b**********8
发帖数: 349 | 1 如题，手上的一个真和表达质粒，据说是当初从Addgene买回来的，DH5alpha的菌液，
前段时间快用完了，用TOP10做了转化，使用invitrogen的midi prep kit提取中抽，产
量超低，几乎看不到沉淀，重复两次都一样，同一批操作的其它质粒都没问题，产量一
般在100ug左右。后来考虑是不是感受态不同导致，找别的组要了DH5alpha回来转化，
再提，还是没有改善，只能看到很少的一点点白色沉淀，现在正在airdry，估计产量也
就在几ug的水平，请问大家有没有遇到这个问题，该怎么解决呢？ |
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b********c
发帖数: 161 | 2 2个性质,大小,pI，蛋白序列都非常相似的蛋白（paralogs）A 和 B，用的pET15b
vector， 在e.coli(DE3)中加IPTG诱导表达，然后粉碎细胞后，提取上清液可溶总蛋白
跑SDS-PAGE,A可以看到诱导的目的蛋白， 但B看不到诱导的条带。 直接load这2个蛋白
的诱导前和诱导后的 crude cell culture，A和B都可以看到诱导后的目的蛋白。所以
我不知道为什么B蛋白在粉碎细胞后不在可溶蛋白部分，甚至一点都没有，如果是形成
了inclusion body，难道一点都不剩在可溶部分里面？
我测过序列，都是正确连接的，而且用 crude cell culture做相关的生化实验，也发
现了这两个酶的效率是很高的。 |
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X*******0
发帖数: 134 | 3 我要提取的蛋白,带有C端6xHis-Tag,但是挂不上Ni柱,上柱后原封不动地出现在流出液
里,一点都没挂上.
由于必须用带N端pelB信号肽的pET26载体,并且N端靠近活性中心,所以只能把His-Tag放
C端,而且我已经试了放N端,蛋白彻底消失,估计N端Tag导致不稳定,降解了.
那么,除了Ni柱以外还有没有别的比较实用的办法纯化这个蛋白呢?我要用它作酶活鉴定
,所以需要纯化分离.蛋白大小在46kD.理论pI6.9. |
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b***a
发帖数: 147 | 4 从一个细胞株里提的蛋白，IgG做阴性对照，分别测蛋白A和蛋白B，用蛋白C做阳性对照。
结果是，input的lane里面都是干干净净，一点都没有，IgG的lane，可以见到重链，但
是向下的拖影很严重，蛋白A/B/C也是这样，拖影很严重，目的条带似有似无，第一次
做这几个蛋白，据说蛋白C是阳性对照，应该不错 的。
对了，A和B是核蛋白，我提的是总蛋白，就是提取的时候，用裂解液时间长一些，
vortex剧烈些。
觉得奇怪的是，为什么input里面干干净净，IP以后 反而有东西？这不是无中生有么？
我觉得从结果看，Western blot的过程应该没问题的，感觉是IP的问题，拖影可能是洗
脱的不够吧，可是这无中生有就没法解释了，要是一个抗体还可能是什么步骤错了，可
是三个抗体都这样，就奇怪了。。
盼高手指点一二。。。。 |
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M**a
发帖数: 4816 | 7 check your PM box.
Good luck! |
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q***7
发帖数: 144 | 9 你如果用的是Qiagen 或其他公司的柱子提的RNA，那你有没有考虑过RNA样品中的洗液
的影响？
尤其是RNA浓度低的样品。因为要调成和浓度高的样品一样的总量，所以要加的比较高
的体积。这样在反转录体系中这个低样品的洗液就多，抑制反转录酶的活性很强。所以
你虽然放了一样多的总RNA，但是大多都没有被反转录。当你所qPCR时，你这个样品的
Ct值会很高，意思就是表达很低。所以就是给你表达低的假现象。你做qPCR时，可以留
意一些低浓度样品的Ct值。很多人发表的qPCR的文章后来表明结果相反，有一些原因是
这些研究者没有考虑这个原因。
这是我给另外一个贴子的回复
Qiagen柱子提取的RNA总是含很多的洗液。后面会影响到反转录酶的活性。如果每个样
品的浓度不一样，你做qPCR时，要调成一样的浓度，这样你做反转录的每一个样品的反
应液里含有的洗液浓度就不一样。不一样的洗液浓度，抑制反转录酶的程度也不一样。
这样你最后出来的qPCR结果肯定不准确。有的样品里表达低，可能是因为洗液多而抑制
了反转录酶造成的，而不是真正的表达低。如果你同一组的样品，有的表达高，有的表
达低，一般都是这个原因造成... 阅读全帖 |
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y****i
发帖数: 2194 | 10 神棍请自动绕道，只是和搞生物的同学分享一篇好文
转载：原文链接：http://www.douban.com/group/topic/33656795/?r=1
在以前本小组的讨论中，我曾提到 “比如你如果不理解所有生物共有的膜渗透能量供
应化学原理，你就根本无从评价任何生命起源的理论。”
**********************
一 直觉与反直觉
直觉（intuitive）和反直觉（counterintuitive）是科学讨论在描述一个科学理论或
者发现的时候，经常使用的二分法。这个叫法本身并不那么科学和严谨，但是其中的意
味却是无限深长的。
既然不严谨，我也不去定义它，只看范例：
最简单清楚的直觉理论，在古希腊科学有很多范例。比如“物体排开的水量等于它的体
积”。比如欧几里得平面几何中的公设和简单定理。“凡直角都相等”，“两点之间直
线最短”，初学几何的人，都会想这不是废话吗。等到用这些废话为基础武器，逐步分
解，证明了其他复杂得可怕的理论，我们才知道废话的精辟之处。这就是直觉理论最原
始的特征：不言而喻。然而，即使在这种萌芽时代的智慧中，也埋下了“反直觉”理论
的种子，比如仅仅... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 11 我们实验室烙印把裂解液室温过夜。因为是病人样品，不舍得扔，第二天就跑胶了。结
果好好的。(不推荐这么做啊！)
细胞免疫荧光染色不也有放了抗体，4度过夜的么。
另外蛋白离心也是四度啊。如果死度就玩完了，这种提取方法也就不那么robust了
还有IP-WB不也四度过夜么（我也是放了inhibitor cocktail）？ |
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i***9
发帖数: 106 | 12 他说的应该是conditioanl medium，就是细胞在serum free的纯medium里面培养一段时
间（24-72小时），然后分析有什么cytokine or ligand被secret到medium里面了。
我也想知道有什么比较好的办法，浓缩，分离，过柱子。
Millipore的ultrafiltration似乎可以，不知道效率怎么样？ |
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g*****x
发帖数: 3283 | 13 那样的话我猜蛋白数量应该不算太多？
先试试直接digest然后SPE纯化一下peptide做质谱 |
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s**********a
发帖数: 92 | 14 直接拿培养细胞的medium来digest？您这么做过么？谢谢！
另外我们也打算先做个mRNA microarray看看。 |
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s*********y
发帖数: 292 | 16 绝大部分培养的细胞分泌的cytokine都是做elisa，或者类似于elisa的方法 |
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g*****x
发帖数: 3283 | 17 当然要提蛋白了啊，这个用MWCO浓缩一下TCA沉淀就搞定了 |
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发帖数: 1 | 19 韩春雨再调查｜河北科大避谈学术评议，被曝曾组织论文买卖
澎湃新闻记者 王盈颖 韩声江
2017-12-20 21:08 来源：澎湃新闻
字号
“我赢了。”2016年11月的最后一天，身陷论文可重复性危机的韩春雨对河北科技大学
的同事说。
240多天后，让他一战成名、发表在国际期刊《自然-生物技术》的论文由韩春雨团队主
动申请撤回。那一天是2017年8月3日。在撤稿声明中，韩春雨团队写道：“我们会继续
调查该研究缺乏可重复性的原因，以提供一个优化的实验方案。”同日，韩春雨所在的
河北科技大学表示：“决定启动对韩春雨该项研究成果的学术评议及相关程序。”
撤稿，不是这一学术事件的句号。但自此之后，韩春雨与期刊之间、与国内外无一例外
无法重复他实验的科学家同行之间、与媒体之间，被他称为有输赢之分的较量，进入停
滞期。
河北科技大学副教授韩春雨
12月中旬，澎湃新闻（www.thepaper.cn）记者再次来到河北科大时，发现河北科技大
学承诺的针对韩春雨论文的学术评议至今仍无结果。韩春雨个人凭此论文所获得的河北
省科学技术协会副主席头衔未受任何影响。
澎湃新闻记者多次申请就学术评议进展一事采访... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 20 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: microfish (<。)#)))≦), 信区: Military
标 题: 黑韩春雨的长文
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Dec 22 15:08:01 2017, 美东)
韩春雨开小号假装网友为自己站台 官位未受影响(组图)
新闻来源: 澎湃新闻 于 2017-12-22 8:49:31 大字阅读 敬请注意:新闻取自网络,观
点不代表本网立场!
“我赢了。”2016年11月的最后一天，身陷论文可重复性危机的韩春雨对河北科技
大学的同事说。
240多天后，让他一战成名、发表在国际期刊《自然-生物技术》的论文由韩春雨团
队主动申请撤回。那一天是2017年8月3日。在撤稿声明中，韩春雨团队写道：“我们会
继续调查该研究缺乏可重复性的原因，以提供一个优化的实验方案。”同日，韩春雨所
在的河北科技大学表示：“决定启动对韩春雨该项研究成果的学术评议及相关程序。”
撤稿，不是这一学术事件的句号。但自此之后，韩春雨与期刊之间、与国内外无一
例外无法重复他实验的科学家同行之间、与媒体之间，被他称为有输赢之分的较量，进
入停滞... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 21 记者：王盈颖 韩声江
来源：澎湃新闻
“我赢了。”2016年11月的最后一天，身陷论文可重复性危机的韩春雨对河
北科技大学的同事说。
240多天后，让他一战成名、发表在国际期刊《自然-生物技术》的论文由韩
春雨团队主动申请撤回。那一天是2017年8月3日。在撤稿声明中，韩春雨团队写
道：“我们会继续调查该研究缺乏可重复性的原因，以提供一个优化的实验方
案。”同日，韩春雨所在的河北科技大学表示：“决定启动对韩春雨该项研究成
果的学术评议及相关程序。”
撤稿，不是这一学术事件的句号。但自此之后，韩春雨与期刊之间、与国内
外无一例外无法重复他实验的科学家同行之间、与媒体之间，被他称为有输赢之
分的较量，进入停滞期。
河北科技大学副教授韩春雨
12月中旬，澎湃新闻（www.thepaper.cn）记者再次来到河北科大时，发现
河北科技大学承诺的针对韩春雨论文的学术评议至今仍无结果。韩春雨个人凭此
论文所获得的河北省科学技术协会副主席头衔未受任何影响。
澎湃新闻记者多次申请就学术评议进展一事采访韩春雨，均被实验室内人员
拒之门外。“韩老师不在”、“我们不会开门的”，实验室楼道中模糊的人影这
样回... 阅读全帖 |
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g*******g
发帖数: 1164 | 22 【 以下文字转载自 Living 讨论区 】
发信人: dingding2000 (东方), 信区: Living
标 题: 太可怕了， 不能随便交女朋友了。。
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 4 13:59:05 2014, 美东)
北京海归女硕士因被“玩弄” 购秋水仙毒杀男同学
今年31岁的史某是一名海归女硕士，在一次培训中认识了比自己小4岁的男同学乔某，
二人一度关系暧昧。当已有女友的乔某提出断绝关系时，史某认为自己被愚弄，遂网购
足以致死剂量的秋水仙碱，并投放在乔某的饮料中，致其严重中毒，幸而最终得救。日
前，一中院对这起案件作出终审判决，史某以故意杀人罪被判处有期徒刑8年。
现场 喝完饮料后中毒
2013年8月21日凌晨，在北京一家程序员训练营参加培训的男子乔某，夜里突然腹
痛难忍，并多次起床呕吐，第二天一早，同学将其送往309医院进行治疗。
院方诊疗记录显示，起初乔某到肠胃科就诊，但化验后，医生怀疑他患的是病毒性
心肌炎，遂将其转至心内科。而随后，乔某血小板的指标持续降低，以至医院下达了病
重通知书，并将乔某转至重症监护病房。尽管院方组织多个科室会诊，可... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 23 各国国情决定废旧塑料回收处理方法不同
世界合成树脂的产量已达2亿t，大量消费后塑料的处理问题已成为当今地球环
境保护的热点。目前，消费后塑料的处理有下述几种途径：1、填埋;2、焚烧;3、堆肥
化;;4、回收再生;5、采用降解塑料。
在城市塑料固体废弃物处理方面，目前主要采用填埋、焚烧和回收再利用三种方法
。因国情不同，各国有异，美国以填埋为主，欧洲、日本以焚烧为主。采用填埋处理，
因塑料制品质大体轻，且不易腐烂，会导致填埋地成为软质地基，今后很难利用。采用
焚烧处理，因塑料发热量大，易损伤炉子，加上焚烧后产生的气体会促使地球暖化，有
些塑料在焚烧时还会释放出有害气体而污染大气。采用回收再用的方法，由于耗费人工
，回收成本高，且缺乏相应的回收渠道，目前世界回收再用仅占全部塑料消费量的15%
左右。
但因世界石油资源有限，从节约地球资源的角度考虑，塑料的回收再用具有重大的
意义。为此，目前世界各国都投入大量人力、物力，开发各种废旧塑料回收利用的关键
技术，致力于降低塑料回收再用的成本的开发其合适的应用领域。
目前，德国每年有20万吨的pvc垃圾，其中30%在焚化炉里燃烧，烧得人心惶惶，法
... 阅读全帖 |
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w********h
发帖数: 12367 | 24 各国国情决定废旧塑料回收处理方法不同
世界合成树脂的产量已达2亿t，大量消费后塑料的处理问题已成为当今地球环
境保护的热点。目前，消费后塑料的处理有下述几种途径：1、填埋;2、焚烧;3、堆肥
化;;4、回收再生;5、采用降解塑料。
在城市塑料固体废弃物处理方面，目前主要采用填埋、焚烧和回收再利用三种方法
。因国情不同，各国有异，美国以填埋为主，欧洲、日本以焚烧为主。采用填埋处理，
因塑料制品质大体轻，且不易腐烂，会导致填埋地成为软质地基，今后很难利用。采用
焚烧处理，因塑料发热量大，易损伤炉子，加上焚烧后产生的气体会促使地球暖化，有
些塑料在焚烧时还会释放出有害气体而污染大气。采用回收再用的方法，由于耗费人工
，回收成本高，且缺乏相应的回收渠道，目前世界回收再用仅占全部塑料消费量的15%
左右。
但因世界石油资源有限，从节约地球资源的角度考虑，塑料的回收再用具有重大的
意义。为此，目前世界各国都投入大量人力、物力，开发各种废旧塑料回收利用的关键
技术，致力于降低塑料回收再用的成本的开发其合适的应用领域。
目前，德国每年有20万吨的pvc垃圾，其中30%在焚化炉里燃烧，烧得人心惶惶，法
... 阅读全帖 |
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J*******3
发帖数: 1651 | 25 物理学年谱
公元前～公元元年
公元前650～前550年，古希腊人发现摩擦琥珀可使之吸引轻物体；发现磁石吸
铁。
公元前480～前380年间战国时期，《墨经》中记有通过对平面镜、凹面镜和凸
面镜的实验研究，发现物像位置和大小与镜面曲率之间的经验关系(中国 墨子和墨子学
派)。
公元前480～前380年间战国时期，《墨经》中记载了杠杆平衡的现象(中国 墨
子学派)。
公元前480～前380年间战国时期，研究筑城防御之术，发明云梯(中国 墨子学
派)。
公元前四世纪，柏拉图学派已认识到光的直线传播和光反射时入射角等于反射
角。
公元前350年左右，认识到声音由空气运动产生，并发现管长一倍，振动周期
长一倍的规律(古希腊 亚里士多德)。
公元前三世纪，实验发现斜面、杠杆、滑轮的规律以及浮力原理，奠定了静力
学的基础(古希腊 阿基米德)。
公元前三世纪，发明举水的螺旋，至今仍见用于埃及(古希腊 阿基米德)。
公元前250年左右，战国末年的《韩非子·有度篇》中，有“先王立司南以端
朝夕”的记载，“司南”大约是古人用来识别南北的器械(或为指南车，或为磁石指南
勺)。《论衡》叙述司南形同水勺，磁勺柄自... 阅读全帖 |
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o*****y
发帖数: 699 | 26 11101433 彭君 中南大学 “补丁”马氏过程
及其相关问题的研究 A0110 青年科学基金项目 22
2012-1-1 2014-12-31
2 11101434 徐勇 中南大学 无限时滞随机泛
函微分方程及其在种群动力系统中的应用 A011003 青年科学基金项目
22 2012-1-1 2014-12-31
3 11101435 周岳 中南大学 三类常数项恒等
式的数学机械化研究 A0116 青年科学基金项目 22
2012-1-1 2014-12-31
4 11102239 李地元 中南大学 ... 阅读全帖 |
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m*****n
发帖数: 1076 | 27 原文：http://tieba.baidu.com/p/2235120798?pn=2
下面我们讲讲毒蛇，特别是那些主动追着人咬的大毒蛇，它们不是吃人，而是咬人，但
是一些毒蛇的毒素如此歹毒，让人生不如死，将人折磨到极限。由于这种情况在现实中
发生的概率相对大些，所以哪些生活在有蛇出没地方的人们要注意下这段，事先提醒，
千万别养毒蛇做宠物，特别是大的蛇
只要有肉，都可以成为美食，对野生动物而言，被吃的危险，莫甚于中国，因此在野外
遇到吃人大蛇、巨蜥、鳄鱼的概率估计比中500万大奖还低，但是遇到蛇的概率却十分
大，不论是谁，我相信一生都会在野外遇到至少一次蛇，请不要相信城市没有蛇，我就
在深圳的花坛里见过野生的眼镜蛇。可喜的是，我国尚无主动攻击性的蛇类，悲催的是
，我国是毒蛇大国，什么眼镜蛇，银环蛇、蝮蛇、水蛇、竹叶青……就生活在我们身边
，用他们的毒液安静的捕猎，其中一些狠角色的毒液，人一旦中了，基本上没救，不死
也得卸胳膊卸腿……
据传有人撒尿的时候不幸被蛇咬了小鸡鸡
当时就肿的手臂粗
结局是切掉了
蛇的毒素作用很复杂，大部分是蛋白质酶，小部分是多肽，如果硬要分，1、血液循环
毒素。... 阅读全帖 |
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wh
发帖数: 141625 | 28 http://blog.sina.com.cn/s/blog_5e6e0d82010150ao.html?tj=1
苏东坡独家养生秘诀
秦四晃
2013-01-21 04:37:47
天下一太平，人就讲养生，眼下电视上这一类的大师如雨后春笋，搞得大爷大妈们从早
到晚功课做不完，药瓶子倒不清。
养生男女有别，男同胞更注重激发和加固身体内部，而女人们热衷的是脸面的光鲜靓丽
。男人养生又分两类，一类是但求长生不老，为长寿宁肯冷落妻室、清心寡欲；另一类
，当然也希望身体强健多活几年，但根本的目的在于壮阳，在于能持久地威武雄起而金
枪不倒。
闲来读苏轼的随笔杂记，发现 东坡先生也好养生之道。在他的传世大作之外，关于如
何养生，连篇累牍又颇有见地。譬如他传授朋友张鹗一味人生处世妙方：无事以当贵，
早寝以当富，安步以当车，晚食以当肉。仔细全面了解了苏大人的养生高论后，察觉其
字里行间潜藏着心理上的纠结。先生纠结什么呢？纠结长生不老与纵欲伤身的相抵相悖
。纠结之余，先生又找不到好法子来解决这一对矛盾，于是只好无奈地感叹：“养生难
在去欲”。
东坡一生并不肆意滥情风流，但身边也不乏年轻女子陪伴，除了昂首... 阅读全帖 |
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