C********4
发帖数: 308 | 1 一个条件性细胞剔除模式小鼠的诞生 (2013-02-22 18:10:22)转载▼
标签： talen 创业 大鼠基因敲除 基因敲除 杂谈 分类： 个人随笔
对于基因敲除（gene knockout）小鼠大家并不陌生，比如我们想要研究一个基因
在体内的功能，我们就可以把这个基因从小鼠体内敲除掉。而有的时候我们除了关心一
个基因的功能外，还想知道表达这个基因的细胞在体内是干嘛的。比如，我们想知道B
细胞是干什么的，胰岛细胞是干什么的？我们可以从小鼠体内把这些细胞清除掉（也叫
细胞剔除，cell depletion），一看不能产生新抗体了，或是胰岛素没了，血糖升高器
官衰竭了，我们就可以恍然大悟说：“你看，胰岛细胞是产生胰岛素的，B细胞是产生
抗体的”。然后就可以发文章到CNS（Cell, Nature, Science）了。当然这些都被别人
发现过了，是我们没有赶上好时代呀。
那怎样才能在体内把一群细胞清除掉呢？方法可能很多，但也真不多。这里我讲一
个非常简单的方法，就是白喉毒素介导的细胞剔除。白喉毒素（Diphtheria toxin, 简
称DT）大... 阅读全帖 |
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T******e
发帖数: 18290 | 2 一半脑细胞来自人类的小鼠，比同类更聪明
环球科技观光团 发表于 2014-12-04 08:00
（NoahTsang/译）有一半大脑细胞都来自人类的小鼠已经被创造出来了，这些小家伙比
它们的兄弟姐妹都要聪明。对此，精灵鼠小弟（Stuart Little）会怎么看呢？
这个想法可不是在模仿小说里的情节，通过对小鼠的整个脑部而非培养皿中的细胞进行
研究，我们得以更好地了解人类的脑部疾病。
被改造过的小鼠仍然拥有小鼠的神经元——这些负责“思考”的细胞占据了它们脑细胞
中半数左右。但它们脑中用于支撑神经元的神经胶质细胞几乎全都属于人类细胞。
“这本质上还是一个鼠脑，而非人脑。”纽约罗彻斯特大学医学中心（University of
Rochester Medical Center）的史蒂夫·古德曼（Steve Goldman）解释说，“但脑中
所有非神经元的细胞都属于人类。”
喧宾夺主
古德曼的研究团队从捐赠的人类胎儿当中提取了未分化的神经胶质细胞。他们把这些细
胞注射到小鼠幼仔体内，在那里它们将长成星形细胞（astrocytes），一种星形的神经
胶质细胞。
此后一年之内，鼠类的神经胶质细... 阅读全帖 |
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f***y
发帖数: 4447 | 3 美国新冠疫苗开发为何受阻？缺试验所需小鼠
https://www.guancha.cn/internation/2020_03_26_543931.shtml
2020-03-26 16:14:21
字号：A- A A+
来源：第一财经
最后更新: 2020-03-26 16:29:39
新冠疫情在美国爆发以来，全美的实验室都在争分夺秒地研制相关疫苗。如今，他们面
临的一个窘境是：有足够的经费、足够的专业科研人员，然而，却没有足够的疫苗试验
所需的小鼠。
“10年前在SARS爆发期间，我们研制疫苗时曾经使用过一种转基因小鼠做实验，当时不
可能有足够的经费一直供养着这些小鼠，我就提取了当时那批小鼠的精子样本冻在冰箱
里，现在我们把这些小鼠精子提供给能够生产相同基因小鼠的实验室，他们可以通过人
工授精的形式，生产出试验新冠肺炎疫苗所需的小鼠。”艾奥瓦大学医学院新冠肺炎专
家普尔曼教授（Stanley Perlman）告诉第一财经记者。
据美国约翰斯·霍普金斯大学实时监测系统统计，目前美国新冠肺炎确诊病例增至
68572例，死亡1031例。
与众不同的新冠疫苗试验所需转基因小鼠
缅因州的杰克... 阅读全帖 |
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f***y
发帖数: 4447 | 4 http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2020/3/437221.shtm
中国科学家在体外重构小鼠“人工胰岛”
近日，中国科学院分子细胞科学卓越创新中心曾艺研究组在实验小鼠中开展实验，成功
鉴定了小鼠胰岛中的干细胞类群，并借助干细胞体外培养的方法，获得了有功能的小鼠
“人工胰岛”（ 胰岛类器官），为下一步人体“人工胰岛”的研究提供了理论依据和
技术支持。该研究成果于北京时间3月19日发表于《细胞》。
糖尿病是威胁人类健康的三大主要慢性非传染性疾病之一，中国的糖尿病患者数量已达
全球4.3亿总病患数的1/4。因为胰岛β细胞功能失常导致胰岛素分泌不足，许多患者需
要终生使用胰岛素进行治疗。近年来，胰岛移植作为新兴的糖尿病治疗方法取得了一定
的成功，但供体胰岛的严重不足极大限制了这种方法的普及。如何源源不断地获得可用
于移植的胰岛β细胞？一种思路是利用器官或组织自身的成体干细胞，在体外“仿造”
有类似功能的器官。器官特有的成体干细胞会遵循“天然”的分化路径，在体外合适的
培养条件下通过自我更新和分化，形成该器官的功能细胞。这类基于成体干细胞获得的
“人工”器... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 5 跟随欧美实验室关门大潮后，实验室动物也被卷入到这场疫情中。考虑到动物护理资源
短缺和研究中断的可能性，全球各地的多所大学和研究所要求实验室科研人员只保留他
们需要的小鼠，冷冻有价值或独特品系的胚胎、对其他的实验动物实施安乐死。
宾夕法尼亚大学Perelman医学院的微生物免疫学家Shin不得不向实验室主管传达这个坏
消息：尽快安乐死200只小鼠（超过研究动物的四分之三）。许多小鼠都来自欧洲和亚
洲，实验室花费了数年时间才得到它们，并对其进行繁殖，以获得实验室所需的品系，
研究它们的免疫系统如何应对细菌感染。Shin说，“无论是科学角度还是情感角度，都
是令人痛心的。”
大型实验室动物管理部门的负责人说，他们需要确保其工作人员的安全以及他们所护理
的动物的福利。实验室动物管理部门需要确保动物中心的动物有足够的资源喂养，有足
够的工作人员清洁数千只实验动物并为它们提供护理。这对我们每个人来说都是一个困
难的局面，做出“对动物实施安乐死”这一决定绝非易事”。
约翰霍普金斯大学动物负责人Eric Hutchinson对此表示赞同。亲自参与实施安乐死的
Hutchinson说道：“在传染病大流行... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 6 本文献给YL
（十三）神奇的inbred
Blanche在第一天上午的课程中花了很多时间讲解一些小鼠遗传学的基本概念。其
中最重要的一个概念是近系小鼠（inbred strain）。Inbred strain 的特点是所有的基
因位点都是纯合的（homozygous）。严格的定义是经过连续二十代兄弟／姐妹交配（
brother sister crossing）的小鼠品系。由于是兄弟／姐妹交配，一旦交配的雌鼠和雄
鼠在某个位点是同样纯合的基因型，以后所有的后代在这个位点都会保持住纯合的基因型
。这样经过多代交配，小鼠所有的基因都会变得纯合。兄弟／姐妹交配是很典型的近亲繁
殖，所以一些有害的隐性基因会显露出来，导致小鼠的生育能力急剧下降，这个现象叫做
inbreeding depression。所以在inbred小鼠出现之前，不少人认为完全纯合的小鼠是不
可能培育出来的。但事实上，只要大规模交配，总能找到能够生育的小鼠，并且过了第八
代之后，小鼠中的有害等位基因往往已经被去掉了，inbreeding depression的现象也随
之消失。不同的inbred小鼠品系有专门的命 |
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S*R
发帖数: 1057 | 7 核心提示：麻省理工学院教授艾德·博伊登进行小鼠实验，试图用光来控制大脑神经，
研究光遗传学。利用光，可让小鼠满地跑，蠕虫停止摆动，猴子呼呼大睡。研究者期待
，未来这项技术能够应用在人身上，可这是否意味着，将来人类的大脑将被操控于科学
家的手上？
一只生活在实验室的小鼠，谁也说不清它在想什么，但是美国人艾德·博伊登却准确地
知道，它接下来会去做什么。
不需要魔法，也没有机关，这位麻省理工学院的教授站在玻璃箱外，只需要按下开关，
让一道光闪过。
如同灯泡会随着开关亮灭，刚刚还在精神抖擞地踱着步的小鼠，会突然困得张不开眼皮
，当即趴下进入梦乡。如果博伊登希望它“振作一下”，这只小鼠则会在一道光闪过后
，乐此不疲地在并不宽敞的“窝”里绕圈跑起步来。
“我们关注的是两件事，理解大脑，同时治疗脑部疾病。”博伊登对中国青年报记者说
。用光来控制大脑神经，这正是他所研究的新兴学科——光遗传学。
这道让小鼠满地跑的光，还曾让蠕虫停止摆动，让猴子呼呼大睡。研究者期待，未来这
项技术能够应用在人身上，让癫痫病人平静下来，让焦虑症患者甩掉不安，让阿兹海默
综合症患者记忆重现。
可是，伴随着这些看似美好的前景，... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 8 本文献给YL
（十二）从宠物到实验模型
上一篇提到了小鼠进化的历史，这一篇里我来总结一下小鼠到底怎样成为实验模型
的。有意思的是，小鼠人工饲养和交配的历史比小鼠作为实验模型的历史要早一个世纪。
这是因为有很多人把小鼠当成宠物，喜欢毛色特别，并且行为比较滑稽的小鼠。这股小鼠
宠物热起源于十九世纪的中国和日本，后来又感染了欧洲，最终到了北美。１９００年，
一个叫Abbie Lathrop的退休女教师，不甘寂寞，盘算靠养宠物鼠来捞点外快。她在麻省
的Granby开了一个mouse farm。１９００年的时候生物学出了一件大事，就是把孟德尔的
遗传定律从废纸堆里翻了出来。结果大家都一窝蜂用各种实验模型来测试孟德尔的遗传定
律。这里面有一个真正的牛人叫William E. Castle，当时在哈佛大学的Bussey 研究所。
这老兄脑子比较活，觉得宠物鼠的毛色用来验证孟德尔的遗传定律再合适不过了。正好
Bussey 研究所离Lathrop开的mouse farm 很近，所以从1902年开始Castle就买了好多宠
物鼠来做实验。这便是小鼠遗传学以至于哺乳动物遗传学的开端。而Castl |
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r****o
发帖数: 105 | 9 本文献给YL
（十四）不归之路
介绍完六月七号第一天上午的课程之后，现在我来讲讲晚上由Patrick Tam讲的
Introduction to mouse development。由于对发育知之甚少，这个讲座让我如坠五里
雾。说来惭愧，过去买过Gilbert编的Developmental Biology，但始终没读进去。这本
书虽然很权威，但是它的编排顺序却很奇怪，比如把几个脊椎动物的发育混在一起讲，
让人感觉很糊涂。Manipulating the Mouse Embryo: a laboratory manual的第二章专
门介绍小鼠的发育，非常之全面，就是挺复杂，初学者不容易理清楚脉络。从这一篇开
始，我将介绍小鼠胚胎发育的最基本过程和一些专有名词。
哺乳动物遗传学是从上个世纪初小鼠的研究开始的，但哺乳动物的胚胎发育学却
是从研究兔子开始的，时间也早了二三十年。现在我们常用的这些小鼠胚胎发育的技术
多是受了兔子胚胎发育研究的启发。上个世纪初小鼠作为实验模型之后，人们对小鼠生
殖方面的了解越来越多，所以哺乳动物胚胎发育研究逐渐转为用小鼠为模型。用小鼠来
研究胚 |
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s*****e
发帖数: 970 | 10 http://www.stcsm.gov.cn/news/detail.asp?pid=75040
乙肝、白血病、骨质疏松症、唾液腺肿瘤……这些和小老鼠八杆子打不到一块儿去的人类
疾病，可能在老鼠身上找到致病元凶。
记者今天从上海南方模式生物研究中心获悉，上海市发改委、市科委将投资1.9亿元
在张江建立一个可容纳15万只老鼠的“小鼠基因改造工厂”和“小鼠医院”，利用基因工
程技术，对小鼠进行转基因或基因敲入、剔除，帮助我们解读人类基因组“生命天书”。
为感谢小鼠们对人类的贡献，医院门口还将为小鼠立碑。
解读天书，小鼠天生是能手
据上海南方模式生物研究中心主任、上海交大医学院王铸钢教授介绍，人类基因是如
何指导一个个单细胞受精卵发育成一个个人类个体，又是怎样影响人类生老病死，是怎样
决定不同的人对环境因素反应的差异和对药效的差异？这些都是“后基因组时代”的待解
之谜。
王铸钢教授说，从生命伦理道德上讲，以人体直接作为实验对象来探索与疾病相关或
直接致病的基因功能，在世界上都是受到严格限制的35:15 11999 1] guest EXIT: Stay:3698 (guest)[57747 |
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r****o
发帖数: 105 | 11 本文献给YL
（十一）不请自来的邻居
谈完小鼠的毛色，现在又回到Blanche第一天早上关于小鼠基本知识的讲座。上这
个课之前，我对实验用小鼠的分类和进化历史比较糊涂。经过Blanche的讲座和参考一些
材料之后，才算是清楚了很多。
先丛实验用小鼠的分类说起。实验室用的小鼠学名是Mus Musculus，俗名是house
mouse（家鼠）。如果用界（kingdom）门（phylum）纲（Class）目（order）科（family
）属（genus）种（species）的分类系统。实验室小鼠属于动物界，脊索动物门（
chordata）脊椎动物亚门（vertebrata）哺乳纲（mammalia）啮齿目（rodentia）鼠科（
muridae）家鼠属（mus）家鼠种（M. musculus）。
小鼠和人有着共同的哺乳动物祖先。这种动物出没非常隐秘，长的跟现在的啮齿目
动物差不多，生活在六千五百万年前。那个时期，正好是恐龙称霸地球的时代，可以想像
哺乳动物每天都生活在恐惧之中，因为一不留神就会进了恐龙的肚子。不过哺乳动物时来
运转，小行星撞地球，气候 |
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r****o
发帖数: 105 | 12 本文献给YL
（十九）崭新的世界
六月八号晚上的讲座是由来自Texas MD Anderson Cancer Center的Richard
Behringer作的，主题是Transgenics and insertional mutants。Richard在做基因敲
除和转基因小鼠方面非常有经验，作这个报告再合适不过了。提到Richard Behringer
，我这里向做基因敲除的同学推荐一本他参与编写的书，“Mouse Phenotypes: A
Handbook of Mutation Analysis”。这本书写得极其清楚易懂，既涵盖了基因敲除老
鼠的要点和细节，又详细解释了如何对突变体进行表型分析。
言归正传，先谈谈转基因小鼠的历史背景吧。不夸张的讲，转基因小鼠技术的出
现，使得以小鼠为模型的研究进入到一个崭新的世界。有人甚至认为转基因小鼠技术的
出现是人类文明发展的一个里程碑。转基因小鼠的实验技术可以追溯到1966年，加州大
学旧金山分校的Teh Ping Lin在Science 杂志上发表文章，报道说可以显微注射牛丙种
球蛋白溶液到小鼠受精卵的前核（pr |
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l*******i
发帖数: 153 | 13 这是一个理所当然又直观的思路。
但是，人不同于小鼠，有一个伦理问题在里面，如何拿到足量的oocyte，从2C stage开
始观察，直到blastocyst，这个过程中一系列变化是否和小鼠相似呢？比如说，在小鼠
2C stage,虽然有OCT4转录，但是却不翻译的，即没有OCT4蛋白形成，这是区分
totipotency与pluripotency一个很好的marker。
另外一点，就marker而言，小鼠的ES细胞与人的ES细胞不一样，比如人的ES细胞没有
SSEA1，而小鼠ES细胞有；这个SSEA1是否可以用于区分naive和prime stage呢？似乎没
有这方面的报道，就我个人的看法，我持怀疑态度，因为将普通的人的ES/iPS诱导成
naive状态后，有的文章说，hES-specific的marker(如Tra-60,Tra-81)仍然表达，而
SSEA1不表达；而另一篇文章，直接将human fibroblast诱导成naive-like iPS cells,
后者不但拥有小鼠ES细胞的形态,而且还表达SSEA1,相反,Tra-81却没了。这两组的研究
都表明自己的naive... 阅读全帖 |
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m****g
发帖数: 530 | 14 来自上海中医药大学附属曙光医院肾内科, 肝肾疾病病证教育部重点实验室, 上海市
高校中医内科E-研究院(上海中医药大
学)的研究人员从影响生精功能相关基因的角度探讨雷公藤多甙抑制小鼠生殖功能的机
理，提出雷公藤多甙引起的小鼠生殖
功能障碍与其致生精相关基因的表达异常有关。这一研究成果近期已发表。
领导这一研究的是何立群教授，其1982年毕业于上海中医学院并获得学士学位，后曾以
高级访问学者到美国Baylor 医药
院进行中医中药对慢性肾衰抗纤维化疗效及机理的研究。何立群教授主要从事中医药防
治慢性肾脏疾病的基础和临床研
究，并做出突出贡献，2006年成为上海市医学领军人才，2007年获上海市中医药发展突
出贡献奖。
这篇文章从影响生精功能相关基因的角度探讨雷公藤多甙抑制小鼠生殖功能的机理,
将小鼠随机分为对照组、雷公藤多甙
组, 应用雷公藤多甙灌胃造成雄性小鼠生殖功能障碍, 通过与雌鼠(1:2)合笼观察怀
孕率和睾丸组织变化, 并采用基因芯片
技术观察小鼠睾丸组织的基因表达。结果发现雷公藤多甙组小鼠较对照组怀孕率明显下
降, 尤其是在8周后怀孕率为0。睾
丸曲细精管管壁 |
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l*******i
发帖数: 153 | 15 首先有一个概念要明确：目前说的ES细胞，都是in vitro culture的，与in vivo的不
一样。
ES细胞分为naive和prime两个stage
1)naive stage：ES colony在形态上看起来更“致密”，呈三维结构，对胰酶不敏感（
即胰酶消化不会诱导其凋亡）。对小鼠ES而言，naive的ES来源于inner cell mass(ICM
)。此stage的ES self-renewal更迅速，population double大概只需要12-14小时。对
于其self-renewal的维持需要LIF，stat3,BMP4等。雌性小鼠naive ES的另一个显著特
点是X chromosome reactivation,而在其他类型的细胞中有一条X chromosome是失活的
。从全能性角度来讲，naive ES是真正具有全能性的，能形成完整的个体。
2）prime stage：对小鼠而言，其来源于postimplantation epiblast,是naive stage
的下一个阶段，其形态看起来与naive ES明显不一样，呈“二维”结构，即colony... 阅读全帖 |
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M********t
发帖数: 5032 | 16 微生物影响力：医生有
望用冻干粪丸治疗肥胖
cnBeta.COM
raymon725
3小时38分钟前
用粪便制成的药丸，听起来就有些恶心。但是从科学和医学的角度上来说，它仍然是一
种值得考虑的治疗手段。据外媒Quartz报道，麻省综合医院（MGH）的研究人员，将在
20名肥胖患者身上测试冻干粪丸的疗效。疗程持续时间为六周，受试者需要在每天服下
数克的冻干粪丸，然后研究人员会追踪他们的体重。
这项研究旨在验证从其他人那里获得的肠道微生物，是否能够在“接收移植者”身上起
作用。实际上，这种疗法早已存在，并在治疗肠道感染等疾病上有所运用。
针对小鼠的实验已经显示，从人类双胞胎中的肥胖者那里贡献来的粪物质，同样也会让
小鼠变胖。（双胞胎中的一人为健康体重，另一人则超重）
那项研究中的研究人员总结到：肠道微生物之间有因与果的关系，使用这项技术或有助
于开发出防止肥胖的方法。另一份不同的报道称，肠道微生物越多，肥胖就越少。
最终，在2014年的时候，来自康奈尔大学分子生物学与遗传学系的研究人员，发现了能
够影响肥胖的微生物菌株的基因。
[编译自：BGR , 来源：Quartz] |
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r****o
发帖数: 105 | 17 本文献给YL
（九）abcdp 和毛色遗传
介绍完第一天的主要实验，现在我来谈谈第一天的讲座。六月七号早上三个小时的
讲座由Blanche 作，主要是介绍小鼠的基本常识。这三个小时里面涉及的东西挺多，其中
很有意思的一部分是介绍小鼠毛色遗传的基本知识。由于比较好观察，毛色是小鼠遗传学
最早研究的一个生理现象。对于做基因敲除老鼠的同学来说，懂一点毛色遗传的基本知识
是很有用的。比方说，确定是否拿到嵌合体小鼠（chimera）就是通过看小鼠是否有混合
的毛色。另外还可以用决定毛色的基因作为基因敲除的标记，这样光看毛色就可以知道是
杂合还是纯合的基因敲除老鼠。这样的做法可以省下很多做southern blot的时间。
先介绍毛色怎么来的。毛发的色素来源于毛囊（hair follicle）中的黑色素细胞
（melanocyte）。黑色素细胞生成并分泌出色素颗粒，而发干（hair shaft）中的髓质（
Medulla）细胞和皮质（cortex）细胞在生长过程中吸收这些色素颗粒，因此展现出颜色
。黑色素细胞生成的色素可以分为两种：真黑色素（eumelanin）和类黑色素（ |
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r*****i
发帖数: 117 | 18 我的KO小鼠spleen和liver出现肿瘤，肿瘤细胞是血液细胞来源的，我们现在想将肿瘤
细胞移植给WT小鼠，看能否生长。
小鼠都是BL6背景。
问题：
1. 受体小鼠是否还需要放射线照射？
2.如果肿瘤细胞能够在WT受体小鼠中生长，是否说明有肿瘤干细胞存在？或者至少可以
说明移植的肿瘤细胞有自我更新的能力？ |
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w*x
发帖数: 3456 | 19 这是测试标题最多多少字？
的实验已经显示，从人类双胞胎中的肥胖者那里贡献来的粪物质，同样也会让小鼠变胖
。（双胞胎中的一人为健康体重，另一人则超重） 那项研究中的研究人员总结到：肠
道微生物之间有因与果的关系，使用这项技术或有助于开发出防止肥胖的方法。另一份
不同的报道称，肠道微生物越多，肥胖就越少。 最终，在2014年的时候，来自康奈尔
大学分子生物学与遗传学系的研究人员，发现了能够影响肥胖的微生物菌株的基因。
[编译自：BGR , 来源：Quartz] |
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H********g
发帖数: 43926 | 20 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: pokerfuker (mike), 信区: Military
标 题: 盘点2017我共杀小鼠73只大鼠26只
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Dec 22 10:55:55 2017, 美东)
其中在验室杀61只小鼠，19只大鼠
在pho店杀7小鼠，6大鼠
在下室杀4小鼠
在海鲜码头杀1大鼠。 |
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r****o
发帖数: 105 | 21 本文献给YL
（四）基本功
六月七号的早上，整个课程正式开始。每天的安排都是早上由一个教授做三个小时
的讲座，下午做实验，然后晚上又是一个教授做三小时的讲座。六月七号早上的报告是
主讲老师Blanche Capel做的，主要是介绍小鼠做为实验模型动物的历史，以及小鼠遗
传学的基本知识。这个课程主要涉及小鼠的发育，遗传上的东西谈的比较少，算是一个
不足之处。Blanche的报告比较系统，介绍起来会颇费笔墨，所以我想推迟到以后的连
载中来仔细讨论。首先介绍一下六月七号第一天的实验课所教的一些基本技能。
万事开头难，要想把小鼠实验做好了，需要会一些基本功。首先一个问题是怎么避
免老鼠咬你。按照主讲老师Blanche的说法就是“you have to feel comfortable with
mice before mice feel comfortable with you”。这个说法是很有道理的。实验室
用鼠本来就是从宠物鼠繁殖而来，性情比较温和，只要不去猛烈刺激它，它就不会咬
你。如果处理老鼠的时候有足够信心，动作就不会很笨拙，这样老鼠就不会因为紧张而
乱咬。 避免刺激老鼠的一个诀窍是 |
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r****o
发帖数: 105 | 22 本文献给YL
（十七）不可能完成的任务
输卵管冲洗（oviduct flushing）是第二天实验课中的第一个实验。用这种办
法分离了0.5dpc到3.5dpc胚胎之后，下一个问题就是怎么把这些胚胎放回到小鼠体内，
使它们正常发育下去。事实上有两种办法，一种是体外培养，让胚胎自己长到囊胚的阶
段，然后放回到小鼠的子宫里，也就是胚胎子宫转移的方法（Uterine Transfer）。这
种方法比较简单，但是胚胎在体外培养的条件下最后不一定能正常发育，所以最好的办
法是把这些胚胎转移到输卵管里面。这种方法叫做胚胎输卵管转移（Oviduct Transfer
）。输卵管转移是胚胎发育学最难做的一个手术，非常需要技巧。但是这个技巧又很重
要，比如要做转基因小鼠，把注射了外源DNA受精卵放回到假孕的小鼠体内发育，就需
要用这个技术。第二天以及接下来的几天中，我反复试了多次，都没有做出来。沮丧之
余，我向Anne McLauren老奶奶讨教，结果她人家说，实在是没有什么窍门，反复练习
很多次自然就会了。 |
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l*********i
发帖数: 332 | 23 Edward Rubin, Nature, Nov 23. 2006
果蝇的遗传学非常简单，和做老鼠相比。重组率非常高，所以你可以相对容易的用重组
酶做特异性转基因。而正因
为有了容易的遗传学，所以，你可以相对容易的test各种idea。
比如我前面说过的，人们发现基因表达模式并不专一，表现为用某基因的启动子序列，
几K，假设连enhancer，去
转基因，结果transgene表达的模式与原基因常常不吻合，那么就才可能enhancer是有
几个的，转进去的时候，有
些活了，有些被沉默了。但是怎么证明呢，于是用果蝇遗传学就容易做啦，像levine做
的就是这些。但是对小鼠，
就麻烦了，首先，小鼠细胞的重组率很低，而且小鼠基因组相对复杂，举个例子，在果
蝇基因组里，你可以随便加
上一个UAS序列，很短的，驱动一个目标基因，再转一个Gal4目标蛋白，果蝇基因组里
，Gal4的transgene表达的
蛋白就可以自己找到UAS序列，驱动目标基因表达，nice阿！
用这种方法，你就可以容易的做诱导性的，专一性的，后来是热敏性的特异性表达。
但是，在小鼠里，就有问题了，你用同样的方法，表达的ga |
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M*****1
发帖数: 371 | 24 我最近用mouse monoclonal的smooth muscle actin抗体做western和immuno研究小鼠组
织，western只有一条带，在40几50处，不知道这是smooth muscle actin呢还是IgG.
因为以前用小鼠抗体研究小鼠组织的其他蛋白时，在50的地方一直都有一条很强的带，
被告之是IgG.另外immuno背景特强，即便是negative control也有较强的背景，估计也
跟IgG有关。请问我应该注意什么？是不是应该用其他host的抗体？ |
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d********0
发帖数: 318 | 25 我看到一篇文献，有几个转基因小鼠出现在文章中，该基因为A
1) A +/GFP
2) A GFP/-
3) A GFP/RA
4) A +/-
请问：
1）上述4个动物分别代表什么意思?
2）A-EGFP BAC转基因的小鼠，请问此类小鼠与一般的A-EGFP转基因小鼠，有何区别？ |
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r*****i
发帖数: 117 | 26 我负责一KO小鼠colony，这个基因和一种免疫细胞相关。
此小鼠一岁时，spleen和liver出现tumor,明显比WT的大许多，见照片。
而且腿骨非常脆，一岁甚至8个月KO小鼠的腿骨就和2岁的WT的腿骨差不多，甚至更脆。
骨髓细胞中CD11b+细胞达到90%，有粒细胞白血病的征兆，正常的一岁的WT小鼠大约60-
70%。
请问大家我如何针对性的进行研究，比如spleen，liver和骨髓细胞。
我是个新手，老板对cancer也不是很熟，而且他也经常不在实验室，飞来飞去。
谢谢 |
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f******g
发帖数: 1003 | 27 克隆小鼠的技术比较成熟了。
但是现在的能做的还是将total DNA注射受精卵细胞 （可能不太对，请指正），如果提
供total DNA的是male，那么生出来的还是male。
我想能否用在染色体的水平上操作来克隆小鼠。即去除掉某条染色体。
比如，拿到一个male小鼠的４０条染色体，去掉y染色体， 然后从这只male小鼠取出x
染色体，pool them， 注射受精卵细胞,then a female will be born.
a single male can generate a female by himself.
可行吗? |
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f******g
发帖数: 1003 | 28 克隆小鼠的技术比较成熟了。
但是现在的能做的还是将total DNA注射受精卵细胞 （可能不太对，请指正），如果提
供total DNA的是male，那么生出来的还是male。
我想能否用在染色体的水平上操作来克隆小鼠。即去除掉某条染色体。
比如，拿到一个male小鼠的４０条染色体，去掉y染色体， 然后从这只male小鼠取出x
染色体，pool them， 注射受精卵细胞,then a female will be born.
a single male can generate a female by himself.
可行吗? |
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b*****m
发帖数: 438 | 29 因为缺乏特异性阻断剂，就用多克隆抗体作为ST6GAL2 (ST6 Beta-Galactoside Alpha-
2,6-Sialyltransferase 2)阻断剂，双侧海马脑区微量注射，体积0.75ul/侧，浓度是0
.5ug/ul，注射后发现小鼠自发活动明显减少，3小时以上不能恢复，第二天小鼠几乎全
部死亡，仅剩的几只还是活动明显较少没有恢复。但注射对照IgG（相同体积和浓度）
的小鼠无明显异常，怀疑抗体不知何故引发了急性脑水肿。。。各位大侠有没有遇到过
类似问题，引起小鼠死亡的原因可能是什么？如何避免？请指教！ |
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b*****m
发帖数: 438 | 30 因为缺乏特异性阻断剂，就用多克隆抗体作为ST6GAL2 (ST6 Beta-Galactoside Alpha-
2,6-Sialyltransferase 2)阻断剂，双侧海马脑区微量注射，体积0.75ul/侧，浓度是0
.5ug/ul，注射后发现小鼠自发活动明显减少，3小时以上不能恢复，第二天小鼠几乎全
部死亡，仅剩的几只还是活动明显较少没有恢复。但注射对照IgG（相同体积和浓度）
的小鼠无明显异常，怀疑抗体不知何故引发了急性脑水肿。。。各位大侠有没有遇到过
类似问题，引起小鼠死亡的原因可能是什么？如何避免？请指教！ |
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发帖数: 1 | 31 其中在验室杀61只小鼠，19只大鼠
在pho店杀7小鼠，6大鼠
在下室杀4小鼠
在海鲜码头杀1大鼠。 |
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o***s
发帖数: 42149 | 32 近日,加拿大多伦多大学的Razavi等在Cell(2006,127:1123)中报告,神经系统在糖尿
病的发生中起了重要作用,在糖尿病倾向(diabetes-prone)的非肥胖糖尿病(NOD)小鼠中
,消除异常的痛觉神经元可以阻止胰岛炎和糖尿病。
研究者发现,神经肽对维持胰岛正常功能十分重要,糖尿病小鼠中神经肽的分泌
过少,导致了胰岛应激的恶性循环。含辣椒素受体(TRPV1++)的胰感觉神经元可控制胰岛
细胞炎症和胰岛素抵抗,向NOD胰腺动脉内注射神经肽P物质,可以逆转胰岛素抵抗、胰岛
炎和糖尿病,一次注射的效果长达数周。在糖尿病倾向的NOD小鼠中,消除TRPV1++神经元
可以阻止胰岛素抵抗和胰岛β细胞应激,但不能改变致病的T细胞群。
胰岛素抵抗在1型和2型糖尿病中都有重要作用,该方法可缓解胰岛素抵抗,揭示
了这两种类型的糖尿病存在相似性,神经系统在这两类糖尿病的发生中都起作用。目前,
科学家已着手在人类中开展类似研究,希望能在一年内得到结果。
■相关链接
辣椒素受体(TRPV1+)是离子通道 |
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r****o
发帖数: 105 | 33 本文献给YL
（二）梦之队
六月六号晚上，讲课老师和学生在冷泉港Beckman Neuroscience Building 的
Plimpton conference room会面，主要是相互认识，同时介绍这门课的光荣历史
和计划安排。冷泉港所开课程中历史第一悠久的是《高级细菌遗传学》，有五十
多年的历史，而第二悠久的就是《小鼠分子胚胎学》了。八十年代初的时候，转
基因老鼠技术刚刚诞生不久，Watson提议开一门课程教人做显微注射。于是
１９８３年开了第一次课，一直延续到现在，到今年已经是２４届。在二十多年
的时间里面，授课内容从单一的显微注射拓宽到小鼠胚胎发育的各种实验技术。
这门课实验部分覆盖面之广是我上课之前完全没有意识到的。有多广呢？大家可
能都熟悉一本厚厚的实验手册叫做“Manipulating the Mouse Embryo:a
laboratory manual”。这本手册描述的实验８０％我们都做过或者演示过。而且
最难最有用的实验技术我们必须自己动手做。按主讲老师Michael Shen的说法就
是，这些技术是dying technique。因为很多小鼠胚胎发育 |
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r****o
发帖数: 105 | 34 本文献给YL
（八）Matrix Reloaded
六月七号第一天实验中最重要的一个项目是胚胎子宫转移（uterine transfer）。
这个实验的目的在于把经过体外培养和修饰过的囊胚（blastocyst）放回到假孕小鼠的子
宫里，使之着床（implantation）并且正常发育。没有这个技术存在，基因敲除小鼠是绝
对做不出来的。前面提到过，Anne Mclaren一手发展了这个技术，奠定了小鼠胚胎研究的
基础。原始的文章发表在Nature上，有兴趣的同学可以查阅一下：McLaren A. and
Biggers J.D. 1958. Successful development and birth of mice cultivated in
vitro as early embryos. Nature 182:877-878。
把囊胚（blastocyst）放入子宫（uterus）本身并不能保证囊胚的正常发育，只有
当囊胚正确的着床（implantation）之后才能进一步发育。而顺利的着床（implantation
）需要怀孕雌鼠在特定时间“窗口”大量分泌一些激素。由于这种激 |
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r****o
发帖数: 105 | 35 本文献给YL
（十五）初现端倪
上一篇里，我提到了着床／近着床期（4.5dpc ～6.5dpc）。从6.5dpc开始一直到
7.5dpc，小鼠胚胎进入了原肠化期。由于小鼠胚胎此时出现的标志结构叫做原条（
primitive streak），这个时期又称为原条期（primitive streak stage）。原肠化的
定义非常模糊，因为不同动物原肠化具有不同的特征。简单的说，原肠化是指动物胚胎
从简单的囊状结构（囊胚，blastocyst），经历一系列结构重组变化，演化为具有外中
内三个胚层的复杂胚胎结构。如果把胚胎发育比喻为飞机起飞的话，原肠化期之前相当
于飞机在跑道上滑行，原肠化期则相当于飞机加速，脱离地面的一刹那。原肠化期之前
的胚胎只能算是一种热身状态，原肠化期才是胚胎真正开始成型的标志。小鼠胚胎发育
中的原肠化期在显微镜下非常好分辨，因为原肠化之后的胚胎体积突然大了很多，可以
很容易的用镊子分离出来。而原肠化期之前的胚胎在受精之后的六天左右里，体积几乎
没有太大的变化，比受精卵大不了很多。所以仅仅看体积变化，就可以看出原肠化期的
重要性。正因为这个原因，发育生物学家 |
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p*****n
发帖数: 981 | 36 ☆─────────────────────────────────────☆
lanceandfei (La Jolla的云彩) 于 (Wed Jan 24 20:47:28 2007) 提到:
Edward Rubin, Nature, Nov 23. 2006
果蝇的遗传学非常简单，和做老鼠相比。重组率非常高，所以你可以相对容易的用重组
酶做特异性转基因。而正因
为有了容易的遗传学，所以，你可以相对容易的test各种idea。
比如我前面说过的，人们发现基因表达模式并不专一，表现为用某基因的启动子序列，
几K，假设连enhancer，去
转基因，结果transgene表达的模式与原基因常常不吻合，那么就才可能enhancer是有
几个的，转进去的时候，有
些活了，有些被沉默了。但是怎么证明呢，于是用果蝇遗传学就容易做啦，像levine做
的就是这些。但是对小鼠，
就麻烦了，首先，小鼠细胞的重组率很低，而且小鼠基因组相对复杂，举个例子，在果
蝇基因组里，你可以随便加
上一个UAS序列，很短的，驱动一个目标基因，再转一个Gal4目标蛋白，果蝇基因组里
，Gal4的trans |
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g******a
发帖数: 63 | 37 最近要对wt／ko小鼠做cold room后的体温测定，看文献大家都用的是带probe的
，要插到小鼠肛门里，自己实验室以前也用过这个，但是用起来小鼠挣扎比较厉害，自
己试了短时间连续测量的话，体温读数会上升不少variation也大，想用些红外的温度
计又担心精度不够不准，而且文献里也很少用，请教大家有没有做过这方面实验的，用
的是什么仪器，如果用probe的话操作上有什么心得？先行谢过。 |
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f******g
发帖数: 1003 | 38 请教大家一个问题，我想做一个定点转基因小鼠。
比如，我想用人的p53 DNA序列替代小鼠的p53 DNA序列，还保持小鼠p53的启动子只是
把外显子改变。
请问现在的技术能做吗？复杂吗？
如果可以的话，哪位大侠能推荐些文章吗？
谢谢了 |
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f******g
发帖数: 1003 | 39 人和小鼠在基因水平上有９０%相似。但是就是那些１０%的差异导致巨大的变化。
我有个想法，应用转基因技术，能不能用上的某些基因替代小鼠上的同源基因来研究其
功能。
不知道有没有人已经这样做过了。
另外一个问题，同样应用转基因技术，能否用人的一条染色体(就一条)来替代小鼠的同
源染色体. |
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n*********o
发帖数: 210 | 40 rt，实验需要小鼠的肠道上皮细胞系， 最好是正常小鼠的colon epithelial cell
line. 可能由于正常小鼠的细胞难于培养或存活吧，我在ATCC没能找到。有用过的或见
过的请帮忙介绍下。谢谢！ |
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w*****g
发帖数: 43 | 41 首先应该确定小鼠是“生疮”，还是自己抓伤的。 相对于其他小鼠，这些小鼠有没有
表现出更多的self-grooming？ |
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o**4
发帖数: 35028 | 42 人的hESC跟小鼠ESC差别很大，
ls说的很对，人的ESC跟小鼠EpiSC非常类似，加入特定的基因之后，可以用小鼠的ES
培养液培养hESC，相当于重编程了 |
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r*****i
发帖数: 117 | 43 第一，我的对照小鼠在一岁多的时候没有一个发现tumor，但是我的KO小鼠30%出现
tumor。
第二，有的KO小鼠在8-9个月大的时候，BM里面就出现CD11b+达到90%的状况。
所以，我觉得这不是偶然现象。 |
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l****j
发帖数: 70 | 44 公司订制的抗体在wild type和knock out 小鼠组织里都检测到band了， 是小鼠问题还
是抗体问题？有人碰到过类似问题吗？ |
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m*******8
发帖数: 256 | 45 各位大侠好，我去年从KOMP购买了某个基因的targeting vector，让我们的transgenic
core做了knock out小鼠，得到heterozygous小鼠后，鉴定了半年，超过200多个pups
，仍没有纯合子小鼠。该基因是睾丸特异表达的，敲除理论上是不会致死的。更奇怪的
是后代基因型比例也不对，完全不符合孟德尔遗传定律，heterozygous的后代偏多。此
外，我还从体内取了一细胞胚胎，体外发育到囊胚，做了囊胚的genotyping，也得不到
-/-，囊胚之前的胚胎发育很正常。我用了多套引物进行过genetyping，扩出来的片段
，包括野生型和杂合子片段都经过测序验证。我很困惑，请给位大侠多多给小弟提出宝
贵意见，不胜感激。
ps：附件中是我鉴定的电泳图谱，两条带说明是杂合子，只有下面的条带说明是
野生型，只有上面的条带说明是纯合子。 最后一孔为阴性对照。 |
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c*****8
发帖数: 49 | 46 找别的实验室要来的f/f小鼠，跟某种cre小鼠杂，得到的子代全部只有wt的条带，没有
mutant的条带，拿最早的要来的f/f小鼠做genotyping也是这个结果。给的protocol写
着wt应该有一条200
多的带，mutant会有100多的带，现在所有样品200多的带扩的很亮，100多的不管什么
样品都没扩出来过。已经优化了不少pcr条件了，但是还不行。我想一定是pcr有问题，
不可能对方给的全是wt啊。
大家有没有什么建议呢？先谢谢了！ |
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f**o
发帖数: 12685 | 47 电小鼠右脑就往左走
然后声称控制小鼠大脑走迷宫 |
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g***t
发帖数: 7544 | 48 千老能不能解释一下，是不是说小鼠可以感染武汉肺炎，成为携带者？
如果是的话，武汉下水道里的老鼠就是星星之火。
小鼠和大鼠基因的区别大吗？ |
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t*c
发帖数: 6929 | 49 基因改造过的SARS易感小鼠才行。武汉病毒所的小动物实验室就是做这个的，实验用的
基因小鼠可能来自得克萨斯或者南京军事医学科学院。 |
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r****o
发帖数: 105 | 50 本文献给YL
（十）Richard Behringer的练习题
上一篇提到了小鼠的毛色。Blanche在讲课过程专门出了七道关于毛色的练习题
让我们思考。这七道题目是由MD Anderson的Richard Behringer准备的，这老哥精通小鼠
遗传学，是 “manipulating mouse embryo: a laboratory maual”的作者之一。由于实
在没有任何这方面的基础，在讨论这几个题目的时候，我完全是糊里糊涂的。现在上完课
之后，重新研习了一下毛色的基本知识，再来看这些题目，发现一点都不困难。下面就是
这些题目。
（１）albino的雌鼠和albino的雄鼠交配。子代的毛色是什么？C位点的基因型
是什么？
（２）albino的雌鼠和黑色雄鼠交配，子代全是agouti。请问亲代的A位点基因
型是什么？
（３）黑色雌鼠和褐色雄鼠交配。部分子代是冲淡的黑色和冲淡的褐色。请问亲
代的D位点基因型是什么？
（４）一只黑色的雌鼠和一只albino的雄鼠交配。所有的F1子代都是agouti。F1
子代相互交配后，F2子代有五种毛色表型, 包括agouti，albino，黑 |
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