h**********r
发帖数: 671 | 1 最近想用QIAquick Gel Extraction Kit回收一个72bp的片段，有没有人有过类似的经
验？
回收效率怎么样？回收之后做亚克隆的。
多谢！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 2 看了一下Qiagen网上的faq，好像不行，虽然没提MinElute，可是估计道理一样的：
Are QIAprep and QIAquick Spin columns interchangeable?
No. While columns from the QIAprep Spin Miniprep Kit and the QIAquick PCR
Purification- and Gel Extraction Kits are based on silica-gel-membrane
technology, each is designed to work optimally within its own kit format. In
addition, the binding capacity and DNA recovery size cut-offs of the
QIAprep and QIAquick Spin columns are different. QIAprep Spin columns bind
up to 20 ug of plasmid DNA up to |
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j****x
发帖数: 1704 | 3 很久很久没做胶回收了，但是Qiagen的Qiaquick印象中还是不错的，得率应该在50%的
样子。其实胶回收得率的关键在跑胶而不在kit，各家柱纯化kit的效率基本都在90%以
上，但是很多时候一个样品从上胶到切下来就已经损失了50%甚至更多了。
不过QIAquick有个缺点，就是溶胶buffer的用量是3倍gel slice的体积，稍微大一些的
gel slice就得分好几次离心，这点很不爽，所以后来就换成Fermentas家的GeneJET，1
倍gel slice的体积的溶胶buffer，效率也很好，还便宜。 |
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a********k
发帖数: 2273 | 6 Gel purification下限是70吧，PCR purification kit下限100，nucleotide removal
kit下限40。
胶回收短片段可以用QG buffer溶胶，加isopropanol,再用nucleotide removal的柱子
就行了。反正三个柱子都是通用 的。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 7 mini plasmid的那个柱子是最好的，吸附量最大，回收的也就最多。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 8 片段太小了，你电泳能看得清楚吗？
合成不贵的话可以直接设计好末端合成，然后直接连接。不用切的那种。 |
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a***a
发帖数: 40617 | 9 本人多次验证，gel extraction的紫柱子吸附量起码是miniprep那个蓝柱子的2倍 |
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d****i
发帖数: 2346 | 10 我没有验证，但是里面的垫料应该越后吸附量越大。 |
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s******r
发帖数: 2876 | 11 那你验证验证再说。
我没有验证，但是里面的垫料应该越后吸附量越大。 |
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S*****s
发帖数: 287 | 13 gel extraction 有两种 kit，一种是用 column 纯化，另一种是用 beads 纯化，和做
co-ip 的 beads 差不多。100bp 的小片段最好还是买那种 beads 纯化的 kit 比较好
，产量也高。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 16 我觉得QIAGEN的胶纯化kit挺烂的，洗脱体积又大，回收率又低
比较过以后我们实验室后来都用Zymo的 |
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y****m
发帖数: 37 | 17 always hate qiagen gel pure kit
recommend sigma,
just cut and spin |
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m*********7
发帖数: 111 | 18 pBluescript SK+ 用BamHI 完全单酶切后,得到的线性DNA片断(约3.0kb，没有用去磷酸
酶处理)用Qiaquick PCR purification kit纯化，纯化后的线性DNA保存在水里，在没
有DNA ligase的情况下，该DNA片断稳定么?会不会自连成环呢?
请大拿们不吝赐教，3x in advance! |
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f****n
发帖数: 114 | 19 我用的切胶回收 然后QIAquick Gel Extraction Kit |
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l**********1
发帖数: 5204 | 20 问句楼上: 用的是QIAGEN 纯化kit? QIAquick PCR Purification Kit or
Small-Scale Plasmid DNA Purification Kits etc... |
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s******a
发帖数: 472 | 21 Qiagen
QiaQuick Gel Extraction Kit |
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k****l
发帖数: 279 | 22 Qiaquick doesn't give you very clean DNA, I also keep failing in it. If you
really don't want to clone it, my gel purification from GeneClean III kit
usually works
off
Qiagen |
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R*****o
发帖数: 14902 | 23 I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
the columns for 5 times.
doesn't take a genius to figure this out
kit |
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x********e
发帖数: 35261 | 24 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
00~200mg。
实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
新kit） 大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
情况吗？
在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~ |
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x********e
发帖数: 35261 | 25 你们DNA胶回收都用的什么kit啊？效率如何？
我需要回收的DNA size在3-10kb间。我酶切2ug，跑胶（1%）回收。切下来胶质量大概1
00~200mg。
实验室有QIAGEN的kits。我试了QIAquick（旧kit），完全回收不了DNA。QIAEX II（全
新kit） 大概能回收500~800ng。根本达不到说明书上说的recovery rate。这属于正常
情况吗？
在网上搜了下，貌似QIAGEN的胶回收产品口碑不太好。我现在打算试试其他公司的产品
，希望找到一款简单又省心的产品。请克隆经验丰富的各位推荐一下~ |
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