T****i
发帖数: 15191 | 1 那个疯狂的女PI 现在抓狂，问题是她前几年干什么了。她科研瞎做，又不会管理。手
下的人必须百分之百听她的。我以前跟她聊在生物学研究中什么最重要。我说是创造性
，她说不对，创造性没用，ideas are cheap。勤奋最重要。还说她需要的就是在bench
上拿pipette 的人。我就说，“If creativity fails you at the end, you still
can work hard to compensate. If you only know to work hard, what if it still
does not work? What if you work very hard and still get nowhere?" 她很生气。
其实我也不认同ideas are cheap 这种说法，能说出这种话的估计也没什么好idea。
Idea 有好的和坏的。关键是，不能有个loose idea，立刻就做实验，她基本就是这样
的反例。我的习惯是任何idea，都放一放，这叫 idea brewing。往往过几天，甚至几
个星期，我意识到某个idea不好，就... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 2 pipette gently, use new tips for each well, do not try to save tips, not
worth it. |
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a*****x
发帖数: 901 | 3 尽可能的用Matrix pipette了，但是要test不同的cell type, cell plating density,
antibody concentrations, lysis buffer, assay volume, labeling material,... |
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T****i
发帖数: 15191 | 4 详细讲讲我讨厌的那个女AP的所作所为。不少内幕也是我才知道的。
我们这嘎达有钱，薄厚前两年往往不用PI出钱。这女AP就招薄厚，到两年就赶走。最近
走的这个，是自己受不了了，呆了三个月，提出走人。还剩一个薄厚，快到两年了，就
等着被赶走了。其实她前三年有start up package，不知道她都花哪了。有一次有人送
货送错了，送到我这里，一大袋B27 salt，大概有70－100瓶，都是她定的。一瓶可以
配500ml 培养液。这些值5000－7000 刀。不知道她要干什么。后来也没看到她作出来
什么。
她找人的时候，总是撒谎，说她有好几个薄厚，另外还有其他candidate。其实她手下
薄厚最多的时候就是前三个月，有两个。她用薄厚做technician 的活，和薄厚的项目
没有任何关系。不干，就威胁人滚蛋。所以她招的人都是亚洲人，听话，又有身份限制。
她手下的学生也一样，呆不了两年就受不了，换实验室。有一次，她以为一个学生做的
项目可能会发CNS ，于是就说那个项目是她想出来的，她要做第一作者和通讯作者。该
学生只有跑路了。
她手下的technician也都呆不长。有一个女实验员要休产... 阅读全帖 |
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T****i
发帖数: 15191 | 5 引子：清明节到了，仅以此文献千千万万韶华已逝的生物人们。
我第一次见到老冯的时候，是十二年前我刚到美国中部一个小镇后不久。小镇很小，只
有一万多人，华人更少，只有几十个人。小镇有一个二流州立大学的分校，竟然有生物
系。这也是为什么我到这个小镇的原因。
小镇的中国人有三分之二以上信教，于是很快我也被拉着去了教会。我和老冯是在教会
认识的。我第一次去教会，就注意到他。他中等个子，黑瘦，头发花白，胡须剃的一丝
不苟，戴着老式的圆黑框眼镜。他总是很严肃，坐的笔直，悉心聆听牧师的布道，不时
轻轻颔首。唱赞美诗的时候，他声音洪亮，只是英语发音很有山东味儿。我能看到他眼
中的泪花。
老冯给我的第一印象是 先逃到台湾又跑到美国的国民党遗老遗少。我也一直这样认为
。直到开学后有一天在生物系的走廊里见到了他。他漠然地冲我点点头，就擦肩而过。
他走路很轻，好像贴着一面墙滑过。我很吃惊，因为我不记得系里有这么一个教授。中
午吃饭的时候，我问带我rotation的师姐，她笑了笑，说那是老冯，在这里很多年了，
是个千老。他跟别人也不怎么来往，连中午吃饭都不跟其他中国人聚在一起。所以大家
对他的情况也不怎么了解。不... 阅读全帖 |
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b*******n
发帖数: 8420 | 6 看到这里我确信这贴子的确是一个坑。
结尾颇有点孔乙己的味道。
而老冯在种种压力下得了一场大病。他因为长期高强度用pipette，大拇指基本废了，
手腕也严重受伤，做实验变得很慢了。 |
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h******s
发帖数: 3420 | 7 我就认识一个用pipettes 用到手废掉的postdoc
一辈子没结婚
但是经济情形还好，因为单身负担小，跟她一起的一个postdoc因为养两个孩子，看着
比她老很多很多，经常为几千块愁得头发都白了（学费，加盖小房子，修很老的车） |
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a********k
发帖数: 2273 | 8 我见过不止一个大拇指用pipette到长期慢性疼痛的，包括我自己。。。每次高强度用
几分钟就不行了。 |
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b*******n
发帖数: 8420 | 9 gilson的那种pipette是挺不好用的，阻力大，行程长。
两手轮换着用枪的真是神人。 |
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h********n
发帖数: 4079 | 13 single channel好像700多, multi channel好像1700多, 忘了, 两年前买的. |
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D******9
发帖数: 2665 | 15 分人， 以前上学时， 看到BERT VOGELSTEIN经常带着一个吊着线的老花镜， 拿个
PIPETTE做实验， 也不去MEETING， 也不给TALK,给学生上课除外。 我老板三十岁当上
AP就再也没有动过手。 |
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h******y
发帖数: 351 | 16 你这消化的时间太长了。
我的方法给你参考。
E13.5或E14.5，去头去内脏，转到一个预先装有0.25%Trypsin-0.53mM EDTA的3mL注射
器里，从20G的针头中挤过。如果组织块太大的话，多挤几次。然后在37C消化5分钟。
用FBS终止酶消化，离心收集组织和细胞，用5mL pipette重悬。每1-2个胚胎可以铺一
个10cm的dish。一两天后就长满了，这算P0。需要注意的是所有和组织接触的塑料器皿
用前需要先润湿，否则组织很容易粘到上面。
传代用0.25%Trypsin-0.53mMEDTA，37C，3-5分钟。这算P1。从这里起，seeding
density在4-5 X 10^3/cm2. 3-4天或者接近长满的时候分一次。一般在第2或3次的时候
冻足够多的细胞，1x10^6/vial. 运气好的话，一只孕鼠的6-8个胚胎分出来的MEF足够
你用的了。 |
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i***l
发帖数: 1656 | 17 micro pipette inject pbs, and harvest the difusion |
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p*l
发帖数: 1359 | 18 个人觉得Debug能力可能是科研实验中最重要的。我比较畏惧molecular cloning也是这
个原因，我当然可以按manual做，但是如果结果不好我一点Debug的能力都没有。
编程有个良好的习惯Debugging会容易的多，比如说变量名起的完整点（相对wet lab就
是每个管子标签写长点），每行对齐（样品码整齐），不要反复把一个变量用在不同的
地方（不要省pipette tip)，多写comment（lab note要完整）。 |
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L*****t
发帖数: 56 | 19 连Pipette都不会用的小本反而好带，一张白纸，示范几次就能学的很像样了。这种半
桶水晃荡的最难。水浴锅的使用演示过了，也说过这种小体积，短时间的的反应最好用
水浴锅，控温效果比PCR机和Heating Block好，但是到实际操作就自说自话的变成25C=
室温，37C=大肠杆菌的培养箱。我估计她是觉得水浴锅加热太慢，懒得等而已。
还有很多小事说过了第二天肯定记不住，再讲再忘。比如样品我让她放在冻存盒里再放
-20C冰箱，但是经常是做完实验往4C冰箱某个角落里一塞就走了，第二天再到处找。菌
种不好好保管，平板不倒置结果弄得到处都是水，性格再好的人也要怒
酶全扔掉是只因为保存不当，而是她没有告诉任何人就悄悄地一个人开始做ligation，
很担心这几个酶是不是也被污染了。 |
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O******e
发帖数: 4845 | 20 Press Release
2012-10-08
The Nobel Assembly at Karolinska Institutet has today decided to award
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2012
jointly to
John B. Gurdon and Shinya Yamanaka
for the discovery that mature cells can be reprogrammed
to become pluripotent
Summary
The Nobel Prize recognizes two scientists who discovered that mature, specia
lised cells can be reprogrammed to become immature cells capable of developi
ng into all tissues of the body. Their findings have revolutionised our... 阅读全帖 |
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l*******6
发帖数: 128 | 21 谢谢Pipette的鼓励！我的自信心一向比较弱。
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d*******s
发帖数: 24 | 26 这个问题感觉是做wound healing assay都面临的问题， 不知道文献中有没有报道。
Here I came up an idea to deal with this problem, I don't know if it will
work, up to your decision:
Rather than scraping the cells using pipette tip or any other tools which
generates the gap(or wound), half plate of the cells can be removed. Then
the growing up of the cells at the empty area may represent the cell
proliferation. The moving of the single edge may represent the wound healing
. |
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l*******y
发帖数: 3987 | 28 多谢，包子已发！
LOAD ３８４WELL PLATE的时候，TIP容易松或者歪么？ |
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z*********3
发帖数: 335 | 29 384 plate 啊，常用1-10ul的枪？
Brand 的是用O-ring 装Tip的，Thermo的那个不是
Brand的有的时候挑tip，目前用过配合不错的是USA scientific TipOne Low
Retention 的tip 和 Axygen 的 T-300
Thermo的那个虽然不挑tip，但是功能太多，不直观 |
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l*******y
发帖数: 3987 | 30 常用５－１００UL的，BRAND可以用EPPENDORF的TIP吗？ |
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h********n
发帖数: 4079 | 32 我很喜欢viaflo的东西, 用了几年了. 最方便的是可以调节channel之间的距离, 这样
从96 well到384 well互相加样就很方便. |
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s******d
发帖数: 363 | 33 我觉得针管吸是个好主意。不知你用过电生理patch那一套东西没有，那个里面玻璃的
micropipette
就是用micro-manipulator控制的。玻璃micropipette的大头接上一个负压的空气泵，
比如一个普通的pipetter的空气泵，来把你的东西吸住 |
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j*****9
发帖数: 716 | 34 Avant Guard Barrier Pipette tips 很好,
10 |
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d****i
发帖数: 2346 | 35 细胞培养使用，能加100uL， 200uL, 300uL....up to 1000uL。如果能加150， 250这
种最好。超过1mL的我就可以用一般tip了。
谢谢！ |
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s*****i
发帖数: 315 | 36 Eppendorf 有可以精确到50ul的，电子的，最大500ul
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8 |
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d****i
发帖数: 2346 | 38 谢谢两位！
我可能没说清楚。我的意思是比如一次吸上来1mL，然后每按一下打下去100uL，能连续
加10个孔的那种。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 41 先把treatment和培养液混合好了，再分到每个well,应该没有问题。药物是看浓度，
medium体积在每个well里10%的误差问题不大。如果你的试验是和细胞数量有关，在把
细胞放进每个well里时，最好不用repeating pipet。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 42
谢谢！用这个办法操作就方便了。我是要先加培养基，然后加10x drug进去。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 43 这样的话，你的medium体积有10%左右的误差，你加的compound的浓度也会有误差。我
一般是先混medium和compound,再分到well. |
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d****i
发帖数: 2346 | 44
我是先加drug1 ，过一段时间再加drug2，不能置换medium，所以。。。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 45 Add 100 with drug 1 first, and add another 100 ul with drug 1 and drug 2(
double amount). |
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d****i
发帖数: 2346 | 46
谢谢！如果drug1是消耗性的，第二次加drug1的话等于又增高了浓度咋办？ |
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m*********D
发帖数: 1727 | 47 Haha, then really no choice, just do your way with a few more repeats if you
want a smaller SEM. |
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d****i
发帖数: 2346 | 48
you
Anyway, thank you sooo much for your idea and help. |
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c***n
发帖数: 223 | 49 化工还好，毕竟偏工程，外面工作大把。你室友刚拿到phd就有AP，绝对分行业。现在
做纯生物的，能不作博后直接拿AP的，老板得是如来佛。凡是应用前景好的，当然没人
稀罕去作什么教职，比如CS，EE。最典型的是金融：严进宽出，手里有phd的话上来就
给开十几万，照样没人愿意去教书。跟生物正好相反，是个人只要手指头没折，就给发
把pipette下bench去，整天上传销课：好好干，多发文，将来当AP。 |
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n***3
发帖数: 663 | 50 要求是好用的，不会经常坏的，不用太fancy。谢谢！ |
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