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s******y 发帖数: 28562 | 2 对,而且flowcytometry 都是把细胞打散了单个单个的跑过去,所以背景非常低
(背景就是缓冲液了,能有多少自发荧光?)。
而组织里面的话,一大堆有自发荧光的东西在那里摆着,别的不说,光是血液里的
红细胞就能让人欲哭无泪,荧光太强了! |
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D*a 发帖数: 6830 | 3 Hongkui Zeng的TdTomato flox. 确实很强,我们建了个全身敲除的positive对照系,
大白天老鼠都是红的,都不用做genotyping。 |
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m*****u 发帖数: 15526 | 6 查了一下,发现有好多。有的是做western和IP的,老大能不能好人做到底,给个cat
no或具体名字?那个dsred的抗体能用么?clontech给的表上是TBD, 有promotion |
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s******y 发帖数: 28562 | 8 632381 或者632380 都可以。他们正好在打折,要买赶快买:) |
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l**********1 发帖数: 5204 | 9 Water world 被轰出水来啦 哈
sunny 这身装束
BTW sunny 把人家 岩佐mm PI 收成压寨的如何
搞的都是 激动蛋白类 哈
Janet Iwasa received her Ph.D. from the University of California, San
Francisco working on actin cytoskeleton dynamics with Dyche Mullins.
she joined the faculty at Harvard Medical School in 2008.
http://cellbio.med.harvard.edu/faculty/iwasa/ |
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z****u 发帖数: 1007 | 10 tdtomato Jax 007909
zsgreen Jax007906 |
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d****d 发帖数: 214 | 13 PFA处理会减弱荧光蛋白的信号,但不会完全淬灭。其结果就是强的变弱,弱的变成看
不见。当然为了排除自发荧光,可以用GFP的抗体(我们用的是Invitrogen 的rabbit
antibody, 1:300 稀释),而且用不同于绿色的conjugate(比如说红色)。 |
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m*****u 发帖数: 15526 | 14 多谢。我这是自身免疫病老鼠,皮肤可能有autoantibodies deposition。用鼠抗可能
背景会很高。有合适的rabbit或rat抗体么? |
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s******y 发帖数: 28562 | 15 人家是大牛之后,怎么会看得上我们这些旁门左道出来的吊丝。 |
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s******r 发帖数: 2876 | 20 请问有没有转基因鼠,有GFP之类的marker,特异在线粒体
中定位的,看到jackson lab有个YFP的,但是还不available,
不是这个领域的,不知道有没有更好的,公认的GFP标记的老鼠。 |
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s******y 发帖数: 28562 | 22 Clontech 有卖的,很好使,可以分开GFP/YFP 之类。 |
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s******y 发帖数: 28562 | 24 这个问题以前有人说过,最好是YFP, 以及某个红色荧光蛋白(我忘记名字了,
但是肯定不是mCherry, 而是某种TomatoFP) |
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s******y 发帖数: 28562 | 26 Clontech 有卖的,很好使,可以分开GFP/YFP 之类。 |
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s******y 发帖数: 28562 | 28 这个问题以前有人说过,最好是YFP, 以及某个红色荧光蛋白(我忘记名字了,
但是肯定不是mCherry, 而是某种TomatoFP) |
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n****k 发帖数: 516 | 29 cerulean/CFP vs YFP vs RFP 我们常拿来做三颜色共定位,多颜色比较某个的表达量
不能比其他的高太多。 |
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s****9 发帖数: 932 | 30 Just the mice directly from JAX or breeder from your own colony.
If direct from JAX, I would say it is the compensation issue.
Cre |
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f*********0 发帖数: 861 | 31 我以前做的Rosa26细胞也是这样.这个东西有自发的翻转或删除.而且表达率还不低,拿
第一代都那样.所以我对科学真得失去了兴致,某些新的发现,其实都是假阳性导致的,可
笑的是一班"科学巨头"发表后,徒子徒生们就不得不从各个方面进行cover. |
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m******5 发帖数: 1383 | 32 这个东西一直有改进,比如后来加入了insulator 来防止transcription read through
, 没你说的那么夸张。 |
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h********n 发帖数: 4079 | 33 this is leak, it happens in almost all LoxP-STOP-LoxP system. The stronger
of the promoter it has, the more leak they might have.
transcription machinery is not like 1 or 0, it has some 0.2 or 0.8 status.
Cre |
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m******5 发帖数: 1383 | 34 Promoter本来就是一直开着的,不管是r26还是CAG还是CMV还是whatever being used
in this kind of system
这是transcription read through, 通常是因为loxp stop loxp 中的stop太弱
stronger |
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m******5 发帖数: 1383 | 35 rosa 是在rosa位点的knock in
and |
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h********n 发帖数: 4079 | 36 再说说我的看法吧.
LoxP-stop-LoxP-geneX system will leak more or less. You did not find
protein expression only means the leakage is too low for your detection.
When a LSL-geneX mouse grows to adult and Cre recombinase is introduced by
adeno or lenti, the "newly" expressed geneX will not be recognized as a
foreign protein by mouse immune system.
and |
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h********n 发帖数: 4079 | 37 I guess stronger promoter will tend to have higher chance of transcription
read through.
But I could be wrong. Correct me with ref. |
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D*a 发帖数: 6830 | 38 看哪个line吧,leak严重么?有的leak对自己的课题也没什么影响,照实写就是了,也
不会因为这个课题就不能做了。 |
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l**********1 发帖数: 5204 | 39 RE LZ
pls refer
PMID 21063464
Liu Y et al.
Tamoxifen-independent recombination in the RIP-CreER mouse. (2010).
PLoS One. 25: e13533.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21063464
>There are at least two possible explanations for
>these discrepancies.
>One possibility is that after many generations
of backcrossing to the C57BL/6 background, the expression of the
randomly integrated RIP-CreER transgene is enhanced, thus
increasing the probability of its nuclear entry, even in tamoxifenuntreated
cel... 阅读全帖 |
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H****N 发帖数: 997 | 40 OCT stands for optimum cutting temperature, is Tissue-Tek's brand name. We
use it to embed GFP-expressing tissue all the time and the signals are
maintained well. We never treat the tissues at 37 C though. |
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D*a 发帖数: 6830 | 41 请问从sucrose里面捞出来就可以用包埋剂冷冻吗,我看有的地方说要泡一泡sucrose/
包埋剂 |
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D*a 发帖数: 6830 | 44 谢谢!就是说用sucrose跟OCT混起来泡一下更好,泡多长时间呢? |
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V******t 发帖数: 444 | 47 找了一下午,也没找到。
希望是GFP/YFP等任何荧光蛋白,前面有minimal promoter 或者TATA box之类的,可
以再前边接自己想要的序列;后面有PGK之类的promoter驱动的neo/hygro/puro等任
何筛选标记。
求推荐,在线等,谢谢!! |
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b******s 发帖数: 1089 | 48 基本功能即可,能容纳large nozzle size (100 microns). 最好有laser setup可用于
大部分荧光蛋白GFP/YFP/Venus (488), mCherry, RFP (561), and CFP (405 or 436).
越便宜越好。。。谢谢! |
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P*******D 发帖数: 523 | 49 请教一下大家,我们最近develop了一个能在live cell里面定量glutathione的
fluorescent probe,大家有什么建议,可以回答什么important的biological
questions?
Invitrogen卖一个叫thioltracker violet的probe,但是这个不能定量,只能定性的看
一下GSH的变化。尽管GSH probe的文章都发烂了,也没有一个能在live cell里面定量
的。
我们develop了一个probe (ThiolQuant Green)可以很好的定量细胞里面的GSH (
reduced form only)。我们把这个probe用于confocal microscope和flow cytometry,
能很好的和cell lysate GSH measurement correlate.
相比起来redox GFP or YFP,ThiolQuant Green是直接测量reduced form GSH,而不是
measure GSSG GSH ratio。我们的probe potentially和roGFP c... 阅读全帖 |
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m***i 发帖数: 2013 | 50 就是说,蓝光照上去时,经过多长时间能检测到绿光;撤去蓝光后,荧光还能持续多长
时间。
最好有文献。非常感谢! |
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