l**********n
发帖数: 240 | 1 细胞表达GFP和shRNA，现在想用细胞免疫染色看靶蛋白水平是否下降了。
要用的二抗发光和GFP重叠。我怀疑这样行不通。
但老板告诉我，细胞固定透膜（用福尔马林和TRITON）过程中GFP被破坏了，不会影响
后面的immunumicroscropy 观察。
请问老板说的对吗？谢谢！ |
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s******r
发帖数: 2876 | 2 对吧，GFP很容易被甲醇，乙醇破坏。
细胞表达GFP和shRNA，现在想用细胞免疫染色看靶蛋白水平是否下降了。
要用的二抗发光和GFP重叠。我怀疑这样行不通。
但老板告诉我，细胞固定透膜（用福尔马林和TRITON）过程中GFP被破坏了，不会影响
后面的immunumicroscropy 观察。
请问老板说的对吗？谢谢！ |
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b******s
发帖数: 5365 | 3 我一直都是用的roche 12CA5,WB 和IP都用过，非常灵敏
你的免疫染色有阳性和阴性对照吗？做WB看不到结果的时候也应该和阳性对照一起跑。
IFA常常有假阳性，一定要有control |
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S******9
发帖数: 2837 | 4 最近做aorta的eNOS染色，用免疫荧光，elastin自显色背景很高，效果不好。然后换用
免疫组化
的方法，感觉背景还是比较高。
抗体eNOS是BD公司的，mouse。
片子是frozen 切片。
1. 免疫荧光染色：
acetone固定10分钟； 1抗 1：200稀释，2抗 goat anti-mouse 1：200稀释。
2.免疫组化：
4%paraformadehyde 10分钟固定，用的是DAKon的kit；1抗是1：200稀释，2抗是1：4K稀
释。阴性对照：只加2抗的或者用IgG，smooth muscle还是有背景；只加1抗的没有背景。
请教大家如何改进，enos有没有好的抗体推荐？
谢谢 |
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h******l
发帖数: 238 | 5 东北银在麦地这旮瘩尽是大牛咧，您来晚了还没认全。我就一糊墙蒙事的，逆风才是专家，四楼已经说得很明白了，尤其最后一段很重要。我不过另外问了个问题而已，滤泡癌不应该有淋巴结转移的。为什么诊断滤泡癌却要做那么多乳头样癌的免疫染色？为什么诊断滤泡癌却要随访降钙素？等这几个问题有答案了再来讨论比较安全。您的两个问题我可以试试：
1。光镜下区别髓样癌和其他甲状腺癌，可靠性多大？
99%的情况下，一年级病理住院医应该可以完成这个任务；另外1%，估计送UPENN的DR. LIVOLSI和香港的陈国璋大夫那里也得琢磨一会儿。
2。咱表姐夫的免疫组化：癌细胞CK19+，Galectin3+, HMBE1+, CerbB2+,P53+, Ki67+2%. 咋分析？能不能除外髓样癌？
免疫组化只能帮助形态学诊断，不能代替形态学。如果形态学怀疑乳头状癌，这些染色支持这个诊断。如果形态学怀疑髓样癌，应该做CALCITONIN和CEA。为什么髓样癌查不到上面罗列这些染色的数据？因为没有人做。上海的大夫为什么要给滤泡癌的病人做CALCITONIN血检却不做组织的CALCITONIN免疫组化？这个四楼就问了，答案只有楼 |
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j*z
发帖数: 6 | 6 因为要精确细胞计数，且希望重复计数时染色本身不变，所以免疫荧光不太合适。肯请
指教一二，怎样做多种颜色的免疫组化染色？谢谢！ |
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h******u
发帖数: 602 | 7 用石蜡切片。
以前做免疫组化检测某蛋白在肿瘤中表达的时候，正常组织和肿瘤组织相近，在一张切
片上，因此很容易比较，染色条件肯定一样，没误差。
现在检测白血病骨髓（AML)中某蛋白表达变化，用正常的骨髓做对照，没法将他们放到
一张片子上。虽然说染色条件一样，但不同时间做的染色肯定会有差别，比如同一张片
子今天和明天染色可能就有差别。如何做能最大程度的减少这种因素呢？
谢谢了。 |
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f********s
发帖数: 115 | 8 en, 工作量的问题暂不考虑，因为挑单个集落来做免疫染色和flow的工作量跟我将一个
孔的细胞吸出来做染色和flow的工作量是一样的。我也不打算将所有的96个孔都吸出来
一个一个看。这不是重点。
我问这个问题的关键在于我不知道细胞分化本身在液体培养基和methylcult 培养基中
有没有差异，在所给的细胞因子都一样的情况下。也就是说全液体（细胞可以到处飘来
飘去）和半固体（对细胞有所支持，细胞不能飘来飘去）会导致细胞分化的程度不一样
吗？
你提到Mk和粒细胞会贴壁，是因为你做过液体培养而且看到过他们贴壁了是吗？谢谢你
提供这个信息，我会留心的。不知道你对于我上面提到的问题有没有更多的了解。谢谢！
96孔一个孔一个孔的彻底清洗，要累死。何况这样所有分化cell都mix在一起，镜子底
下一个一个细胞形态辨别，计数。还得count 96孔的细胞，你自己想想有多少工作量。
大的colony有几万个细胞也不稀奇.你说mutant集落形态会有变化不好认，不错，可是
分散的单个细胞不是更难认？集落不好认，你可以挑出来做免疫染色或flowcytometry
分析phenotype。一个一个分散的单... 阅读全帖 |
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f********n
发帖数: 6465 | 9 我原来制备过一次单克隆细胞系，就是同一个质粒转染挑了15个细胞系，然后RT——
PCR，免疫染色来筛选出了一个表达很好的单克隆细胞系。
这次，因为一次要制备很多突变质粒(共8个左右）的单克隆细胞系，我实在是太累了，
累到郁闷死了。所以每一个突变质粒的转染，我就通过ＲＴ－ＰＣＲ选择后，冻存了２
个细胞系左右吧。
现在麻烦来了。
用ＧＥＮＥＴＩＣＩＮ没有死的细胞，ＲＴ——PCR也没有问题，可是免疫染色时，明
显的看到有一半的细胞没有荧光（也就是没有表达ＦＬＡＧ标签蛋白，也可以推断没有
表达我的目的膜蛋白）。
这样该怎么办啊？明显不是单克隆细胞系。 |
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t*******3
发帖数: 2005 | 11 一个具有国际影响的中国“学术不端”事件的公开调查
– “张生家案”真相还原
3.答复（1）张生家之言
在《一个具有国际影响的中国“学术不端”事件的公开调查 -“张生家案”真相还原》
的开篇“引子”里，有四个主角被点了名。他们分别是：
张生家：清华大学2013年12月引进的来自挪威2014年诺贝尔年诺贝尔生理学/医学奖得
主实验室的中年学者，
谢灿：2009年从美国海归北京大学的青年学者，
鲁白：清华大学教授，清华大学医学院常务副院长，
饶毅：北京大学讲席教授、生命科学学院院长（2007-2013）；北京生命科学研究所资
深研究员、学术副所长
之后，《科学伦理》给上面所列四位当事人发了公开问卷，限定三天内答复。
目前，收到张生家的（初步）答复。《科学伦理》曾声明“答复将被毫无修改地直接公
布“。但出于严肃科学的目的，还是提醒收到张生家的（初步）答复中可能的疏忽，并
得到立即更正。所以，《科学伦理》也把这一过程的通讯附上。
尊敬的刘主编，
请查收我的问卷回复。如有遗漏，今后补充。
祝好！
张生家
2015年11月15日
张生家，
看了你的答复。
文中有一处是否是疏忽（见红字标出）：“过表达... 阅读全帖 |
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t*******3
发帖数: 2005 | 12 一个具有国际影响的中国“学术不端”事件的公开调查
– “张生家案”真相还原
3.答复（1）张生家之言
在《一个具有国际影响的中国“学术不端”事件的公开调查 -“张生家案”真相还原》
的开篇“引子”里，有四个主角被点了名。他们分别是：
张生家：清华大学2013年12月引进的来自挪威2014年诺贝尔年诺贝尔生理学/医学奖得
主实验室的中年学者，
谢灿：2009年从美国海归北京大学的青年学者，
鲁白：清华大学教授，清华大学医学院常务副院长，
饶毅：北京大学讲席教授、生命科学学院院长（2007-2013）；北京生命科学研究所资
深研究员、学术副所长
之后，《科学伦理》给上面所列四位当事人发了公开问卷，限定三天内答复。
目前，收到张生家的（初步）答复。《科学伦理》曾声明“答复将被毫无修改地直接公
布“。但出于严肃科学的目的，还是提醒收到张生家的（初步）答复中可能的疏忽，并
得到立即更正。所以，《科学伦理》也把这一过程的通讯附上。
尊敬的刘主编，
请查收我的问卷回复。如有遗漏，今后补充。
祝好！
张生家
2015年11月15日
张生家，
看了你的答复。
文中有一处是否是疏忽（见红字标出）：“过表达... 阅读全帖 |
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w*********n
发帖数: 439 | 13 先不需要做MACS，我忘了两个最重要的染色了 （CD4, CD8)
所以胸腺，Lyn，SPL的染色就是：CD4，CD8, CD24， CD25，CD44, CD69, CD62L, TCRb
，gdTCR, NK1.1. （在上FACS之前要加PI到你的细胞里面,记住PI占一个channel，需要
你做compensation）
你在杀掉老鼠取胸腺，Lyn和SPL之前要先取外周血，染色：TCRb, CD4, CD8 |
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s*********e
发帖数: 100 | 14 最近一直在用BD的mouse-anti-mouse的eNOS抗体，效果特别差。
有没有做过小鼠脑组织eNOS染色的xdjm，推荐一个好的eNOS抗体？
非常感谢 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 15 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那... 阅读全帖 |
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n*******l
发帖数: 190 | 16 哪位大侠做过5-HT神经元的染色，求推荐一个做免疫染色好用的抗体（TPH， SERT都行
）。
非常感谢！ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 17 代LP发帖，欢迎交流指教。多谢！^_^
实验中需要标记斑马鱼幼体（D1-D4）的运动神经元，就是通过在肌肉里面的运动神经
元轴突把荧光染料注射进去（retrograde backfilling）。由于注射后的斑马鱼会用于
冰冻切片和免疫染色，同时用的抗体需要先切片然后再快速用甲醛固定，然后还要做免
疫染色，所以一般的dextran或者DiI的染料都不适用，会被洗掉。最后选择了
Invitrogen的CM-DiI，说是可以共价联接在膜蛋白上。
试了CM-DiI，确实不会被洗掉，但出现了几个问题：
1. 注射鱼的时候鱼的组织会被粘在注射用的玻璃针里面，一来会堵玻璃针，二来对鱼
造成的伤害很大。我试过用DMF、酒精以及二者的混合溶液作溶剂，全都有这个问题（
染料浓度是1 mg/ml）。其中用酒精做溶剂造成的存活率相对高一点，所以最后我一直
都用酒精作溶剂。
2. 标记运动神经元的效率下降。以前我用dextran注射的时候，只要注射到轴突支配的
肌肉里面，很容易就标记了运动神经元。现在用CM-DiI，会发现被注射的肌肉部分有很
强的荧光，但却没有进入轴突。貌似需要很精确地注射到轴突里面才行，那... 阅读全帖 |
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i***l
发帖数: 1656 | 18 我会先做ｃｏｎｆｏｃａｌ immuno fluorescence microscopy
再想看细微的亚细胞结构，或者不同刺激下的Translocation，免疫电镜可能会更好
ｌ或者电镜应 |
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e**o
发帖数: 345 | 19 以前没做过免疫方面的，现在正在努力赶上，碰到了个意外结果，
背景，
conditional 在肺里表达一个细胞因子， 高剂量flu virus致死率低于control，低剂
量，体重降低几乎一致，单是诱导该因子，体重恢复明显快于control。
结果：因为老鼠不够多，目前，只取了两个时间点，一个是体重减到最低点的钱一天
（ｄａｙ ７），和恢复阶段 ｄａｙ１０（明显好转，Ｃｔｌ 仍然差不多在最低点
），然后就是分离全１肺细胞，染色用了13个不同抗体，ｆｌｏｗ，gate 不同抗体信
号， 看ｍａｃｒｏｐａｈｇｅ， ｎｅｔｒｏｐｈｉｌ等
在day 7, 各个population 无论是总数量还是percentage 都没明显区别； 在day 10，
B（CD45+ CD3+ CD19+)细胞数和percentage 都显著高于ctl。目前，各个组只有三只
老鼠，但是结果非常一致。
这个结果明显很出乎老板意外，我也不知道该作何解释，更不知道下一步，除了做更多
老鼠confirm这个结果外，该如何进行。
欢迎各种意见和建议。谢谢。
补充下， CD4 （CD45+CD3+CD4+) populat... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 20 以前我们在做免疫荧光的时候会在目标蛋白之外再加一个抗体来标记组织的大致结构。
如果实在没有的话至少会用DAPI. 但是最近我们要做脊髓组织的染色，但是我们对神经
组织没有任何经验。DAPI估计是不行吧，因为脊髓大部分地方都没有细胞核，有核的都
是一些外围细胞。我想过用tubulin B3 又怕信号太强到时候看不出contrast.
大家对此有什么推荐？我们想看神经组织的发炎情况。但是不能用H&E staining. 谢谢！ |
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b****r
发帖数: 17995 | 21 可是可以用胶体金label抗体做一些免疫染色的，临床和科研上偶尔到也用到
不过除非是一定要搞到亚细胞结构定位的，用这个是浪费 |
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p*****n
发帖数: 981 | 22 ☆─────────────────────────────────────☆
bewithu (x-fire in the sea) 于 (Sun Dec 31 10:38:41 2006) 提到:
For regular immunofluorescence, Trition may be good enough (such as 0.1% in
PBS, 10-15 min, RT). Saponin, which is generally purified from plants, is a
much weaker detergent. It is believed that the permeabilzation effect given
by saponin is reversible, thus you need to use saponin-containing solutions
for all steps during IF (Ab incubation and washing).
The advantage is that saponin will gi |
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f******s
发帖数: 115 | 23 如题。是动物实验。实验室现有方法包括real time pcr, 免疫染色,elisa，MPO。就是
想知道，在这样的基础上（或者可以购买一些试剂盒），通过检测什么指标才能证明该
药物的抗氧化应激的作用。 |
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d******r
发帖数: 124 | 24 要做Triple immunostaining，然后用confocal照相。请问应该选择哪些dye？目前有两
种组合：Alexa Fluor 350，488和555；Alexa Fluor 488，555和633。主要纠结于第三
个dye是用UV光还是远红光，不知道哪种效果更好。显微镜型号是Zeiss LSM 5 Exciter
。本人第一次做，实在没有经验。请大家赐教！ |
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s******e
发帖数: 370 | 25 UV我曾经试过，不成功。
因为紫外光的能量太高，confocal扫又要小pinhole，时间很长，对sample损伤太大
我亲眼见到immersion oil被烧沸腾了 |
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d*********y
发帖数: 473 | 26 633挺好用的，还可以加上DAPI搞4种颜色。 |
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b*******3
发帖数: 99 | 27 膜蛋白做Western Blot需要用PNGase F去掉N端糖基?
我现在在做一个膜蛋白的Western Blot,这个膜蛋白的基因序列前辈被我加了一个FLAG
的标签构建立一个表达载体pcDNA3,然后转染到细胞HEK293中.筛选后构建了稳定的细胞系.
免疫染色,药理学都很正常.(如果没有转染成功不会有这么强的药理现象.)
抗FLAG的一抗,做Western Blot却做不出来.
是不是需要用PNGase F去掉N端糖基再做呢?有必要?
PNGase F去掉N-linked carbodydrates?和去糖基是一个意思?
谢谢
N-Glycosidase F (PNGase F) is a ~36 kDa amidase that cleaves at the
innermost N-acetylglucosamine (GlcNAc) and asparagine residues of high
mannose, hybrid, and complex oligosaccharides from N-linked glycoproteins. |
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c********r
发帖数: 1125 | 28 不过我觉得行为的文章谨慎是很重要的。
我读的有不少的行为的文章主题数据内容全是BAR。。要造假或者美化太容易了。。都
不用PHOTOSHOP。。。
而且就像RAO YI说的，传统做行为的实验室不一定接受外来人的（又不是这个圈子出来
的。），头几篇文章要打响才行。。数据不可靠就完蛋了。。。
所以我一直认为做行为的必须跟大牛名门，因为很多文章的技术含量门槛并不高。。。
当然有其他技术辅助说明问题：比如双光子，电生理等等的就好很多了。嗅觉和视觉的
领域很多实验室就是这样的，但是这个门槛条件要求都不低，小实验室是做不了的。
据我所知好像RAOYI 实验室现在的行为研究并不具备以上技术。。主要还是行为观察+
免疫染色+遗传。出文章慢可以理解。。。嗅觉很多实验室出文章也不快的。。rachel
wilson这种有绝技的实验室不算。。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 29 我的影响是GFP会损失一些荧光，但是不能count on it |
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a*****n
发帖数: 2835 | 30 你作一个试验试试不就行了马
我得经验是GFP大部分还在 |
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s******s
发帖数: 13035 | 31 //nod。
这样说吧，我有一个gfp的cell line，做过insitu, 是绿的，醋酸甲醇固定。
做过ChIP，福尔马林固定，也是绿的（肉眼可见），最高做到3% x 30min。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 32 GFP 不管用甲醇还是PFA固定都不会损失，几乎完全不会损失，你老板想当然 |
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d****7
发帖数: 109 | 33 PFA肯定不会让GFP损失，但是GFP据说不喜欢甲醇 |
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m******5
发帖数: 1383 | 34 不过，弱弱地问一下，楼主订个红色荧光二抗和GFP错开不就结了么…… |
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m*****u
发帖数: 15526 | 36 分化的单核巨噬细胞，粒细胞很多是贴壁的。光吸出培养液根本收集不到这些细胞。96孔一个孔一个孔的彻底清洗，要累死。何况这样所有分化cell都mix在一起，镜子底下一个一个细胞形态辨别，计数。还得count 96孔的细胞，你自己想想有多少工作量。大的colony有几万个细胞也不稀奇.你说mutant集落形态会有变化不好认，不错，可是分散的单个细胞不是更难认？集落不好认，你可以挑出来做免疫染色或flowcytometry分析phenotype。一个一个分散的单个细胞你怎么分析phenotype？再怎么综合数据？
slide |
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m*****u
发帖数: 15526 | 37 工作量肯定是不一样的。对于典型的集落，用不着做免疫染色和flow。或者挑几个做就
可以了。而且集落细胞数有多少，有多少集落完全可以估计。对于mix在一起的，只能
所有都做，每个集落细胞数量类型无从估计和比较。
至于在液体还是半固体中分化是否会不同，我没比较过。记得看过报道是跟液体培养有差异。差异多少不好说。即使都是半固体，methylcelluose 和软琼脂性质也不同。液体培养要换液，加fresh的细胞因子。换液可能导致细胞丢失，麻烦而且不太容易控制条件consistent。无论你用什么纯化方法，能形成集落的细胞只是其中一部分。用半固体培养基可以很方便的估计其中集落形成细胞的数量比例。不管是PBMC还是CD34。用单克隆接种要看的累死也未必能找到几个CFC。另外，单克隆细胞生长一般都会比细胞群体要差
谢！ |
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r***e
发帖数: 2539 | 38 cre 免疫荧光很难做，谁有好的antibogy推荐一个？ |
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J******9
发帖数: 736 | 39 我很少接触IHC试验，实验室新进一个抗体，老板要求看看阴性、阳性对照的染色情况。
我查询了一下，阴性对照，通常需要做：
1，空白对照（pBS替代一抗）；
2，血清替换对照：同种属动物的正常血清替换一抗；
请问“血清替换对照”，具体怎么做？是不是直接用血清液（原液）添加在组织片上，
或者是需要稀释（用什么稀释？稀释度一般是多少？）
请大拿赐教~！ |
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k*****s
发帖数: 63 | 40 一抗里加血清有时候会有意想不到的效果
所以用血清对照有其道理的，有时候可以降低只有二抗时候的非特异染色 |
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s******y
发帖数: 28562 | 41 关键要看用哪个抗体。
如果是用clonetech 的anti-dsRed， 原则上和GFP不应有cross-reaction.
而且不管厂家的数据如何，你自己应该有双重cross-reactivity test,
GFP protein + anti-RFP antibody,
以及 RFP protein + anti-GFP antibody
两个对照组。
在猴年马月之前我测试过一次，在WB结果还挺不错基本没有交叉识别。
但是免疫染色我就不知道了。你最好自己亲自测试一下。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 42 我们以前做免疫电镜的时候用过Clonetech，还行。
但是不是冷冻切片。所以不保证一定能用：） |
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r*****u
发帖数: 56 | 43 中国科学院重庆绿色智能技术研究院助理研究员、副研究员招聘
中国科学院重庆绿色智能技术研究院因工作需要，现向社会公开招聘助理研究员、副研
究员各1-2名。
主页：http://www.cigit.cas.cn/
二、任职条件
1.熟悉斑马鱼模式生物，熟练掌握斑马鱼显微注射技术和整体原位技术、免疫染色及切
片以及斑马鱼相关的分子生物学技能(熟悉分子生物学技术也可以考虑）。
2.博士毕业（国内或国外），具有较好的英语水平；
3.发表1-2篇SCI文章（助理研究员），副研究员有SCI文章3-4篇以上并有国外博士后研
究经历。
4.年龄40岁及以下，身体健康。
三、招聘程序
1.申请人通过电子邮件发送简历（包括应聘岗位、个人基本情况、教育背景、工作经历
、本人爱好、特长、联系方式等）及其它可以证明本人能力的相关资料至
k***********[email protected].
2.初选通过后将通过Email或者电话进行进一步沟通，确定候选人；
3.通过面试确定最终人选。
4. 上岗后的身份及薪酬按照中国科学院重庆绿色智能技术研究院具体规定执行。
四、联系方式：
k***********n@hotmai... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 44 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 45 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital sec... 阅读全帖 |
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l***g
发帖数: 19 | 46 日本MBL的兔多抗GFP抗体做IP，western，免疫染色都是极好的，强烈推荐 |
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t*******6
发帖数: 14 | 47 清华大学医学院苑克鑫课题组招聘技术员
本实验室隶属清华大学医学院生物医学工程系和清华大学麦戈文脑研究所，研究哺乳动
物大脑神经环路。根据发展需要，现拟招聘合同制实验室技术员1 名。
岗位：技术员1 名
应聘条件：
生物学，神经生理学、临床医学及相关专业本科及以上学历。
有责任心，有诚信，具有良好敬业精神和团队协作精神以及工作主动性。
具有实验动物（大小鼠）管理经验，熟练掌握基本的分子生物学操作，组织切片和免疫
染色等技术的申请者优先。
欢迎具有病毒制备，神经电生理尤其是脑片电生理和光学成像经验的的申请者。
工作内容：
协助开展课题研究。
请应聘者将本人简历及求职信通过Email发送至：[email protected]
/* */（邮件请
注明“应聘技术员岗位"）。面试时需提交学历及相关证明，应聘材料将予以保密，薪
酬从优。 |
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h******l
发帖数: 238 | 48 您这个猜测因素也太多了吧，把病人都吓死了，不过比较符合内科主任查房的习惯:)
我个人意见，六区淋巴结看到甲状腺组织，这个估计不是滤泡癌，很可能是乳头样癌的滤泡型(follicular variant of papillary thyroid carcinoma)，这个类型病理诊断很难，搞错的可能性比较大。甲状腺肿瘤应该先做细胞学诊断，如果排除乳头状癌，不应该做淋巴结清扫。这个病人做了淋巴结清扫，而且乳头状癌的几个免疫染色都是阳性的，不知道为什么诊断滤泡癌。Tumor marker 这个就是赚钱，没啥好讨论的。
病人男性女性，年龄多大，这些比其他因素都重要。分子病理分析几个癌基因突变对确定类型有帮助，对治疗方案也有帮助，不过美国也只有少数几个会诊中心能做。 |
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发帖数: 1 | 49 看文先做好心理准备，可能会引起不适。
研究团队对1例进行了肺移植手术的危重症新冠肺炎患者的全肺进行了活检，通过HE染
色、免疫组织化学染色和特殊染色(包括Masson染色、PAS染色和六胺银染色)对其病理
变化进行了描述。全肺组织呈弥漫性充血或部分出血坏死。右肺右叶外缘明显可见出血
性坏死。肺切面有严重的充血和出血改变。
他们首次描述了新冠肺炎危重症患者的主要病理变化。该研究展示了危重症患者的临床
病理活检，这可能为深入了解该病的发病机制和严重程度提供了依据。
截至目前，关于流行病学和临床特征的研究已不断累积。多数患者出现发热、咳嗽等症
状，但小部分患者出现急性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、感染性休克等严重
并发症。值得注意的是，目前来看，新冠肺炎的危重症患者预后差，死亡率高。
研究中这例患者66岁，2020年1月4日从武汉返回深圳，并出现高热和咳嗽症状。除8年
高血压病史外，无其他基础疾病，心功能良好。胸部X线检查可见左右肺亮度增高、多
发阴影。该例患者被诊断为新冠肺炎（危重型）和严重ARDS，并发呼吸衰竭，行肺移植
手术。
研究团队在P3实验室对肺病理组织进行了固定、脱... 阅读全帖 |
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发帖数: 233 | 50 目前表观遗传学(Epigenetics)通常被定义为基因表达通过有丝分裂或减数分裂发生了
可遗传的改变, 而DNA 序列不发生改变[1, 2]。表观遗传学的机
制主要包括DNA 甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA。DNA 甲基化(DNA methylation)是指
在DNA甲基转移酶(DNA-methyltransferases, DNMTs)的催化下, CpG 二核苷酸中的胞嘧
啶被选择性地添加甲基, 形成5-甲基胞嘧啶[3, 4]。DNA 甲基转移酶有两种, 其中
DNMT1 主要起维持甲基化的作用, 能使半甲基化的DNA 双链分子上与甲基胞嘧啶相对应
的胞嘧啶甲基化, 可参与DNA 复制双链中新合成链的甲基化[5]; 而DNMT3a 和DNMT3b
主要起形成甲基化的作用, 能在未发生甲基化的DNA 双链上进
行甲基化[6]。DNA 甲基化一般与基因的沉默相关,DNA 去甲基化则与基因的活化相关[7
~9]。
组蛋白修饰(Histone modifications) 是指组蛋白的基础氨基末端尾部突出于核小体,
常在转录后发生变化, 包括甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化等翻译后的修饰... 阅读全帖 |
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