i**o
发帖数: 76 | 1 http://www.nature.com/nmeth/journal/v8/n4s/full/nmeth.1557.html
The method for the isolation of individual cells can vary. Picking single
cells manually using a mouth pipette is the most straightforward option30,
41, although this can be time-consuming and technically challenging. Laser-
assisted microdissection or fluorescence-activated cell sorting can also be
used to isolate a specific subpopulation of cells based on cell-surface
markers or fluorescent reporters42, 43, 44, 45. Cells of higher... 阅读全帖 |
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c******r
发帖数: 3778 | 7 可以试试。不过可能用处不大。有些cell lines就是臭名昭著的团结一致，死后打不成
single cell suspension。没办法，只能多准备的cell，多pipette up and down，然
后过个filter，再上flow |
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f*********8
发帖数: 129 | 8 用pipette tip? 需要加trypsin吗？
多谢 |
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n***g
发帖数: 5027 | 11 这样肯定不行，
最好用玻璃管套一个枪头，不同的细胞换枪头就行了 |
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s**a
发帖数: 293 | 12 肯定不行。。。就别省那几个钱了，坏了project不值得
contamination |
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a******7
发帖数: 7936 | 13 很容易污染，我们实验室以前不用真空抽，污染一直控制得很好
结果今年夏天就是有人用了抽真空的，结果一下子全部污染，双门培养箱从上到下所有
的细胞全部被细菌污染。 |
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s**s
发帖数: 122 | 14 典型的得出一个结论不依赖于对照实验的那种。
您怎么证明这次的细菌污染就是因为换了一个真空抽？ |
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a******7
发帖数: 7936 | 15 大牛，说话能客气点不？
大家都是苦逼PhD上挤点时间上个论坛消遣还不忘来生物版交流实验心得
能不能不要打击新人的积极性啊
实验都忙不过来了还有空设计一个对照？
反正不用真空抽之后我的细胞一直养的好好的 |
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s**s
发帖数: 122 | 17 新人同学，不要随便下结论。您养细胞，细胞偶尔被污染是正常的，绝对不污染是不正
常的。不要因为一次细胞污染就得出一个结论真空抽导致了细胞污染。更何况楼主讨论
的是不换管子的细胞交叉污染，而不是什么细菌、酵母、真菌等等的污染。 |
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l********s
发帖数: 70 | 18
别一上来就说人家新人，不就多做了几年苦逼实验。 |
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y***i
发帖数: 11639 | 19 没火么？每次flame就不会污染了。
contamination |
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a******7
发帖数: 7936 | 21 太好笑了
叫新人不要随便下结论，
自己senior了就可以随便下结论了。
这个版的风气跟菌斑差不多了
真悲哀 |
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s**s
发帖数: 122 | 22 要有根据的下结论。新人老人都不要随便下结论。OK？
看你的逻辑思维能力，我觉得我不会再和你纠缠这么个问题了。 |
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f*c
发帖数: 2726 | 24 这个，我觉得lz的确是指容易造成不同细胞系之间交叉污染，而不是指一般的细菌污染。 |
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a******7
发帖数: 7936 | 25 我知道啊，我从另一个方面提醒一下lz控制不好的话用真空不仅仅有细胞系污染的风险
还有细菌真菌污染的风险
染。 |
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a******7
发帖数: 7936 | 26 你这个逻辑也很搞笑
大家平心静气讨论讨论问题
犯得着一上来就“典型的……”
你的结论下得够快的 |
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a*******o
发帖数: 16 | 27 我们也是不同细胞换不同的枪头，不换移液管，表示没问题 |
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x****1
发帖数: 1410 | 28 这个怎么控制阿。
握会换很多玻璃管子抽。
最近，细胞还老是污染。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 29 很多苦逼型老板，自己也是刻苦出来的，认为勤奋是科研成功的必要条件。我讨厌的那
个女AP，有一次跟我聊起来，我说创造性是最重要的，她说”No，你不懂的，我最需要
的就是好好用pipette 的人”。其实，她说的是奴工，不是科学家。如果只是要勤奋的
话，科研就成了自虐，还会有意思吗？
到底勤奋重要吗？重要，也不重要。科研就像练葵花宝典，勤奋就像自宫。当有人告诉
你，欲练神功，必先自宫。那你得好好想想。因为的确有不少例子，说明即使自宫，未
必成功；甚至不用自宫也能成功。当你听老板的话，无比勤奋地投入，最后只能换来心
酸血泪时，你会后悔的。我不相信什么“至少自己拼了全力，不后悔”之类的crap。如
果一个人总是很勤奋，又总是不成功，那得好好反思以下自己的方法甚至自己的
philosophy是否正确。同样，一个老板，整天盯着手下的人，要求勤奋工作，但手下的
人就是不怎么出好结果，那她是不是也得反思以下？可悲的是，很多老板在这个时候，
却不是坐下来好好想想，而是变本加厉push，进入恶性循环。
我以为，科研最重要的是选题（眼光），其次是创造性（方法），再次才是勤奋。没有
前两项，勤奋没有意义，因为... 阅读全帖 |
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b******s
发帖数: 1089 | 30 啥叫隽永的作品？这样的？
我在佛前求了五百年
求佛让我结一段科学缘
佛於是把我化做一千老
守在PI每天必经的lab里
面朝bench，春暖花开。。。。
希望逢着
结着愁怨的师妹
提着pipette
在lab中哀怨，
哀怨又彷徨
读完胃部是否有甚不适？ |
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d*******j
发帖数: 64 | 31 有robot的话，一个人一个下午可以加48个384板。不过你要是一年就加这么6个96孔板
的话，可能还是用multiple channel pipette快些。 |
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t****g
发帖数: 120 | 32 我最近一直在做一个gene的knockdown cell line。 用的是open biosystems的pLKO.1
system。 try了三个不同的cell lines，发现一个普遍问题： 细胞养了一个月之后我
就不同程度地丢失了最开始的knockdown. 我会详细解释一下我的做法，请大家帮我看
看问题到底在哪儿：
day 1: plate cancer cells for transduction
day 2: add virus/polybrene to cells (half volume of media) in the morning;
6hr later, add the other half volume of media to dilute polybrene
day 4: change to selection medium
day 5: in my case, usually the cells have become confluent before the effect
of antibiotics became obvious. I had t... 阅读全帖 |
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n***w
发帖数: 2405 | 33 貌似在鹊桥见过楼主。
我首推rainin, 但是价格小贵。不过质量刚刚的。
其次我推thermo出的finnpipette，新一代， 便宜很多，也挺好使。
再者eppendorf的枪，不过我不喜欢。
Gilson的枪我觉得有点沉。
记得要quote |
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a********o
发帖数: 173 | 34 多谢！
我觉得thermo可能不错，lab以前也有一套。这个买来是自己用的，不好意思用
eppendorf之类太好的哈哈。
请问一般是在它的官方网站上买么？ |
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n***w
发帖数: 2405 | 35 自己用不应该用好的吗？
这些公司都有local sales representative.
找他们要quote. |
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f*******a
发帖数: 671 | 37 我自己有两种不同的rainin,但是我更喜欢Gilson的质感。我就觉得Rainin太轻。
我也不喜欢eppendorf的。 |
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p*l
发帖数: 1359 | 39 自己必须有incubator,bio-safety hood, centrifuge。 water bath，pipette,
balance, ph meter 这些你们化学实验多半也是有的。－80冰箱，液氮罐用得不多的话
可以蹭蹭别人的，我就是一直在蹭。关键是得有个小屋关起门来专门来做cell culture
room。 |
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f**********e
发帖数: 1994 | 40 CS 的基本功不在这上面。就像生物的基本功不在谁用 pipette 最快一样。 |
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f**********e
发帖数: 1994 | 41 你这是 sampling bias。如果你拿 CS 的差生比 Bio 的尖子，结果当然是这样。你叫
CS 的尖子生来点 pipette，设计实验，估计也能秒杀 Bio 的差生。 |
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f**********e
发帖数: 1994 | 43 那这样会点 pipette 会换 medium 的人都可以叫 biologist 了。反正门栏不高嘛？ |
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f**********e
发帖数: 1994 | 44 CS 的基本功不在这上面。就像生物的基本功不在谁用 pipette 最快一样。 |
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f**********e
发帖数: 1994 | 45 你这是 sampling bias。如果你拿 CS 的差生比 Bio 的尖子，结果当然是这样。你叫
CS 的尖子生来点 pipette，设计实验，估计也能秒杀 Bio 的差生。 |
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f**********e
发帖数: 1994 | 47 那这样会点 pipette 会换 medium 的人都可以叫 biologist 了。反正门栏不高嘛？ |
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n***w
发帖数: 2405 | 48 你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
layer up.
然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
般整个retina都贴上去了。
然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
衡量，你也可以用soft brush，小心的弄平。
有什么问题可以再问我。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 49 问题是她前几年干什么了。她科研瞎做，又不会管理。手下的人必须百分之百听她的。
我以前跟她聊在生物学研究中什么最重要。我说是创造性，她说不对，创造性没用，勤
奋最重要。还说她需要的就是在bench上拿pipette 的人。我就说，“If creativity
fails you at the end, you still can work hard to compensate. If you only
know to work hard, what if it still does not work? What if you work very
hard and still get nowhere?" 她很生气。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 50 问题是她前几年干什么了。她科研瞎做，又不会管理。手下的人必须百分之百听她的。
我以前跟她聊在生物学研究中什么最重要。我说是创造性，她说不对，创造性没用，勤
奋最重要。还说她需要的就是在bench上拿pipette 的人。我就说，“If creativity
fails you at the end, you still can work hard to compensate. If you only
know to work hard, what if it still does not work? What if you work very
hard and still get nowhere?" 她很生气。 |
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