o***s
发帖数: 42149 | 1 左下腹疼痛难忍，到医院检查后，排除了各种疾病可能。百思不得其解时，医生突然脑洞大开，发现这位患者竟是罕见的“镜面人”，五脏六腑全长反了。“其实患 者就是普通阑尾炎，但是阑尾长反了，才迟迟找不到病因。”东莞市第八人民医院医生说。近期医院已顺利为患者手术。
腹痛检查 发现“镜面人”
最近，东莞石龙的袁先生总是感觉左下腹异常疼痛，于是，他去了东莞市第八人民医院就诊。“门诊进行抗炎止痛治疗后，病情一直没有好转。”东莞市第八人民医院医生将患者收入院仔细检查。
左下腹有压痛、反跳痛，也就意味着患者已有腹膜炎特征了。但是，病因究竟是什么？医生分析，左下腹正是乙状结肠、左侧输尿管、小肠投影的位置。那很可能是乙状结肠扭转？输尿管结石？小肠引起腹膜炎？但是，奇怪的是，这些疾病可能最终都被医生一一排除了。
患 者病得稀奇，医生也是百思不得其解。“难道是镜面人。”市第八人民医院接诊医生突然脑洞大开，赶快拿起听诊器听诊心音区，发现患者右侧心音较左侧明显，跟 常人相反，随后进一步做胸片、心电图及B超等检查，确诊患者内脏与正常人完全相反，“果不其然是镜面人，而且检查确认，患者只是普通阑尾炎，迟迟找不出病 因是因为阑... 阅读全帖 |
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i***s
发帖数: 39120 | 2 昨天，一条消息在网上被传开，大致内容是：23岁的杭州女大学生生下三胞胎，找不到孩子的亲生父亲是谁。此事迅速引发网络关注和转发。
钱报记者调查发现，传言属实，女孩是杭州人，小丽（化名），今年23岁，还在外地上大学，三胞胎已经7个月大了，两个男孩，一个女孩。
三胞胎给这个家庭带来的欢乐是短暂的，接踵而来的就是烦恼，因为背后故事很复杂。
小丽说三胞胎的父亲就是学长小军（化名），但亲子鉴定的结果，却否定了小丽的说法。小丽不服，但现在小军离开了她，抚养三胞胎成了现实中最大的困难。
小丽说，她已经尽力了，她一个尚未毕业的学生要养三个孩子，压力实在太大。
抱着三胞胎求助民政局
她说，养孩子的费用已经让全家走投无路
故事被曝光缘于一条微博：“昨天单位来了三胞胎，二男一女，7个月了。妈妈未婚生子，爸爸不承认孩子，不要。一家人负担太重养不起，找民政能不能送人养……好可爱的3个宝宝，妈妈好迷茫，外婆好烦恼！投胎投得真不好！”而且还配了图片。
微博发布时间是2月17日中午，不过不久这条微博就被原作者删除了。原作者就是杭州一城区民政局的工作人员，她解释说，因为原微博里面有孩子的照片，所以删除了，但事情确实存在。... 阅读全帖 |
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B*****t
发帖数: 3012 | 3 实际计算中要做各种假设
也不是依靠一个位点就能判断出来的
但是可以判断竞争的假说之间哪个可能性更大
比如非洲人某个位点上有123456,而其他各洲人只有6
那么两种竞争假说:即某种非洲人分化出其他各洲人,和其他各洲人在这个位置都没有变
化,偏偏到了非洲这里发生了剧烈的变化,这两个假说来看,显然前者可能性更大
在许多位点反复进行这样的判断,最后会发现支持非洲人分化出其他洲人的假说占据绝
对优势,因此得出非洲起源论
非洲起源论当然不仅仅依靠基因突变的分析,化石也是一个很重要的证据
事实上科学界对所有现代人来自非洲并无异议,差别只在争论其他洲的直立人是否对现
代人的基因库作出贡献 |
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T******y
发帖数: 14506 | 4 先进的生物芯片检测平台
爱身谱™采用了博奥生物自主研发的多种生物芯片检测技术，可高通量准确的进
行DNA和蛋白质检测，基因分型和基因突变检测。
大量前沿报道的检测基因位点
爱身谱™服务检测的基因、突变位点和蛋白质来源于近15年来国内外发表于4000
多种中英文医学生物学期刊的10,000多篇中、英文文献，其中大量文献研究对象为中国
人。
爱身谱™采用的检测生物芯片中包含国内外独有的针对健康疾病风险预测研究的
专用基因检测芯片，包含1500多个疾病相关基因，3000多个疾病相关基因多态性位点，
涉及细胞代谢通路900多个，覆盖心脑血管疾病、肿瘤等九大类60余种疾病。
自动高通量的检测分析系统
爱身谱™服务中各项检测采用的生物芯片检测仪器均实现了自动化，所有检测数
据均有仪器自动产生和由电脑进行判读和质控，可在数天内实现上百份样品的检测和分
析。
博奥生物提供的生物芯片检测服务得到了国内国际行业认可，是国际上最高水平的生物
芯片检测服务提供者之一。 |
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w*********e
发帖数: 6093 | 5 尽量粗浅哈
中性选择：只有对生育有害的突变才会被淘汰。由于有明确功能的基因序列仅占总数的
少数，所以占突变多数的没有害也没啥好处的突变被保留。
稳定突变：由于可遗传突变仅仅发生在生殖细胞DNA复制时，而这个复制机制的错误率
基本没有改变，所以推断突变产生的速率稳定。---比如，比较分叉超过5百万年的人猴
复制错误率差。
多样性评估：举一种简单的。比如有十个位点，每个ATCG四种可能，那么计算的不是4
的10方后算每个个体组型的比例，而是算群体某个位点ATCG的比例，付个离散值，然后
总的来看。比如25%：25%：25%：25%肯定比90%：8%：1% ：1%杂，多样性高。
现在的人类所有基因库，只要大概10万人级别的就可以代表了。比如，宽松一点，随便
挑100万人扔火星繁衍到100亿，再来计算这个多样性，跟留在地球的60亿繁衍到100亿
的基本一样。仅仅有最终数据，你无从判断当年哪个是哪个。
优势位点的产生有赖于小群体的繁衍，比如随便挑1000个---就原始部落群来说算大的
了，分1000堆繁衍，那么多样性跟原来的比就肯定差，但这1000个小群体间的多样性差
异，却要小的多了。由此可以... 阅读全帖 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 6 http://www.mitbbs.com/article_t1/Pharmaceutical/31183283_0_1.ht
发信人: jzhang611 (jzhang611), 信区: Pharmaceutical
标 题: FDA方法的死穴是什么？
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jan 5 20:42:54 2012, 美东)
很多人（中国的和外国的）都对美国FDA特别崇拜，认为它是科学的代表。而科学又是
解决人类健康问题的唯一方法。他们希望，待以时日，用美国FDA所规定的方法，科学
家就能解决人类所面临的所有或大多数健康问题。
理论上来说科学能解决很多问题，但具体的说，科学到底能解决什么问题和人们用的科
学方法有关。人们可以通过光学显微镜只能看到细菌的结构，看不到病毒的结构。要看
到病毒的结构得用电子显微镜才行。
那么美国FDA是不是能够不负所望，解决人类健康所面临的所有或绝大多数问题呢？我
认为它不能，至少说它目前的这套方法不成。因为这套方法有很大的局限性。在这里我
就谈谈它的局限性是什么？
药物治疗疾病三个可能的方式
为了理解问题的方便，我根据治疗疾病药物，... 阅读全帖 |
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f***y
发帖数: 4447 | 7 http://www.simm.cas.cn/xwzx/kydt/201309/t20130911_3929864.html
9月12日，美国《科学》杂志-美国科学促进会（Science-AAAS）在中国科学院上海药物
研究所召开新闻发布会，介绍中科院上海药物研究所吴蓓丽研究员研究组在趋化因子受
体CCR5结构生物学领域取得重大突破性进展。相关研究成果发表在Science上，吴蓓丽
研究员为唯一通讯作者，上海药物研究所为第一单位。这也是《科学》杂志-美国科学
促进会第一次在上海召开的新闻发布会，之前仅在北京做过一次新闻发布。
CCR5是一种位于细胞表面的受体蛋白质，作为艾滋病毒共受体之一，在大多数种类
艾滋病毒感染人体免疫细胞时发挥重要作用。然而，其三维结构的解析极具挑战性，长
久以来一直困扰着国内外科学家。日前，由中国科学院上海药物研究所和美国Scripps
研究所的科学家组成的研究团队终于在该项研究中取得了突破性研究成果，成功解析了
CCR5蛋白质分子的高分辨率三维结构，并据此揭示了抗艾滋病毒感染的药物马拉维若是
如何作用于该受体分子进而阻断病毒入侵的分子机制。
“这些结构信息将帮... 阅读全帖 |
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x*****8
发帖数: 10683 | 8 学习生物，化学，和材料的同学还有一个用武之地：人造人。
1）筛选各国帅哥，美女，唱歌，跳舞人才基因和修饰位点制造文化娱乐人。
2）筛选各国数学，计算机，统计，精算人才基因和修饰位点制造数学计算人。
3）筛选各国工匠，工程师，建筑师，外科医生人才基因和修饰位点制造动手能力人。 |
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D**s
发帖数: 6361 | 9 文章来源: 钱江晚报
昨天，一条消息在网上被传开，大致内容是：23岁的杭州女大学生生下三胞胎，找不到
孩子的亲生父亲是谁。此事迅速引发网络关注和转发。
钱报记者调查发现，传言属实，女孩是杭州人，小丽（化名），今年23岁，还在外地上
大学，三胞胎已经7个月大了，两个男孩，一个女孩。
三胞胎给这个家庭带来的欢乐是短暂的，接踵而来的就是烦恼，因为背后故事很复杂。
小丽说三胞胎的父亲就是学长小军（化名），但亲子鉴定的结果，却否定了小丽的说法
。小丽不服，但现在小军离开了她，抚养三胞胎成了现实中最大的困难。
小丽说，她已经尽力了，她一个尚未毕业的学生要养三个孩子，压力实在太大。
抱着三胞胎求助民政局
她说，养孩子的费用已经让全家走投无路
故事被曝光缘于一条微博：“昨天单位来了三胞胎，二男一女，7个月了。妈妈未婚生
子，爸爸不承认孩子，不要。一家人负担太重养不起，找民政能不能送人养……好可爱
的3个宝宝，妈妈好迷茫，外婆好烦恼！投胎投得真不好！”而且还配了图片。
微博发布时间是2月17日中午，不过不久这条微博就被原作者删除了。原作者就是杭州
一城区民政局的工作人员，她解释说，因为原微博里面有孩子的... 阅读全帖 |
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y****g
发帖数: 36950 | 10 容易得癌症的基因是有遗传的，只不过看这个人生活的环境和生活方式是不是容易诱发
出来吧！
在 rs1042522 位点上携带 C 型等位基因的人群抗癌能力较强，而在该位点上携 带 G
型等位基因的人群抗癌能力弱
rs11540652，也称为arg248gln或r248q，在p53肿瘤抑制基因的一个单核苷酸多态性。
研究证实与 P53 密切相关的癌症有肝癌、肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、乳腺癌、卵
巢癌、 前列腺癌等多种常见癌症。
50%以上会出现 P53 基因的突变。不过P53过表达老鼠，表型是早衰 概括来讲，P53 基
因编码蛋白的具体功能体现在三个方面： 监控细胞的生长速度，并调动其它蛋白抑制
细胞非正常生长； 调动周围蛋白来修复受损细胞的 DNA； 如果 DNA 受损严重，P53
编码蛋白就会诱导该细胞凋亡。 以确保体内细胞维持正常生理周期。 然而，P53 抗癌
基因的多态性也决定了它抗癌功能的强弱。通过大量的研究证实 当 rs1042522 位点 C
等位基因突变为 G 时，P53 抗癌基因的抗癌功能会变弱，
：
：主要是文盲。误以为癌症遗传。 |
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y****g
发帖数: 36950 | 11 兹海默病是一种以记忆障碍、认知衰退、人格改变为主要特征的疾病。晚发性阿兹海默
病(Late-Onset Alzheimer's Disease) 是其中最常见的一种，一般在65岁之后发
病。许多因素，包括遗传因素，会影响晚发性阿兹海默病的患病几率，本检测使用了此
疾病相关的最常见的基因突变： rs429358。该位点是APOE基因上的一个多态性位点，
携带C碱基突变的会显著提高患病风险。一般APOE的分型需rs429358 和rs7412两个位点
决定，但是rs429358有时也能单独用来标记 ε4基因型（该基因型和阿兹海默病显
著相关，但是具体的作用原理尚未完全清楚）。
本解读参考资23andMe经过FDA认证的项目：https://you.23andme.com/reports/ghr.
alzheimers/
：阿兹海默有个毛的基因
： |
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y****g
发帖数: 36950 | 12 第11号染色体
APOA5
位于11号染色体上，主要在结肠、肝脏处表达。该基因编码载脂蛋白AⅤ。该受体参与
甘油三脂分解代谢、脂蛋白分解代谢、脂类转运。关联分析显示，APOA5基因上
rs662799位点上的G等位基因与饮食对体重的影响有显著的相关性。研究发现，该基因
第64位密码子上的氨基酸由色氨酸变成精氨酸时，会导致在饮食干预后个体的体重变化
不明显。
??
第7号染色体
PPARG
位于7号染色体上，在脂肪细胞、肺等处表达，编码过氧化物酶体增殖活化受体γ
。该受体参与正调控脂肪细胞分化、维持葡萄糖稳态、细胞应答胰岛素刺激等。关联分
析显示，PPARG基因上rs1801282位点上的G等位基因与饮食对体重的影响有显著的相关
性。研究发现，该基因第12位密码子上的氨基酸由丙氨酸变成脯氨酸时，会导致在饮食
干预后个体的体重变化不明显。
??
第1号染色体
APOA2
位于1号染色体上，在肝脏、肠道等处表达，编码载脂蛋白AII。该受体参与应答葡萄糖
刺激、调控胆固醇吸收等过程。关联分析显示，APOA2基因由于rs5082位点上的C等位基
因与饮食对体重的影响有显著的相关性。研究发现，CC... 阅读全帖 |
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d**********i
发帖数: 524 | 13 还有个肥胖保护基因位点！
PRDM16的rs2651899位点的等位基因A以及单倍体型AAT可能是超重肥胖发生的危险因素；
单倍体型GAC，GCT可能是超重肥胖发生的保护因素；
另：1、字母A与字母T替换2、字母C与字母G替换
AAT-TT
GAC-CT
GCT-CC
基因详情参考文献
位点：rs2651899 基因名：PRDM16
CC508 人保护因素
TT916 人危险因素
CT1428 人保护因素
我是CC。所以我了个去，我这辈子不会长胖了 我应该去随便大吃特吃。不过我对吃又
不太感冒。
：胖子喝凉水都长肉
：这句民间谚语揭示的就是遗传基因的奇妙之处 |
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y****g
发帖数: 36950 | 14 HPV疫苗是否需要。这3个位点决定
rs1311117307和rs8067378和 rs4282438描述
感染过hpv，一些细胞基因组被插入了E6和E7基因。这2个基因会持续表达。
这和浸润性宫颈癌和四例宫颈癌易感位点之间的关联（rs13117307在这两年之中，在
17q12，rs8067378在6p21.32和rs4282438和rs9277952）在中国汉族人群在日本人口调
查。人类白细胞抗原（HLA）- DPB1等位基因进行了研究与日本人群中宫颈癌风险的关
系。在接受书面知情同意后，214名无血缘关系的日本妇女与浸润性宫颈癌和288个无癌
的日本妇女被招募，并获得DNA样本（研究协议，由长崎大学的机构审查委员会批准）
。的四个单核苷酸多态性，rs8067378显示浸润性宫颈癌显著相关（P = 0.0071）。隐
性模式下，对rs8067378小G等位基因为浸润性宫颈癌的风险（比值比= 2.92，95%可信
区间为1.40-6.36；P = 0.0021）。检测宫颈癌风险之间HLA-DPB1等位基因与日本人群
中无关联。总之，我们第一次显示，据我们所知，在中国汉族人群中宫颈癌和... 阅读全帖 |
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x****6
发帖数: 4339 | 15 从编辑对DNA的效果来看，可以分为 敲除（knock-out）和 敲入（knock-in）。
敲除，故名思意就是让目标基因失去功能。这个相对容易实现。因为基因经过长期的进
化出来的精细结构，随机的删除或者添加几个碱基对(生物里的0 1）就能让目标基因
失效。
如何实现？CAS9或者其他的核酸酶，在破坏DNA双链以后，细胞会自动修复损伤。这个
修复的机制叫做非同源性末端连接（Non-homology end joining,NHEJ）。就是直接把
绳子断开的两端直接连接回去。但是这个过程不精确，大概率的会随机造成几个碱基对
的删除或者添加。那么正好就可以让基因失效。
这就是贺所采取的手段：基因敲除。
-------------------------------
第二种，敲入。和敲除相反，把一段给定的DNA序列精确的整合进入目标基因组位点。
精确是这里的关键词。敲入的结果就是编辑以后的目标基因的新序列和预先设计的要一
模一样，这就和 随机 的“敲除”形成鲜明对比。显然，敲入 要比敲除 更牛逼：你想
要什么就有什么，而不是靠运气。
如何实现？同样的，用CAS9或者其他的核酸酶切断DNA双链... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 16 印度科学家发现新型冠状病毒被基因改造证据
https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.01.30.927871v1
1月30日，bioRxiv 网站发布印度流行病学家论文，指出2019新型冠状病毒基因组中的
不规则性，表明该病毒可能是出于制造武器目的经过基因改造过，它不但是一种武器，
而且是最致命的武器。
根据印度科学家的论文 Uncanny similarity of unique inserts in the 2019-nCoV
spike protein to HIV-1 gp120 and Gag 内容显示，2019-nCoV病毒（武汉肺炎）的刺
突蛋白S蛋白的4个不连续位点插入了HIV病毒的氨基酸序列，而在S蛋白质的立体结构上
，这4个插入位点恰好与动物细胞膜上的病毒受体相互结合。即2019新型冠状病毒感染
能力与爱滋病毒一样，其毒性则仍由冠状病毒所决定。这4个插入位点在其它冠状病毒
中不存在，这么巧妙的变异是不可能在自然界中发生的，这肯定是人工设计的病毒。论
文还提到，中国科学院武汉病毒所的周鹏实验室在几天前发表的论文中，发现了... 阅读全帖 |
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d*********o
发帖数: 6388 | 17 https://www.cell.com/pb-assets/journals/research/cell/Cell_S0092-8674(20)
30262-2.pdf
子陵在听歌
Cell出版社preprint了华盛顿大学Veesler组关于SARS-CoV-2生化特性和结构生物学的
重要文章。这篇文章十分严谨也十分重要，它同时进行了生化功能研究和结构生物学研
究，给出了更高分辨率的S蛋白三聚体两种状态结构。研究反驳了网络传言如“插入论
”。研究发现不具有“插入RRAR”的病毒S蛋白具有更强的细胞结合能力。因此可以推
论，所谓的“人工合成”病毒，其实本身感染细胞的能力更低。而另一方面，它的部分
结论较McLellan组Science文章更有逻辑。
研究首先通过假病毒融合实验，证明了一个重要结论，就是SARS-CoV-2与SARS-CoV具有
几乎相同的Vero E6细胞受体细胞结合能力，这与McLellan组应用SPR得出的结论不同。
而非常有意思的是，该研究设计了一个突变体，Q677TILR SV683，这个突变体敲除了饱
受争议的4个插入氨基酸序列RRAR和furin切割位点。... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 18 牛津大学著名生物技术专家、世界顶尖生物学研究所所长Raymond Dwek教授认为新冠疫
苗研发极难成功。
Raymond Dwek 教授是著名生物技术专家，现任世界顶尖生物学研究机构:牛津大学糖生
物学研究所所长。他于2013年荣获大英帝国勋章。在此次高端研讨会上，他分享了自己
几十年的研究经验，认为新冠病毒的“高度糖基化现象”是疫苗研发难度剧增的原因。
1、新冠病毒有着庞大的结构，是高度糖基化的球形颗粒，至少有66个糖基化位点，这
么多位点想“逮准”是很难的。
2、当年，艾滋病病毒（HIV）也是“高度糖基化”的，至今35年过去了，抗HIV疫苗依
然没有取得成功，现在抗艾主要还是依靠药物。
3、疫苗其实是唤起免疫应答来狙击病毒，高度糖基化决定了这种病毒很容易变异。本
来“逮准”就难，逮到了又会再变，这当然就难上加难了。
4、HIV的糖基化位点是流感病毒的3-6倍，所以到现在还搞不出疫苗来。而新冠病毒呢
？又是HIV病毒的至少2倍以上，搞疫苗谈何容易呀。
5、相比之下，药物可能才是抑制病毒更可行的办法，这是此次抗新冠病毒中有希望取
得突破的解决办法。 |
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发帖数: 1 | 19 从新冠特点谈谈未来1-2年的情况，比预期还严重，有6个很麻烦的地方。我现在怀疑真
的可能改变未来社会形态了。
麻烦1：新冠可能是人类历史上最厉害的传染病，之一
传染病并不是致死率越高，就越厉害，如果百分百致死，那么传染效率就很低，比如埃
博拉病毒，致死率非常高，但是传播效率就很低，因为载体（人）很快就死了，没办法
继续当传播工具。
新冠在致死率和传染性之间取得了一个高效率的平衡：传染性非常高，但致死率不高不
低，恰恰让你很难受。如果强力防治，致死率就很低，但社会代价很高；如果你不管他
，传染范围很大，致死率又会急剧升高。
新冠这个特点让现在的政府、社会制度很难及时采取最有效率的措施，可以说是十分精
准地攻击了各国社会制度的弱点。所以，各国纷纷中招。
我之前写过一篇文章，结论是：现在各国的制度，根本防不住新冠的全球大爆发。无论
先出现在哪个国家，都防不住。
麻烦2：50%的新冠感染者没有症状，数量太多
无症状感染者数据不公开等相关事项，其实我在2月底就看到一些，但是咱也不敢说。
这不，人民日报挑开了，咱才敢出来聊一聊这个问题，问题比预期的要严重的多。（我
是说国外的情况，不要瞎想）
感染... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 20 听说疫苗难度很大,主要是下面几点
1、新冠病毒有着庞大的结构，是高度糖基化的球形颗粒，至少有66个糖基化位点，这
么多位点想“逮准”是很难的。
2、当年，艾滋病病毒（HIV）也是“高度糖基化”的，至今35年过去了，抗HIV疫苗依
然没有取得成功，现在抗艾主要还是依靠药物。
3、疫苗其实是唤起免疫应答来狙击病毒，高度糖基化决定了这种病毒很容易变异。本
来“逮准”就难，逮到了又会再变，这当然就难上加难了。
4、HIV的糖基化位点是流感病毒的3-6倍，所以到现在还搞不出疫苗来。而新冠病毒呢
？又是HIV病毒的至少2倍以上，搞疫苗谈何容易呀。 |
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l*********r
发帖数: 695 | 21 还好吧。这个病毒牛逼在那个spike蛋白，只要能成功中和那个蛋白的结合位点，就不
怕其他位点突变。如果病毒突变在这个位点，他自己就变弱了。因为这个蛋白和受体的
结合力非常高，基本只有一个方向突变。 |
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p****1
发帖数: 917 | 22 摘要
洗辣椒辣到手。 实验了网络搜索到的多种方法。 没有找到有效地解决方案。 不做任
何处理反而效果最好。
背景
做腌辣椒，开始戴手套洗辣椒，后来嫌麻烦，把手套摘掉了。先是小心翼翼地洗，过了
几分钟好像没事，就满不在乎的洗。 洗完了，腌好了都没事。 然后看电视，都快忘了
辣椒。突然轰的一声，双手，鼻子，嘴唇，额头，全都火辣辣地疼起来。比针扎还疼。
疼痛级别达到10级。 为什么那么多地方疼，那是因为不疼的时候擤鼻子又抓了脸。
材料
中国常做虎皮青椒的那种长条型
方法
本人文科男，不会物理化学方法，只有上百度知道，天涯问答，谷歌查询。 解决方法
不少。 一边忍受疼痛一边实验各种方法。详细如下。
水冲：完全无效
肥皂： 完全无效
洗洁精: 完全无效
洗衣粉：这是我自己病急乱投医，想着漂白剂也许有点用， 无效
牙膏： 无效还加上一点辣手，不过跟辣椒比起来差远了
芦荟胶： 不知道什么东西，没有。用有芦荟的防晒霜试了，完全无效
醋：原因是辣椒碱性，醋酸性，可以中和。 听起来不错，可是完全无效。
风油精：你没看错。有个网友说它妈妈用过，有效。 结果完全无效。还搞得一身难闻
的气味。 最倒霉的是揉眼睛... 阅读全帖 |
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d******5
发帖数: 4273 | 23 【 以下文字转载自 xiaoyaogu 俱乐部 】
发信人: deer2005 (老鹿), 信区: xiaoyaogu
标 题: 对FB,TSLA等几个牛股的一周总结和下周预期（3）
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Mar 30 16:52:05 2014, 美东)
对FB,TSLA等几个牛股的一周总结和下周预期（3）
http://mitbbs.org/pc/pccon_14439_312949.html
本周(3/24/14 - 3/28/14)小结：
大盘高位振荡，守住了1850位点。本周Energy, Utility和传统科技（MSFT, INTC, IBM
）等板块表现较好，而药股(BIIB, ALXN, GILD, CELG)、网络科技股(GOOG, PCLN, FB,
LNKD, AMZN)、大数据股(CRM, SPLK, DATA, WDAY)等板块继续严重sell off。
1、FB大幅回调，没有止跌迹象，清仓了股票，仅留少量call；
2、TSLA 下行至210位点，补了前期跳空缺口，没有仓位；
3、SPLK，CRM继续大幅下跌，进入下行通道，清仓了；
4... 阅读全帖 |
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a***a
发帖数: 8941 | 24 亲卡，其实不用这么麻烦
只要记住一个密位就是1/1000弧度就行了
要测距，只要知道一个密位对应的实际尺寸，然后乘1000，就是距离
反之，如果已知距离，除以1000就是一个密位点的实际尺寸，然后就可以用这个来量目
标的尺寸了
总之，就是距离等于密位点的尺寸乘以1000，不管是测距还是已知距离测物体尺寸都一
样，联系纽带就是1个密位对应的实际长度，跟用公制还是英制无关。
比如你图中的人，身高是1.78米，占4个密位，那就是1个密位点的实际长度是1.78/4=0
.445米，乘以1000就是距离，445米 |
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b**********a
发帖数: 930 | 25 方舟子的不平衡心理很人员理解，他应该在很多方面都很有不平衡。可以设一个很早期
就出国留学得到博士学位的人回国后（回国的时间也很早，大概在96年，那时候具有高
学位回国的学人很少），他找本科母校中国科技大学求职都不要他，这对他的打击可想
而知，此事应该对他后来的人生和价值观等都有巨大的影响。
方舟子到现在的人生有几个大事件对他影响深远。
1，2年期间（95-96）2度更换博士后老板和实验室。
博士毕业后做博士后，这在美国的高等教育体系中十分重要。博士后设置的开始愿意是
对有志于从事在大学和研究机构做faculty的人提供机会使其具有更好的研究能力，以
使得在申请教职位置时具有比较好的研究功底。具体到所谓的评估就是做完博士后以后
应该有比较好的文章发表，更好的就是在博士后期间的研究后期中可以独立（并非完全
独立，例如有了自己的课题和研究方向）申请到研究经费，哪怕就是几千或2到3为美金
的费用这对以后申请assistant professor有绝对的优势。道理很简单研究经费的获得
意味着你的研究新颖性和独特性被认可，更重要的是你未来的学术研究方向被高水平的
同行认可。这样就是学术生涯的很好起... 阅读全帖 |
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v******t
发帖数: 3404 | 26 【 以下文字转载自 Food 讨论区 】
发信人: ping81 (平), 信区: Food
标 题: 对付辣椒辣手的实验报告
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 2 23:10:04 2010, 美东)
摘要
洗辣椒辣到手。 实验了网络搜索到的多种方法。 没有找到有效地解决方案。 不做任
何处理反而效果最好。
背景
做腌辣椒，开始戴手套洗辣椒，后来嫌麻烦，把手套摘掉了。先是小心翼翼地洗，过了
几分钟好像没事，就满不在乎的洗。 洗完了，腌好了都没事。 然后看电视，都快忘了
辣椒。突然轰的一声，双手，鼻子，嘴唇，额头，全都火辣辣地疼起来。比针扎还疼。
疼痛级别达到10级。 为什么那么多地方疼，那是因为不疼的时候擤鼻子又抓了脸。
材料
中国常做虎皮青椒的那种长条型
方法
本人文科男，不会物理化学方法，只有上百度知道，天涯问答，谷歌查询。 解决方法
不少。 一边忍受疼痛一边实验各种方法。详细如下。
水冲：完全无效
肥皂： 完全无效
洗洁精: 完全无效
洗衣粉：这是我自己病急乱投医，想着漂白剂也许有点用， 无效
牙膏： 无效还加上一点辣手，不过跟辣椒比起来差远了
芦荟胶： 不知... 阅读全帖 |
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f*******n
发帖数: 696 | 27 看A片，分散注意力很有效，但也可能酿成大祸。
【 以下文字转载自 Food 讨论区 】
发信人: ping81 (平), 信区: Food
标 题: 对付辣椒辣手的实验报告
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 2 23:10:04 2010, 美东)
摘要
洗辣椒辣到手。 实验了网络搜索到的多种方法。 没有找到有效地解决方案。 不做任
何处理反而效果最好。
背景
做腌辣椒，开始戴手套洗辣椒，后来嫌麻烦，把手套摘掉了。先是小心翼翼地洗，过了
几分钟好像没事，就满不在乎的洗。 洗完了，腌好了都没事。 然后看电视，都快忘了
辣椒。突然轰的一声，双手，鼻子，嘴唇，额头，全都火辣辣地疼起来。比针扎还疼。
疼痛级别达到10级。 为什么那么多地方疼，那是因为不疼的时候擤鼻子又抓了脸。
材料
中国常做虎皮青椒的那种长条型
方法
本人文科男，不会物理化学方法，只有上百度知道，天涯问答，谷歌查询。 解决方法
不少。 一边忍受疼痛一边实验各种方法。详细如下。
水冲：完全无效
肥皂： 完全无效
洗洁精: 完全无效
洗衣粉：这是我自己病急乱投医，想着漂白剂也许有点用， 无效
牙膏： 无效还加上... 阅读全帖 |
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p*e
发帖数: 6785 | 28 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: Daos (刀丝), 信区: Military
标 题: 女大学生产3胞胎续：男友另一个女友也怀孕zz
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Feb 19 17:08:58 2016, 美东)
文章来源: 钱江晚报
昨天，一条消息在网上被传开，大致内容是：23岁的杭州女大学生生下三胞胎，找不到
孩子的亲生父亲是谁。此事迅速引发网络关注和转发。
钱报记者调查发现，传言属实，女孩是杭州人，小丽（化名），今年23岁，还在外地上
大学，三胞胎已经7个月大了，两个男孩，一个女孩。
三胞胎给这个家庭带来的欢乐是短暂的，接踵而来的就是烦恼，因为背后故事很复杂。
小丽说三胞胎的父亲就是学长小军（化名），但亲子鉴定的结果，却否定了小丽的说法
。小丽不服，但现在小军离开了她，抚养三胞胎成了现实中最大的困难。
小丽说，她已经尽力了，她一个尚未毕业的学生要养三个孩子，压力实在太大。
抱着三胞胎求助民政局
她说，养孩子的费用已经让全家走投无路
故事被曝光缘于一条微博：“昨天单位来了三胞胎，二男一女，7个月了。妈妈未婚生
子，爸爸不承认孩子，不要。一... 阅读全帖 |
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d********f
发帖数: 43471 | 29 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: mahmet (里约大冒险), 信区: Biology
标 题: 知识分子独家专访：面对质疑的韩春雨
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 17 21:05:25 2016, 美东)
独家专访：面对质疑的韩春雨
原创2016-10-18 陈晓雪、李晓明 知识分子
►韩春雨任教的河北科技大学门口。摄影：陈晓雪
内文提要：
独家专访：面对质疑的韩春雨
韩春雨NgAgo论文可重复性争议考验科学界
编者按：
5月初，《知识分子》以国际科学媒体的标准，第一时间报道依据国际科学同行
评议的学术刊物上发表的韩春雨论文以及当时多位科学家评论，并说明其是发展了荷兰
科学家的工作。此后，国内媒体和单位纷纷跟进，因为没有新的工作进展，《知识分子
》未继续报道。从网上开始有声音质疑韩春雨文章结果，《知识分子》一直保持追踪国
内外学术界最新的动态，但不依据私下匿名来源为主作报道，直到13位中国科学家公开
实名发言后，《知识分子》才有可以较为完整、公开的事实可以报道。
NgAgo实验的可重复性争议历经数月之... 阅读全帖 |
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p*****e
发帖数: 16417 | 30 【 以下文字转载自 Food 讨论区 】
发信人: parfume (月淡风清), 信区: Food
标 题: [合集] 对付辣椒辣手的实验报告
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 5 16:47:57 2010, 美东)
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ping81 (平) 于 (Tue Nov 2 23:10:04 2010, 美东) 提到:
摘要
洗辣椒辣到手。 实验了网络搜索到的多种方法。 没有找到有效地解决方案。 不做任
何处理反而效果最好。
背景
做腌辣椒，开始戴手套洗辣椒，后来嫌麻烦，把手套摘掉了。先是小心翼翼地洗，过了
几分钟好像没事，就满不在乎的洗。 洗完了，腌好了都没事。 然后看电视，都快忘了
辣椒。突然轰的一声，双手，鼻子，嘴唇，额头，全都火辣辣地疼起来。比针扎还疼。
疼痛级别达到10级。 为什么那么多地方疼，那是因为不疼的时候擤鼻子又抓了脸。
材料
中国常做虎皮青椒的那种长条型
方法
本人文科男，不会物理化学方法，只有上百度知道，天涯问答，谷歌查询。 解决方法
不少。 一边忍受疼痛一边实... 阅读全帖 |
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P******l
发帖数: 1648 | 31 这是论证过程
欢迎指出问题，继续探讨。
假设“那些”和Y染色体亚当、线粒体夏娃同时生活的人，都有同样的Y染色体亚当标记
,线粒体DNA的夏娃标记和人类DNA的第一个标记,我们可以将他们称作“共祖人” 他们
有共同的祖先
假设那些和Y染色体亚当、线粒体夏娃同时生活的人，他们有不同的Y染色体标记,不同
的线粒体DNA标记,人类DNA第一个标记位置的DNA字符代码序列不同。为了讨论方便，我
们将他们称作“不是与Y染色体亚当、线粒体夏娃有共同祖先的人”，简称“非共祖人
”。
只要有“非共祖人”参与了人类的繁衍，在常染色体上必然留下他们的DNA序列标记,
这与论据3矛盾. 所以现今全人类与非共祖人毫无血缘关系
换言之现今全人类只与共祖人有血缘关系
第一标记是位于2号染色体的长臂2q13-2q14.1上，一段789个字符的序列，起点在
108305，终点在109093。 当第一个人的2号染色体形成并具有这个标记以后，携带具有
这个同样标记的2号染色体的其他人，他们的2号染色体，只可能是通过从那位起始人的
2号染色体严格复制，才能得到，不可能由随机的方式产生。
(随机的方式概率计算: 完全相同的... 阅读全帖 |
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t*******d
发帖数: 2570 | 32 前两条我就不说了，因为确实有科学实验得出Y染色体“亚当”和线粒体“夏娃”，只
不过科学论文上没有说他们是唯一的。这一点这个网站的作者也承认了。
第三点是这个网站的作者的发明，说人的常染色体第2 染色体上有一段789个碱基序列
在全体球所有人身上是一样的，这可以证明有“唯一”的科学亚当和夏娃。这是他反驳
史上存在
那么我们来看看这一点有没有问题。人身上是有这段序列的，这是科学发现。但是更重
要的问题是作者这个这段789DNA字符在全世界所有人身上都一样的这个观点有没有科学
证明。因为如果这一段序列在全世界的人身上都不一样，那么作者的证明就没有了基础。
那么作者是怎么证明全世界的人身上的这段DNA序列都一样的呢？
想证明全世界的人身上这段序列都一样不是见简单的事，因为你显然没能力把全世界的
人身上这段序列都测一遍。那么是有实验测了几千人身上的这段序列都一样，然后推广
到全世界范围了么，作者也没有跟出这样的实验结果。
作者的推理方法如下。这出现在网站后边的一章里：下面是章节引用
“全世界人的2号常染色体上“第一标记”的789个DNA字符，是否都是相同的呢？这就
涉及到人类的常染色体有多大的差... 阅读全帖 |
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P******l
发帖数: 1648 | 33 血型的起源
血型
人类的特征有多方面的差异，其一是血型。以下的解释，包括主要血型：A 型、B 型及
O 型。
A 型和 B 型的血型组别，是根据红血球表面的不同抗原（antigen，抗原是引发免疫反
应的物质）来界定。
它们的产生是 DNA（脱氧核糖核酸）控制。
A 型、B 型及 O 型的红血球表面，均有一种称为「H 物质」的先驱物（precursor），
用来制造抗原。
A 型血是「A 型转移酶」把「N-乙酰半乳糖胺」（N-acetylgalactosamine）连接在 H
物质上；
B 型血是「B 型转移酶」把「半乳糖」（galactose）连接在 H 物质上。
O 型血是简单的位点突变（point mutation）的结果，突变大幅减少以至破坏 A 型转
移酶把 N-乙酰半乳糖胺连接在 H 物质上的能力。
注意的是，这是一个损失信息的例子，与粒子到人类进化论无关。这个失效的 A 型转
移酶，称为「循环蛋白」（circulating protein）。
O 型循环蛋白的失效程度，取决于 DNA 发生突变的位点，有些 O 型比其他 O型有较多
的 N-乙酰半乳糖胺连接在 H 物质上。... 阅读全帖 |
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y*******n
发帖数: 22 | 34 [问题] 考虑由A，C，G，T组成的字符串s=a1a2...ak,定义s的权值
为W(s)=sum(w(ai)),其中w(A)=w(T)=1,W(C)=W(G)=2.给定两个参数
c和h(h>c),我们称一组字符串是一组c-h码，如果它们满足下面两个
条件：
(1)其中每个字符串的权值大于h;
(2)只包括任何权值大于c的子串至多一次。
问(1)满足什么条件的c,h才可能有c-h码的解。
(2)给定c和h,如何找到最大的一个c-h码(包含最多字符串)。
[背景]人基因组上存在着一些所谓单核甘酸多态性(single
nucleotide
polymophism)的位点，这些位点上的核甘酸(ACTG之一)在人与人
之间是不一样的。粗略的估计，这些位点大约占整个基因组的0.1%.
根据SNP可以快速的进行基因型鉴定(genotyping)，因为基因型的
差异必然是SNP的一种。假定我们已经发现了所有的SNP，利用基因
芯片就可以进行快速的genotyping。这就是SNP TAT(tag/antitag)
系统。具体步骤是这样：
(1)在溶液中合成一些DNA片段(可看作ACTG字符串)，每个 |
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r****o
发帖数: 105 | 35 本文献给YL
（十）Richard Behringer的练习题
上一篇提到了小鼠的毛色。Blanche在讲课过程专门出了七道关于毛色的练习题
让我们思考。这七道题目是由MD Anderson的Richard Behringer准备的，这老哥精通小鼠
遗传学，是 “manipulating mouse embryo: a laboratory maual”的作者之一。由于实
在没有任何这方面的基础，在讨论这几个题目的时候，我完全是糊里糊涂的。现在上完课
之后，重新研习了一下毛色的基本知识，再来看这些题目，发现一点都不困难。下面就是
这些题目。
（１）albino的雌鼠和albino的雄鼠交配。子代的毛色是什么？C位点的基因型
是什么？
（２）albino的雌鼠和黑色雄鼠交配，子代全是agouti。请问亲代的A位点基因
型是什么？
（３）黑色雌鼠和褐色雄鼠交配。部分子代是冲淡的黑色和冲淡的褐色。请问亲
代的D位点基因型是什么？
（４）一只黑色的雌鼠和一只albino的雄鼠交配。所有的F1子代都是agouti。F1
子代相互交配后，F2子代有五种毛色表型, 包括agouti，albino，黑 |
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r****o
发帖数: 105 | 36 本文献给YL
（十三）神奇的inbred
Blanche在第一天上午的课程中花了很多时间讲解一些小鼠遗传学的基本概念。其
中最重要的一个概念是近系小鼠（inbred strain）。Inbred strain 的特点是所有的基
因位点都是纯合的（homozygous）。严格的定义是经过连续二十代兄弟／姐妹交配（
brother sister crossing）的小鼠品系。由于是兄弟／姐妹交配，一旦交配的雌鼠和雄
鼠在某个位点是同样纯合的基因型，以后所有的后代在这个位点都会保持住纯合的基因型
。这样经过多代交配，小鼠所有的基因都会变得纯合。兄弟／姐妹交配是很典型的近亲繁
殖，所以一些有害的隐性基因会显露出来，导致小鼠的生育能力急剧下降，这个现象叫做
inbreeding depression。所以在inbred小鼠出现之前，不少人认为完全纯合的小鼠是不
可能培育出来的。但事实上，只要大规模交配，总能找到能够生育的小鼠，并且过了第八
代之后，小鼠中的有害等位基因往往已经被去掉了，inbreeding depression的现象也随
之消失。不同的inbred小鼠品系有专门的命 |
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p*****n
发帖数: 981 | 37 ☆─────────────────────────────────────☆
stevenzhu (steven) 于 (Sun Feb 11 16:12:44 2007) 提到:
我已知某个蛋白的某位点是tyrosine磷酸化位点，用promega的alkaline phosphatase
40 ul加到bacteria的cell lysates里（50ml pelletes）将该蛋白去磷酸化，然后做了
ip, 再用识别该特异位点磷酸化的抗体检测，却还是有信号。重复了好几遍实验都是这
样。请问大家可能是什么原因？
☆─────────────────────────────────────☆
ankyrin (漂泊Boston) 于 (Sun Feb 11 16:49:52 2007) 提到:
也可能是你的抗体的问题，磷酸化抗体经常对非磷酸化的蛋白也有一点背景亲和力
也可能是你抗原量太大了导致的背景信号
你可以把这个位点突变掉试试
phosphatase
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lanceandfe |
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a****l
发帖数: 125 | 38 知道了一个蛋白的磷酸化位点, 也有特异抗体可以识别这个磷酸化位点. 这蛋白在细胞
里过表达后就会有这个位点的磷酸化. 请问用什麽方法找到正确的kinase? 最好是比较
简单易行的.
多谢 |
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x**2
发帖数: 255 | 39 最近一个克隆做的很郁闷，还望各位高手相助~
谢谢！
由于实验需要，要把两个DNA片断插入到昆虫细胞表达载体(pFastbac)的同一个多克隆
位点中，该表达载体内的多克隆位点有BssHII，EcoR1, Xba1和HindIII。
我要插入的片段是：
EcoR1-片段1-Nhe1（Xba1的同尾酶），和Xba1-片段2-HindIII，
我尝试过三个片段一起连接(three way ligation)，板子上长的两个点都不对（平行做
的BssHII-片段4-Nhe1，Xba1-片段2-HindIII成功得到正确质粒）。
我后来先把片段2插入到载体中，得到质粒：载体-EcoR1-Xba1-片段2-HindIII-载体。
然后再尝试把EcoR1-片段1-Nhe1插入，板子上长的两个点还是都不对，得到的质粒用双
酶切鉴定好像是自连质粒（虽然我双酶切的载体-EcoR1-Xba1-片段2-HindIII-载体）。
个人认为不是双酶切载体的问题，因为：1，EcoR1, Xba1两个酶切位点相隔50bp；如果只
有一个酶切动了质粒那么应该会有很多自连载体，而我的板子上只得到两个点。
我测序鉴定过载体 |
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x**2
发帖数: 255 | 40 谢谢回复～
我的片段1确实是在TOPO里，
我的正向primer含EcoR1位点和6个保护碱基，反向pcr primer含Nhe1和6个保护碱基。扩出的片段末端加A后连到TOPO上。
这样会有问题么？
或者我把片段1前面的酶切位点改成BssHII？这样就和片段4的酶切位点一样了。
谢谢～ |
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s********x
发帖数: 472 | 41 做分子的经验很少，限于简单clone和点突变。
最近需要把三个蛋白片段连起来，实在没有什么经验，请教板上的大牛一般这种
chimera protein怎么做。
有人建议我用一些多酶切位点的载体例如T vector或者bluescript之类，然后把三个片
段依次找好酶切位点连进去，但是我发现这三个片段可用的酶切位点很有限，而且要in
frame，很不好做；
还有策略是先酶切连接两个片段，可以用同尾酶使产物不再具有被切的危险，然后做
PCR扩增连接产物，然后再连接另外的片段，这个方案感觉快一些，但是不知道应该如
何具体做？酶切后连接后要不要纯化（用quick spin一类的column回收全部片段）？用
多少产物做下一步PCR？这种用连接产物做的PCR是否有需要特别注意的条件？
还有的策略就是用类似传统点突变的方法，先PCR出两个片段，中间有overlap，然后用
两头的primer把两个片段连接的片段P出来，不知道一般这种overlap的区域有多大？
PCR有何需要注意的？
不知道大家一般怎么做这种chimera，几种策略有何优缺点，恳请指教。万分感谢！ |
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b*****l
发帖数: 9499 | 42 【 以下文字转载自 Memory 讨论区 】
发信人: parfume (月淡风清), 信区: Memory
标 题: [合集] 对付辣椒辣手的实验报告
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 5 16:48:13 2010, 美东)
发信人: parfume (月淡风清), 信区: Food
标 题: [合集] 对付辣椒辣手的实验报告
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Nov 5 16:47:57 2010, 美东)
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ping81 (平) 于 (Tue Nov 2 23:10:04 2010, 美东) 提到:
摘要
洗辣椒辣到手。 实验了网络搜索到的多种方法。 没有找到有效地解决方案。 不做任
何处理反而效果最好。
背景
做腌辣椒，开始戴手套洗辣椒，后来嫌麻烦，把手套摘掉了。先是小心翼翼地洗，过了
几分钟好像没事，就满不在乎的洗。 洗完了，腌好了都没事。 然后看电视，都快忘了
辣椒。突然轰的一声，双手，鼻子，嘴唇，额头，全都火辣辣地疼起来。比针扎还疼。
疼痛级别达到10级... 阅读全帖 |
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a**o
发帖数: 53 | 43 看到一片paper,在操作流程中需要保护DNA，体外甲基化后，又通过退火一小段DNA上去
保留了一个特定位点的Acu I 位点没有修饰，再用Acu I去酶切。目的是只切没有甲基
化保护的位点。
我的问题是， Acu I 对甲基化修饰是不敏感的。这是为什么？谢谢。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 44 碱基保护在数量上
具体什么碱基应该是没有关系的
因为所谓“限制性酶切位点”就已经决定了除开这个识别位点以外、
上游或者下游的序列跟酶切无关
加几个碱基作为“保护”还是可以从名称上想明白为什么
“限制性内切酶”
所谓“内切”
而不是在末端切
就决定了当我们人为的把酶切位点设计在引物末端的时候需要再
加几个碱基以保证可以切得动
除非你不是直接切PCR产物
而是用TA cloning或者TOPO-Blunt end cloning先把PCR产
物放到TA/TOPO vector里面了 |
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m*********7
发帖数: 606 | 45 首先，你有没有确定这个菌的chromosome有多大？有没有你这两个酶的酶切位点？
其次，按照识别位点6个碱基来算，4096个bp才能随机出现一个EcoRI的位点，考虑正反
向的话减一半就是2048bp。你跑胶的浓度是否合适来区分切开和没切开的状态？
你的描述中并没有出现非酶切对照，你是如何判断没切开的？
另外，你的实验目的是什么？为啥要用这两个酶来切？ |
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b*******6
发帖数: 39 | 46 因为忙着找实验室，抱歉回复晚了。谢谢大家的帮助，特别是neverthink的耐心分析。
这件事情的或许起于实验设计，克隆路线的选择，引物的设计和载体的选择，引入了过
长引物，载体酶切位点过于靠近。再往前推一下，是因为自己过于相信自己，刚到一个
地方没有向周围人请教就把引物发出去了。虽然和一个高年级博士讨论过，但是没有和
老板讨论。
和老板及周围高年资同学缺乏有效的交流是最主要的原因。4个月大概只和老板交流了4
-5次，不和老板交流的原因最主要是觉得这么简单的事情没做出来，太丢人了，做出来
再和老板沟通。其实我到丁香园上翻了好多克隆失败分析的帖子，也尝试改进方法，如
加入一段片段在两个内切酶位点间。但是问题的关键是我没有向周围老板可以信任的人
或者老板询问改进方法，我的一些尝试没有得到他的认可（事实也说明只有在在内切酶
位点间插入片段是可行的，其他还有不少尝试我没说出来，比如说是否用碱性磷酸酶处
理、酶切时间长短、片段与质粒比例、连接酶连接时间长短、次序酶切与双酶切），他
是对的，博士生不是来改进技术的或者闭门造车的。几个月只做出几个克隆是一般人难
以接受的。
有一个可能也是存在的，如果... 阅读全帖 |
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y**********o
发帖数: 37 | 47 如果是我,我会选择直接合成这三个peptides的cDNA序列,两边留好酶切位点A和B,普通
PCR扩你的那600bp片段,两边加上酶切位点B和C,载体用酶A和C去切.这样三个不同的酶
切两个插入片段和一个载体,应该不难做连接.不过首先要解决你的载体问题,你选的两
个酶切位点那么近,运气好的话重复5次以上可能会得到一个克隆. |
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n****0
发帖数: 696 | 48 一般promoter就是选ATG之前1-2k的序列吧？把5'UTR也加上。那么promoter和coding
sequence之间能不能带酶切位点呢 （promoter+5'UTR+restriction site+ATG+cDNA)？
会不会影响蛋白正常表达呢？我的一个师兄说最好不要带酶切位点，或者把酶切位点设
计在ATG之后，可是感觉这样好难设计啊。想听听更多人的意见。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 49 我在网上查到一些办法，比如cold PCR富集啥的。
自己试过构建野生型和突变型质粒，然后按照1:1000到1:100梯度稀释，用sybgreen扩
增检测Tm值，然后做标准曲线。 扩增片段80bp，要检测的位点在中间。 发现A到G的突
变Tm值升高了0.5度。G到T的突变Tm值没变化。 然后用梯度稀释的比例值与Tm值做回归
，能得到R方0.95的回归曲线。但是如果加上bar值，各组Tm之间其实根本没有统计差别
。同时又由于用的是ABI7500，又是不饱和染料sybgreen，分辨率也就0.5度，这个方法
也就作罢。
后来尝试在突变位点附件做定点突变PCR，制造出酶切位点（野生型能切，突变型不能
切），结果神奇的发现药物处理第二代后，细胞中积累的突变就有50%至高了，完全不
想一开始自己想象的千分之一、万分之一。 |
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l******g
发帖数: 1145 | 50 50aa的tag的话，直接挂引物上有点太大了，我没有试过。
你要加的tag如果已经在其他质粒里的话，要么直接切，要么pcr带酶切位点扩增出来后
，先subcloning到lentivirus的表达载体里，一事两便，靠近5’和3’的msc各做一个
。5’的那个记得要有start codon。这两个质粒，以后可以用来放其他要tag的蛋白。
在克隆好带tag的lentivirus质粒后，再用pcr带酶切位点扩增你的目标蛋白，然后
subcloning进去。
注意：
1.在5’加tag的话，如果有现成酶切位点可以利用的话，可以直接subclone，不用pcr
的话，可以减少mutation的几率。
2. 3’加tag，扩增目标蛋白时，记得把stop codon去掉。
3.设计流程时，千万注意最后蛋白和tag是in frame的（连在后面的那个）！！ |
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