巡查的铁道维修工人。
我上下打量了这个男人，因为长期从事体力工作，他身材瘦削，但显得精气神儿十
足。即便是在这个大雪纷飞的季节，他也就在羊毛衫外面套个工作服而已。老八的腰间
系着一个工具袋，工具整齐地插在袋子上的每一个明格里。他走起路来，这个袋子随着
步伐上下起伏，在他的臀部拍打着。... 阅读全帖 |
|
c******r
发帖数: 889 | 3 呵呵,庸人自扰.
根本就没有癌症.
有很多癌症检测的marker,阳性时,有必要做全面检查,以排除隐患.假阳性海了去了.绝
大多数marker的特异性和灵敏度都是有限的.从没有只依据某一个biomarker来下诊断结
论的.
比如前列腺癌的一个marker PSA,常被列在诊断依据里.但实际上,这个marker特异性,灵
敏度都不高.PSA marker阳性而没有癌症的不要太多.
这例子就是一个典型marker阳性,而被医生排查,最后没有检出癌症的例子.
自己吓自己.
神迹基本都是这样的.
王永庆儿子鼻咽癌,说是神迹医治了.
仔细一看见证,放化疗一样儿没少.最后归到神迹上... |
|
y***i
发帖数: 11639 | 4 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: sunnyday (艳阳天), 信区: Biology
标 题: Re: 再聊进化论：热运动组装第一个基因 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 9 15:47:45 2011, 美东)
跟那些宗教狂很难讲到一起的，他们知道的其实就是一些中学生物学的皮毛，
却让人哭笑不得的喜欢乱发挥去推导一些超过他们学识的东西。
这么说吧，我从来没有听说过有什么“热运动组装第一个遗传密码/基因的理论”
就是有，也就是某少数人想出来的假说，没有经过生物学界的人用实验证明过，
所以他（BHistory）拿这个来当靶子攻击就是乱弹琴。
第二，进化上的早期基因，其实应该是RNA 编码基因。因为RNA本身就有酶活性，
有足够完成一个基本生命体所需要的基本活性（代谢和复制）。而RNA 本身就是由编码
组成的。DNA 可以看作是RNA 编码的一个稳定备份，所以就成了所谓的基因（基因的本
质就是生物信息的稳定备份体）。
即使在现在的有蛋白质为主的生命体里面，仍然有很多DNA 序列是纯粹用来记录RNA而
和蛋白质完全无关的。
第三，从RN... 阅读全帖 |
|
d*******r
发帖数: 3875 | 5 【 以下文字转载自 ChineseMed 讨论区 】
发信人: dancooper (诚能见可欲而思谦冲以自牧), 信区: ChineseMed
标 题: .经络本质被认识 （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jan 1 05:11:53 2011, 美东)
原地址：
http://njzxhx.blog.163.com/blog/static/10527031720092605857104/
我们认为，经络没有独立具体的解剖结构，它是以其它相关组织结构共同合成而为结构
的。这就像河流一样，是水流的结果，自己本身没有什么河道，碰到黄土，黄土就是河
道的边界，遇见岩石，则岩石就是河道的边界。但共同组成经络结构的相关组织具有一
定的要求，那就是网膜状组织。《内经》经常谓经穴在“分肉之间”，其意非指皮肤与
肌肉之间，而是特指肌肉与肌肉之间的组织，在解剖学的层面上，这些组织中医称作筋
膜，而西医则谓之结缔组织，准确地讲是“固有结缔组织”。结缔组织在体内分布最广
，由组织液、纤维、基质和细胞组成。这些就是构成经络结构的物质。
但是，我们却不能反过来说这些物质就是经络，因... 阅读全帖 |
|
g******d
发帖数: 1774 | 6 http://www.douban.com/group/topic/2331305/
“朱令铊中毒事件”大事年谱
（1973年11月－－2006年4月）
1973年11月24日 朱令（随母姓）出生在北京, 户口本上全名朱令令，因为习惯问题，
一般都称她为朱令。家里有一姐姐吴今（随父姓）。父亲吴承之是上海人，今年66岁，
1959年考入中国科技大学地球物理系，退休前曾任国家地震局高级工程师；母亲朱明新
是吴承之的同班同学，今年65岁，退休前是中国远洋运输总公司高级工程师。
注：网上的一种说法是，朱令家同样具有“高干背景”。对此，朱明新提到一个表弟跟
她开玩笑说，“大舅舅是 高干的尾巴”：“我父亲朱启明曾经参加过一二九运动，‘
文革’前在北京市委工作，‘文革’后平反，在北京市高级人民法院当顾问，没多久就
离休，2001 年去世。母亲退休前是北京一所中学的校长。”
注：据朱家亲友回忆：“姐姐吴今以前的名字是叫吴瑾的，因为上小学入学需要会写自
己的名字，瑾字难写就改为吴今，同时姐姐出生时只有五斤重，吴今是五斤的谐音；妹
妹的名字原来叫朱玲玲，随着姐姐的改名，也改为朱令，意思是今多一点儿。她们姐... 阅读全帖 |
|
b******1
发帖数: 1116 | 7 【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: blood001 (血池子), 信区: NewJersey
标 题: “朱令铊中毒事件”大事年谱 非常清楚 （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Apr 12 20:52:35 2013, 美东)
朱令铊中毒事件”大事年谱
（1973年11月－－2006年4月）
1973年11月24日 朱令（随母姓）出生在北京, 户口本上全名朱令令，因为习惯问题，
一般都称她为朱令。家里有一姐姐吴今（随父姓）。父亲吴承之是上海人，今年66岁，
1959年考入中国科技大学地球物理系，退休前曾任国家地震局高级工程师；母亲朱明新
是吴承之的同班同学，今年65岁，退休前是中国远洋运输总公司高级工程师。
注：网上的一种说法是，朱令家同样具有“高干背景”。对此，朱明新提到一个表弟跟
她开玩笑说，“大舅舅是 高干的尾巴”：“我父亲朱启明曾经参加过一二九运动，‘
文革’前在北京市委工作，‘文革’后平反，在北京市高级人民法院当顾问，没多久就
离休，2001 年去世。母亲退休前是北京一所中学的校长。”
注：据朱家亲友回忆：“姐姐吴今以前的名字是叫... 阅读全帖 |
|
s*****e
发帖数: 970 | 8 2010年2月17日，上海交大医学院附属瑞金医院张济研究员研究组在国际著名杂志
“Cancer Cell”上发表了关于癌蛋白PML/RARα选择性抑制造血特异性转录因子PU.1及其
靶基因的研究文章。该研究以急性早幼粒细胞白血病（又称APL）为研究对象，整合了生
命科学领域内的多种高通量前沿技术，从全基因组水平揭示了异常转录因子阻碍造血分
化、形成血液恶性肿瘤的机制，从而解决了困惑肿瘤领域近二十年来的一个难题：即APL
特异性的融合癌蛋白PML/RARα的形成与造血细胞分化受阻、白血病产生的关联问题。
该研究结果对于推动白血病以及其它恶性肿瘤的研究都具有实质性的意义。
多年以来，由于APL与其它白血病的分子关联证据有限，也由于PML/RARα产生的唯
一性（即仅存在于APL），学术界普遍认为对APL的相关研究具有相当程度的局限性、缺
乏普遍意义。而此次研究则有机地从时间和空间的层面上揭示了PML/RARα与造血细胞
分化受阻、白血病发生的直接关联。因此，从APL所具有的特性和与其它白血病以至于实
体瘤在内的其它恶性肿瘤所具有的共性两个方面而言，APL又是恶性肿瘤研究的一种绝佳
模型。我 |
|
b******1
发帖数: 1116 | 9 【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: blood001 (血池子), 信区: NewJersey
标 题: “朱令铊中毒事件”大事年谱 非常清楚 （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Apr 12 20:52:35 2013, 美东)
朱令铊中毒事件”大事年谱
（1973年11月－－2006年4月）
1973年11月24日 朱令（随母姓）出生在北京, 户口本上全名朱令令，因为习惯问题，
一般都称她为朱令。家里有一姐姐吴今（随父姓）。父亲吴承之是上海人，今年66岁，
1959年考入中国科技大学地球物理系，退休前曾任国家地震局高级工程师；母亲朱明新
是吴承之的同班同学，今年65岁，退休前是中国远洋运输总公司高级工程师。
注：网上的一种说法是，朱令家同样具有“高干背景”。对此，朱明新提到一个表弟跟
她开玩笑说，“大舅舅是 高干的尾巴”：“我父亲朱启明曾经参加过一二九运动，‘
文革’前在北京市委工作，‘文革’后平反，在北京市高级人民法院当顾问，没多久就
离休，2001 年去世。母亲退休前是北京一所中学的校长。”
注：据朱家亲友回忆：“姐姐吴今以前的名字是叫... 阅读全帖 |
|
b******1
发帖数: 1116 | 10 【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: blood001 (血池子), 信区: NewJersey
标 题: “朱令铊中毒事件”大事年谱 非常清楚 （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Apr 12 20:52:35 2013, 美东)
朱令铊中毒事件”大事年谱
（1973年11月－－2006年4月）
1973年11月24日 朱令（随母姓）出生在北京, 户口本上全名朱令令，因为习惯问题，
一般都称她为朱令。家里有一姐姐吴今（随父姓）。父亲吴承之是上海人，今年66岁，
1959年考入中国科技大学地球物理系，退休前曾任国家地震局高级工程师；母亲朱明新
是吴承之的同班同学，今年65岁，退休前是中国远洋运输总公司高级工程师。
注：网上的一种说法是，朱令家同样具有“高干背景”。对此，朱明新提到一个表弟跟
她开玩笑说，“大舅舅是 高干的尾巴”：“我父亲朱启明曾经参加过一二九运动，‘
文革’前在北京市委工作，‘文革’后平反，在北京市高级人民法院当顾问，没多久就
离休，2001 年去世。母亲退休前是北京一所中学的校长。”
注：据朱家亲友回忆：“姐姐吴今以前的名字是叫... 阅读全帖 |
|
b******1
发帖数: 1116 | 11 【 以下文字转载自 NewJersey 讨论区 】
发信人: blood001 (血池子), 信区: NewJersey
标 题: “朱令铊中毒事件”大事年谱 非常清楚 （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Apr 12 20:52:35 2013, 美东)
朱令铊中毒事件”大事年谱
（1973年11月－－2006年4月）
1973年11月24日 朱令（随母姓）出生在北京, 户口本上全名朱令令，因为习惯问题，
一般都称她为朱令。家里有一姐姐吴今（随父姓）。父亲吴承之是上海人，今年66岁，
1959年考入中国科技大学地球物理系，退休前曾任国家地震局高级工程师；母亲朱明新
是吴承之的同班同学，今年65岁，退休前是中国远洋运输总公司高级工程师。
注：网上的一种说法是，朱令家同样具有“高干背景”。对此，朱明新提到一个表弟跟
她开玩笑说，“大舅舅是 高干的尾巴”：“我父亲朱启明曾经参加过一二九运动，‘
文革’前在北京市委工作，‘文革’后平反，在北京市高级人民法院当顾问，没多久就
离休，2001 年去世。母亲退休前是北京一所中学的校长。”
注：据朱家亲友回忆：“姐姐吴今以前的名字是叫... 阅读全帖 |
|
C*********O
发帖数: 119 | 12 不算是的。和红斑狼疮根本是不同的毛病。湿疹很普遍长的人很多。只不过有的人长在
身上如果不是很严重就是一些小疹子偶尔发发痒痒。脸上就比较恐怖了....还有婴儿也
最容易长湿疹。婴儿湿疹是因为婴儿免疫系统还不健全引起的。
一、近日，一项针对皮炎湿疹患者的“远离皮炎湿疹 重现肌肤健康”的调查显示，95%
的受访者知道皮炎湿疹这一疾病，其中，只有10%的人群了解具体症状。作为皮肤科权
威专家，你能否告诉我们如何界定皮炎湿疹？它的主要症状又是什么呢？
皮炎湿疹我们经常会一起提到，他们是对同一类疾病不同角度的描述。但皮炎、湿
疹是有区别的，单纯性皮炎是指皮肤的炎症，没有特异性。我国皮肤学界所说的接触性
皮炎、特异性皮炎是指病因明确或具有某些特征的湿疹。他们是皮肤科临床常见病、多
发病。其主要症状为瘙痒、红斑、反反复复发作等。
- 接触性皮炎：多数可查出致病原。如接触性皮炎发病前接触过一些物质（油漆、
金属小饰品）。
- 湿疹：暂查不出致病原。查出病原后，改称为某某皮炎。也有患者始终无法找到
病因。这类患者湿疹的发生，可能与环境及心理因素（如焦虑、紧张、压力过大等）有
很大的关系。
二、那么皮炎湿疹 |
|
l****c
发帖数: 1 | 13
可以试着降低二抗稀释倍数.我曾经在用一个抗体时遇到过同样的问题, 当把protein A从
1:3000 dilution 降到1:5000后就只有一条很清楚的带了.提高特异性的办法还有: 适当
增加一抗incubation时间, 洗膜的时候条件剧烈一些, 二抗中加一些牛奶,etc. (如果你
不想换抗体, 也不愿意纯化抗体的话.) 需要注意的是提高特异性的同时很有可能一牺牲
信号强度为代价, 需要大大增加曝光时间. |
|
r****n
发帖数: 90 | 14 个人认为，不能傻干，讨论讨论好的IDEA，要上好JOURNAL，没有NOVELTY，光JBC，EMBO
恐怕不行啊
‘
我带个头，此文是GENE
DELIVERY/THERAPY领域，IDEA是用CHOLESTEOL做载体把一分子的CHOLESTEOL附加在RNAi送
入造脂细胞（特异性摄取CHOLESTEROL）达到高效降脂作用。
我研究NEURODEGENERATIVE DISORDER，正在琢磨啥东东能被APOPTOTIC NEURON特异性摄取
，把RNAi attach 到该东东上就可以达到NEUROPROTECTION的效果。请大家畅所欲言吧
RNA treatment lowers cholesterol
sofner 投递 "News@Nature-Nov 10,2004-RNA treatment lowers cholesterol
Cholesterol levels have been lowered in mice by using tiny pieces of genetic
material to block a particular gene. The |
|
l*********i
发帖数: 332 | 15 Edward Rubin, Nature, Nov 23. 2006
果蝇的遗传学非常简单，和做老鼠相比。重组率非常高，所以你可以相对容易的用重组
酶做特异性转基因。而正因
为有了容易的遗传学，所以，你可以相对容易的test各种idea。
比如我前面说过的，人们发现基因表达模式并不专一，表现为用某基因的启动子序列，
几K，假设连enhancer，去
转基因，结果transgene表达的模式与原基因常常不吻合，那么就才可能enhancer是有
几个的，转进去的时候，有
些活了，有些被沉默了。但是怎么证明呢，于是用果蝇遗传学就容易做啦，像levine做
的就是这些。但是对小鼠，
就麻烦了，首先，小鼠细胞的重组率很低，而且小鼠基因组相对复杂，举个例子，在果
蝇基因组里，你可以随便加
上一个UAS序列，很短的，驱动一个目标基因，再转一个Gal4目标蛋白，果蝇基因组里
，Gal4的transgene表达的
蛋白就可以自己找到UAS序列，驱动目标基因表达，nice阿！
用这种方法，你就可以容易的做诱导性的，专一性的，后来是热敏性的特异性表达。
但是，在小鼠里，就有问题了，你用同样的方法，表达的ga |
|
w******e
发帖数: 1187 | 16 首先得能发现个体的特异性差别。DNA/RNA的估计能指望NGS，protein要指望antibody
array/MS似乎还有很长一段路（希望aptamer array能迎头赶上呵呵）。小分子（
glycan
，metabolite，etc。最近出了个sarcosine）呢？lectin特异性太烂。希望aptamer
能顶上？不然也许只能指望HPLC之类能high throughput了？
其次得能把差别和各种physiological/pathological condition联系起来。这个ms进
展也太太太太慢了吧？就说cancer吧，有几个大家都服气的diagnostic/prognostic
/endpoint biomarker？一个PSA用了这么久，还一直被批。
最后要能根据这些差别来调节therapeutic regimen。Y/N型的或差别大的好办，学
herceptin
附赠个kit就是。检测分辨率不够的话呢？最好还是能够下一样的药，对不同的人达
到不同的效果，controlled release？也许就要在delivery method上做文章了？各
种deliv |
|
d***y
发帖数: 195 | 17 你的问题不成问题，
首先一个问题，现在的药物有没有副作用的药物么？
其次，肿瘤细胞和癌细胞有区别，某个pathway也好，某个靶蛋白也好，源自于突变也
好，异常调控也好，假设化合物真的只对肿瘤细胞有特异性，那么正常细胞里的靶蛋白
或pathway哪去了？
如果能解决这个问题，化合物/药物也许就不是很重要了，重要的是肿瘤和正常的区别
，也许是大发现呢。
特异性是指目标小且精确，达到这点已经是一个很好药物候补了，
药物开发为什么会有Phase I II III？ |
|
w******e
发帖数: 1187 | 18 同意你说的问题。特异性方面，主要是biomarker的validation严重滞后于
discovery。查文献可以找出一堆特异性marker，鬼都不follow up。。。
AACR上听了一个early marker validation的initiative，很多negative data。。。
deliver方面，问题的根源在于大家都柿子捡软的捏，能只做cell culture
绝不做老鼠，能只做intratumor injection决不做systemic administration，
能只做subcutaeous model by tumor cell injection决不做orthotopic/GEM model，
一旦热点过了就换一个概念接着从最低级的model做起（话说到了2006用aptamer
还能只做cell culture就发nature biotech，到了2009还能用aptamer+NP只做
cell culture发angwandte chemie。。。可惜等我跳进来好日子就到头了。。。），
当然对real worldproblem指导意义有限。。。 |
|
c********o
发帖数: 139 | 19 我是做淀粉样蛋白聚集的。今天老板说要找到能特异性识别alpha-synuclein的寡聚体
的抗
体，并且能做Western和Immuno的，并且说这种能做immuno的抗体现在还没有产生出来。
我的问题是，做抗体是否很困难？抗体这东西，真的那么具有特异性吗？（本人不太懂免
疫），谢谢大家！ |
|
D*a
发帖数: 6830 | 20 KO之后还有conditional KO, 时间特异性KO (比如Tamoxifen)，组织+时间特异性KO... |
|
y***i
发帖数: 11639 | 21 如果这个技术的效率能提高到实用水平的话，比现在的药的优势是
1。一旦发现致病的信号通路，立刻可以找到相应的shRNA，而现在的针对蛋白质的分子
药物只能大量筛选实验。
2。基本上所有的可以抑制的蛋白质都是酶，分子抑制剂通过结合于活性位点来抑制。
所以大部分蛋白质是没有特异性分子抑制剂的。一个pathway可能有几十个蛋白，但只
有几个可能找到特异性的分子药物。但对RNAi来说没这个问题。
RNAi看上去还是比gene therapy强，当然，你说得对，两者面临的delivery的问题一
样，而且目前看不到出路。 |
|
h*****o
发帖数: 342 | 22 他们用的不算Ab/immunoconjugate，而是用特异性的酶切位点，标记蛋白酶活性- 当然
他们花了很多功夫去优化在活体上标记的特异性，还有就是把特异蛋白酶和肿瘤病理联
系起来。我觉得这块已经做得差不多了，他们都开公司希望在人体上检测了 |
|
s********n
发帖数: 2939 | 23 从他的presentation得到的信息是他的技术已经不仅仅是发文章了，已经用在实际的手
术，当然现在只是在小鼠上做。他说已经搞出了一套手术设备，并优化了几次，现在已
经比较成熟。比如他将fluoresence的影像和可见光的重叠可以只切除小鼠脑内的肿瘤
组织，利用其它的荧光标记neuron，以免错杀。据他们的实验结果显示，手术很干净（
用MRI复查），而且术后小鼠的成活率很高，基本达到正常寿命。
这个技术特异性很好，但是肝脏例外，所以手术应用没问题（除了肝脏肿瘤），但是他
们的最终目标是肿瘤特异性的药物（指所有肿瘤），但现在比较大的问题是在肝脏，他
们正在研究方法。 |
|
h*****o
发帖数: 342 | 24 很多GPCR都是dimer
我研究过一个叫PAR1的GPCR，它能被很多蛋白酶激活，像thrombin, APC, MMP1,
plasmin，等等。那同一个受体怎么能介导不同的信号通路呢？最近发现某些蛋白酶（
比如APC)是先结合到一些特异性的膜受体上(比如EPCR)，然后再就近切PAR1。所以你说
这种同类聚集的特异性是有可能的，也许还是必要的。 |
|
f********n
发帖数: 6465 | 25 换特异性抗体.
有时侯抗TAG,FLAG或者非特异部分的抗体做不出来,换成特异性抗体就可以做出来.
我们还是膜蛋白呢,换了之后就做出来了. |
|
s******y
发帖数: 28562 | 26 Merck公司推出的新药Boceprevir对丙型肝炎Hepatitis C病毒有很好的抑制效果。
这个药最早是由 Schering-Plough开发的，这个公司在２００９年被 Merck 买下.
Boceprevir 属于蛋白酶抑制剂，特异性的抑制hepatitis C virus 的一个蛋白酶NS3
protease ，而导致病毒蛋白不能被完全处理而无法组装和成熟.
由于丙种肝炎病毒的寄主特异性和在体内的感染过程的特殊性。该病毒目前没有有效的
体外细胞培养系统，也缺乏可以大规模筛选的动物模型，所以无法采用小分子筛选方式
。该药的开发几乎是纯粹由蛋白结构研究和binding prediction 推导开的，在对NS3
protease进行结晶之后，研究组在一些已知信息的基础上，对蛋白酶的活性基团serine 的侧链进行了抑制物设计
。在得出了最初的蛋白多肽lead 之后进行了进一步的优化，
最终得出了一个最有效的分子结构。
Federal health officials say a highly-anticipated drug to treat hepatitis C
made ... 阅读全帖 |
|
c******r
发帖数: 3778 | 27 是啊，我是这样看的。
另外，做实验的samples还需要isotype controls。
实验组：
第三组
1. 用特异性抗体沉淀+需要研究的序列的primers
目的：回答你的biological question
2. 用IgG沉淀+需要研究的序列的primers（negative）
目的：抗体对这一段特定序列没有非特异性结合。
目的：确定抗体和所有实验步骤都没问题。
目的：确定特异性抗体对已知序列没有非特异性结合。即确定positive control是有效
的。
目的：确定抗体对已知序列没有非特异性结合。
目的：确定抗体对随机序列没有非特异性结合。 |
|
z*******a
发帖数: 175 | 28 should be
1. 特异性抗体沉淀,已知结合序列的primer pair A (targeting enhancer or
promoter of interest, positive)
2. 特异性抗体沉淀,已知不结合序列的primer pair B ( targeting
transcriptionally active region, negative)
3. serum or IgG沉淀, primer pair A (negative)
4. serum or IgG沉淀, primers pair B (negative)
first time,
you need 1, 2, 3
you may include 4, but nobody cares
after established (working antibody and optimized conditions), you only need
1&2, or 1&3
need to be prepared to get involved. much complicated than other routine... 阅读全帖 |
|
S*****s
发帖数: 242 | 29 南方日报讯 (记者/周志坤)继第一批引进首批12支创新科研团队和15名领军人才
之后，我省将再引进第二批创新科研团队和领军人才，“基因沉默技术与治疗研发团队
”等20个团队拟入选我省引进第二批创新科研团队，17人拟入选我省引进第二批领军人
才。在第二批拟引进的团队和个人中，包括两名诺奖得主。入选团队和个人从即日起接
受15天的公示。
广东省引进第二批创新科研团队、领军人才公示通告
按照《广东省引进创新科研团队评审暂行办法》、《广东省引进领军人才评审暂行
办法》的 相关规定，通过公开申报、资格审查、专家专业评审、现场答辩评审等程序
，经省委、省政府同意，“基因沉默技术与治疗研发团队”等20个团队拟入选我省引进
第二批创新科研团队，杰马里•莱恩等17人拟入选我省引进第二批领军人才。现
予以公示：
一、20个拟入选的创新科研团队
1. 基因沉默技术与治疗研发团队。团队带头人克雷格•梅洛，2006年度诺贝
尔生理或医学奖获得者，美国科学院院士，发现核糖核酸(RNA)干扰基因沉默过程 机制
并在RNA药物开发等领域取得举世瞩目的科学成就。核... 阅读全帖 |
|
g*********d
发帖数: 233 | 30 夏荣辉，李江
上海交通大学医学院，上海（200011）
E-mail：e******[email protected]
摘 要：基因的表观遗传学修饰正越来越受到人们的重视，它包括DNA甲基化和组蛋白修
饰，组蛋白修
饰又包括组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化。基因的表观遗传学改变在基因转录调节方面有
重要作用。最
近研究较多的是多种组蛋白修饰方式和DNA甲基化在基因转录调节方面的共同作用，本
文详述组蛋白
修饰和DNA甲基化的发生机制，并且总结了组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化与DNA甲基化之
间的相互作
用，提示不同位点的组蛋白甲基化与DNA甲基化共同作用于基因转录，并且发挥不同的
作用，具体体
现在组蛋白乙酰化、组蛋白H3K9、H3K27和H4K20甲基化与DNA甲基化协同作用，使基因
发生转录抑
制，而组蛋白H3K4甲基化与基因转录激活有关。
关键词：组蛋白修饰；DNA甲基化；关系
1. 引 言
目前，在研究肿瘤发生发展的过程中，基因的表观遗传学修饰所起的作用日益得到人们
的重视。组蛋
白修饰和DNA甲基化是两种最重要的表观遗传学修饰方式。研究表明，人类几乎所有类
型的肿瘤都存
在组蛋白及DNA甲基化的异常... 阅读全帖 |
|
g*********d
发帖数: 233 | 31 目前表观遗传学(Epigenetics)通常被定义为基因表达通过有丝分裂或减数分裂发生了
可遗传的改变, 而DNA 序列不发生改变[1, 2]。表观遗传学的机
制主要包括DNA 甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA。DNA 甲基化(DNA methylation)是指
在DNA甲基转移酶(DNA-methyltransferases, DNMTs)的催化下, CpG 二核苷酸中的胞嘧
啶被选择性地添加甲基, 形成5-甲基胞嘧啶[3, 4]。DNA 甲基转移酶有两种, 其中
DNMT1 主要起维持甲基化的作用, 能使半甲基化的DNA 双链分子上与甲基胞嘧啶相对应
的胞嘧啶甲基化, 可参与DNA 复制双链中新合成链的甲基化[5]; 而DNMT3a 和DNMT3b
主要起形成甲基化的作用, 能在未发生甲基化的DNA 双链上进
行甲基化[6]。DNA 甲基化一般与基因的沉默相关,DNA 去甲基化则与基因的活化相关[7
~9]。
组蛋白修饰(Histone modifications) 是指组蛋白的基础氨基末端尾部突出于核小体,
常在转录后发生变化, 包括甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化等翻译后的修饰... 阅读全帖 |
|
D***a
发帖数: 516 | 32 我有好几年没怎么看MSC的文章了，但好像这些年这领域也没什么突破性进展。我就说
几句，供参考。
直接用bone marrow MNC和分离培养MSC再注射的文章都有很多。直接用MNC的考虑大概
是骨髓中到底什么细胞是真正的能够transdifferentiation的stem cell没有公认的结
论，有人说是是在MSC群体里，有人说是是在HSC群体里。所以从应用的角度，直接用
MNC而不是分离纯化好的细胞，不会遗漏任何可能的stem cell。还有一点考虑，全骨髓
移植已经成功应用到临床有50多年了，其可能的风险和经验已经积累了很多，现在只是
将其用于新的疾病，便于被批准。而MSC之类的，需要经过体外培养，近十年才开始小
规模临床试验，风险和效果未知，推广起来挺难。当然，这并不妨碍实验研究，MNC和
MSC都可以发文章。
关于是否用辐射，辐射只能损伤快速增殖的组织，比如骨髓，肝脏，小肠粘膜等，对血
管平滑肌损伤效果未必好。很多组织特异性的损伤都有其自己的方法，比如心血管用缺
血再灌注，胰岛用STZ。我不清楚血管平滑肌是否有特异性的损伤方法，但放射损伤我
不认为它是一个很广泛的适应症。 |
|
g******u
发帖数: 66 | 33 最近被一个问题困扰着:
用某种通道蛋白的抗体(通过Western blot和immunohistochemistry) 来研究此蛋白在
一个组织中的表达情况.在大批量的实验前,先做了个预实验测试了下此抗体的特异性.
很奇怪的是,Western blot和immunohistochemistry 都显示在此蛋白完全敲除的动物组
织中还是有弱的阳性表达(和wild-type相比是很弱,但还是能看到非常弱的条带或者染
色).
难道是一抗或者二抗的浓度过大?还是封闭的不够?
注: 1. 此抗体已经有几篇发表的文章显示是特异性的
2. 基因敲除的动物应该没有问题
3. 弱的阳性表达应该不是来自自发荧光或者artifact
非常感谢您的建议和分析!!! |
|
r**o
发帖数: 212 | 34 最近亲戚得了肝癌，已经是晚期了。他所住的医院据说引进了一种CIK细胞治疗方法。
版上的人了解这种方法么？
CIK细胞治疗是新一代细胞免疫治疗的一种。T淋巴细胞是人体攻击癌细胞的最主要细胞
。肿瘤特异性T淋巴细胞的数量和活性决定人体抗肿瘤免疫的能力。CIK细胞是在经过选
用细胞因子和培养条件优化后的新一代治疗方法，数十倍扩增活化肿瘤特异性T淋巴细
胞，能有效攻击肿瘤，称之为细胞因子诱导的杀伤细胞。 |
|
b*****e
发帖数: 762 | 35 请问 同位素标记的单克隆抗体治疗晚期肝癌 能提供更多的信息吗？是指得 导向治疗
吗？
导向治疗 应用特异性抗体和单克隆抗体或亲肿瘤的化学药物为载体，标记核素或与化
疗药物或免疫毒素交联进行特异性导向治疗，是有希望的疗法之一。临床已采用的抗体
有抗人肝癌蛋白抗体、抗人肝癌单克隆抗体、抗甲胎蛋白单克隆抗体等。“弹头”除
131I125I外已试用90Y，此外毒蛋白和化疗药物与抗体的交联人源单抗或基因工程抗体
等正在研究中。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 36 前一个是有特异性的，限于抗体，而且不一定会被巨噬细胞吃掉。
后一个是无所谓特异性的， 也不一定是抗体诱导的，只要是有利于被巨噬细胞辨认就算 |
|
g*********3
发帖数: 177 | 37 最近在考虑是不是需要用adenovirus transfection,但是不知道transfection
efficiency是多少？很多paper里就给了一个Immunostaining的图，也没给个数字。根
据大家的经验，这个效率大概是多少呢？（如果能讨论下特异性就更好了）
另外，liver大概有70%的细胞是hepatocytes，剩下的就是其他细胞了，transfection
是针对所有的细胞吗？有没有特异性的针对hepatocytes的。
先谢谢各位。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 38 跟那些宗教狂很难讲到一起的，他们知道的其实就是一些中学生物学的皮毛，
却让人哭笑不得的喜欢乱发挥去推导一些超过他们学识的东西。
这么说吧，我从来没有听说过有什么“热运动组装第一个遗传密码/基因的理论”
就是有，也就是某少数人想出来的假说，没有经过生物学界的人用实验证明过，
所以他（BHistory）拿这个来当靶子攻击就是乱弹琴。
第二，进化上的早期基因，其实应该是RNA 编码基因。因为RNA本身就有酶活性，
有足够完成一个基本生命体所需要的基本活性（代谢和复制）。而RNA 本身就是由编码
组成的。DNA 可以看作是RNA 编码的一个稳定备份，所以就成了所谓的基因（基因的本
质就是生物信息的稳定备份体）。
即使在现在的有蛋白质为主的生命体里面，仍然有很多DNA 序列是纯粹用来记录RNA而
和蛋白质完全无关的。
第三，从RNA过渡到蛋白界的时候，并不是三个密码子决定一个氨基酸的，
所以这个BHistory在文章里面论证了那么久，根本就是空对空乱辩论。
生物界里的实验支持的结论是：在我们这些生物的祖先的早期，其实是两个密码子决定
一个氨基酸。
至于为什么基于RNA的生物 要想到去用氨基酸？其... 阅读全帖 |
|
g****y
发帖数: 101 | 39 大家好,
我有一个课题是通过抑制一个oncogene的功能来治疗这个基因突变（Gain of function
）引起的癌症（T cell leukemia），之前通过molecular docking从NCI 筛选小分子化
合物来抑制蛋白与蛋白的相互作用，做的不是很理想。
最近想通过SiRNA或者ShRNA抑制这个基因的表达，最终目的是为了能在体内有效的特异
地抑制肿瘤细胞里这个oncogene的表达，从而可以选择性的杀死肿瘤细胞。对这个领域
不是很熟悉，读了一些文献之后上来寻求大家的帮助，
预见的可能问题及解决方法：
1：SiRNA 或者ShRNA的特异性：
SiRNA 或者ShRNA可能会非特异的抑制其它基因的表达，可以通过仔细选择SiRNA 或者
ShRNA的序列(避免同源序列)来降低非特异抑制，请问大家还有什么办法来提高特异性
吗？
2：体外合成的SiRNA在体内容易被降解：
通过对SiRNA进行一定的修饰可以提高稳定性，但是我觉得通过病毒介导表达ShRNA 可
能是一个更好的办法，因为这个是由基因突变（Gain of function）产生的疾病，体外
合成的SiRNA不能... 阅读全帖 |
|
g****y
发帖数: 101 | 40 谢谢评论, 我也觉得ShRNA的特异性是一个很大的问题, 不过目前有一些文献说可以
optimized siRNA design来提高或者解决特异性的问题(当然这些文章可能就是wdgca所
说的灌水文章,赫赫).
考虑到很多药物都有off-target effect, 或者说目前的治疗手段(如化疗)会有大的副
作用, 对于癌症病人来说, 很多时候是存活时间长短的问题, 如果一种手段能把存活期
由一年延伸到5-10年的话,这种手段还是有一定价值的.
回到我的project, 如果我optimized shRNA design, 并且把ShRNA 连到 T Cell
specific promoter 后面, 那就可以把off-target effect限制在T细胞(大部分都是
leukemia)里面, 这样是不是可以提高这个实验设计的可行性呢? |
|
g****y
发帖数: 101 | 41 To Ttd:
肝癌通过这种方法治疗应该会更好,当然也会面临特异性的问题,
我也觉得SiRNA比小分子化合物更靠铺, 今年AACR的时候和一个药厂的前辈聊天的时候
说到我在筛选小分子化合物来抑制蛋白蛋白之间的相互作用, 前辈直接说这种project
灌水可行, 都是做药物研发不可靠. 我也觉得是这样的,毕竟蛋白质作用的surface比较
大, 小分子药物的特异性不够高.
至于SiRNA的副作用在能不能在可受范围内,这个无法预测, 只有在优化SiRNA的设计并
且提高T细胞的感染效率后去试了才知道. |
|
G********e
发帖数: 528 | 42 现象很有趣，机制很复杂。
感兴趣的问一下以下几个问题
1，有关心功能问题。在KO老鼠，正常进食的情况下，听你的意思似乎是有心功能问题
。想确定一下，首先这个心功能问题具体是什么问题，收缩还是舒张期，心肌细胞还是
巨石细胞问题，用什么方法看到心功能问题的。其次，这个KO老鼠出现心功能问题是全
身性的KO还是组织特异性的KO，如果是全身的KO有没有别的器官出现问题。最后，大概
老鼠多大的时候出现问题。
2，有关这个基因。1，表达的器官或者组织；2，什么生理或者病理情况下可能受到诱
导；3，基本的蛋白功能，从DNA修复到转录调控再到信号转导，会是很重要的信息；
3，基本上如果你做的实验很solid，我会作出以下两种推断。
KO老鼠的心功能问题如果出在心肌细胞的代谢上，而不是由于食物代谢出现问题而导致
的（假设除了心脏以外的器官正常）。HFD可能可以调控全身代谢来bypass这个心肌细
胞的代谢问题。至于吃的少，只能是由于心脏代谢的改变进而影响到的。
KO老鼠的心功能如果不是直接心急细胞的问题，而是机体其他脏器的代谢问题间接引起
的。HFD就有可能可以reverse这个具体的代谢问题，这个或者... 阅读全帖 |
|
T****O
发帖数: 407 | 43 癌症有一个独特的、无可抗拒的功能：杀死特定多细胞生命个体。令个体死亡有很多办
法和途径，但只有一个绝对地不可抗拒而且比癌症更强大：衰老。作为进化的成果，衰
老的目的是非特异性地消灭生命个体，癌症的目的是特异性地或针对性地消灭生命个体
。通过清除上一代生命体，衰老严格地保证生命进化机制不停顿。通过清除特异生命个
体，癌症严厉地建立一条底线，保证一个物种的生存不受有害变异的威胁。很遗憾，衰
老和癌症完全不在乎人类的感情。
在一般意义上，人类不可能治愈癌症，因为癌症是自然的。虽然对于癌症患者和家庭，
癌症是邪恶的，痛苦的，悲惨的，但于人类整体而言，癌症从来不是一个威胁。免疫系
统维护个体安全，癌症维护个体所在物种的安全。这是人类免疫系统不可能彻底压制或
消灭癌症的根本原因。可自行消灭癌症的物种或许曾经出现过，但该物种已经被自然选
择淘汰。
癌症是个体基因和遗传层面错误导致的严厉后果：致死机制的启动。这个机制本身的启
动和控制是困难的、严格的、复杂的、几乎不可逆的。是不是有点像细胞凋亡？故此有
人说癌症是个体表型凋亡的一个机制。
但是，人类作为一个智慧的物种，已经有能力使得衰老不一定必然令人痛... 阅读全帖 |
|
j*******n
发帖数: 62 | 44 使用带S蛋白的假病毒。参照Charles Rice 的HCV文章。
HBV的受体可能有很多种，物种特异性受体，细胞特异性受体。这篇文章没有回答这个
问题。具体的可以参看HCV受体发现的那几篇nature。
papers |
|
j****x
发帖数: 1704 | 45 我明白你的意思了，之前我们看待这篇文章的角度有些不同。
我个人更关心，这一发现能解决什么问题，能带来什么样的新应用，效果可能会怎么样。
而你这边可能更多是关注于受体特性的研究本身，在感染过程中具体的作用是什么，依
赖于哪些条件，如何确切的阐明感染的组织特异性和种属特异性等基本问题。而这些“
经典”的研究内容确实或多或少的有所缺失。不过不必着急，顺藤摸瓜的事最简单，呵
呵，有的放矢还是很轻松的吧。
不管怎么说，我觉得这篇文章的引用最终定然会很高，会有力的带动eLife的点数攀升
，CNS不收应该是他们的损失。
for
field |
|
j*******n
发帖数: 62 | 46 使用带S蛋白的假病毒。参照Charles Rice 的HCV文章。
HBV的受体可能有很多种，物种特异性受体，细胞特异性受体。这篇文章没有回答这个
问题。具体的可以参看HCV受体发现的那几篇nature。
papers |
|
j****x
发帖数: 1704 | 47 我明白你的意思了，之前我们看待这篇文章的角度有些不同。
我个人更关心，这一发现能解决什么问题，能带来什么样的新应用，效果可能会怎么样。
而你这边可能更多是关注于受体特性的研究本身，在感染过程中具体的作用是什么，依
赖于哪些条件，如何确切的阐明感染的组织特异性和种属特异性等基本问题。而这些“
经典”的研究内容确实或多或少的有所缺失。不过不必着急，顺藤摸瓜的事最简单，呵
呵，有的放矢还是很轻松的吧。
不管怎么说，我觉得这篇文章的引用最终定然会很高，会有力的带动eLife的点数攀升
，CNS不收应该是他们的损失。
for
field |
|
j****x
发帖数: 1704 | 48 算是之前版上的评论的延续吧，但还是决定新开一个帖子，欢迎进一步的讨论。
先说点题外话，呵呵。大约是一个半月前通过BBS了解到李文辉博士组的这一进展，非
常期待，其意义不言而喻了。随即给李博士发邮件，希望能够先睹为快。意料之中的没
有答复。直到前天收到李博士的邮件回复，附带了全文，还特别叮嘱我不要外传。我这
儿兴奋劲儿还没过呢，结果今天全文就上线了，哈。
言归正传。用一句话概括我的感受：结果很有说服力，但是故事还远远没有完。
作为HBV研究领域最古老也最重要的命题之一，病毒受体一直是未解之谜。尽管之前有
不少研究提示了各种各样的可能，但没有任何一个能够真正解决一个最简单也最基本的
问题：能够让培养的肝细胞系在体外被HBV感染。而这个问题，在这篇文章中已经被解
决了。这里的实际意义和价值，我想只有这个领域的人才能更切身的体会得到。所以我
个人认为，从这个层面上讲，绝对CNS级别的意义，一点也不过分。
事实上，正如大部分人所预想的，HBV的受体绝非一个蛋白一个分子所能涵盖的。指望
一步到位也不现实。类比HCV受体研究，直到CD81的发现，才算有了一个相对清晰的有
特异性的脉络，而之前种种比如... 阅读全帖 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 49 算是之前版上的评论的延续吧，但还是决定新开一个帖子，欢迎进一步的讨论。
先说点题外话，呵呵。大约是一个半月前通过BBS了解到李文辉博士组的这一进展，非
常期待，其意义不言而喻了。随即给李博士发邮件，希望能够先睹为快。意料之中的没
有答复。直到前天收到李博士的邮件回复，附带了全文，还特别叮嘱我不要外传。我这
儿兴奋劲儿还没过呢，结果今天全文就上线了，哈。
言归正传。用一句话概括我的感受：结果很有说服力，但是故事还远远没有完。
作为HBV研究领域最古老也最重要的命题之一，病毒受体一直是未解之谜。尽管之前有
不少研究提示了各种各样的可能，但没有任何一个能够真正解决一个最简单也最基本的
问题：能够让培养的肝细胞系在体外被HBV感染。而这个问题，在这篇文章中已经被解
决了。这里的实际意义和价值，我想只有这个领域的人才能更切身的体会得到。所以我
个人认为，从这个层面上讲，绝对CNS级别的意义，一点也不过分。
事实上，正如大部分人所预想的，HBV的受体绝非一个蛋白一个分子所能涵盖的。指望
一步到位也不现实。类比HCV受体研究，直到CD81的发现，才算有了一个相对清晰的有
特异性的脉络，而之前种种比如... 阅读全帖 |
|
