d******u
发帖数: 178 | 1 野生型的p53是抑癌蛋白，无所谓“抗癌靶点”。有的治疗手段是单纯在p53缺失的肿瘤
细胞中恢复野生型p53蛋白的表达，比如腺病毒介导的p53表达（今又生）；有的是干扰
过度表达的MDM2对p53的抑制，比如Nutlin-3。
但是大部分的肿瘤细胞通过p53DNA结合区段的点突变来丢失野生型p53的功能，而且突
变的p53由于失去和MDM2的负调节loop而在肿瘤细胞中高量表达，在一定条件下还会表
现出“获得性功能”(Gain-of-function)。在这个意义上，突变的p53成为具有致癌/促
癌性质的蛋白，可以作为“抗癌靶点”。基于这个原理的治疗手段目前有尝试恢复突变
p53蛋白野生型功能的小分子药物。 |
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w**********o
发帖数: 128 | 2 想请教一个问题
wild type P53一般不稳定，用WB很难检测。我现在在一种病毒永生化的细胞（normal
cell）中用WB测到了P53，也就是说这是突变体的P53了？那么这个P53有意义吗或者说
这是P53吗？因为我用的抗体是普通P53 Ab，而突变体P53也就很难和他特异性的结合了
。此外，在这种我不知道他是怎么样突变的情况下，我怎么来设计引物做RT-PCR？
多谢各位了 |
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d******u
发帖数: 178 | 3 在非stressed状态下做p53的IB一般来说比较困难。CM5一般用在mouse p53上，按我的
经验应该能看到physiological level的p53，但会比较弱。
这个Reh是leukemia cell line吧，可能本来p53就缺失，有相关信息么？
经典的positive control，要不就是用0.2ug/ml Doxorubixin处理细胞6小时，或者5Gy
IR照射p53 wild-type细胞，然后提蛋白做IB。 |
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c******a
发帖数: 267 | 4 Nature Genetics Vol32, Oct,2002 p306P311
Human securin interacts with p53 and modulates p53-mediated transcriptional
activity and apoptosis.
The first report show the relevance between human securin and p53.
The gene PTTG1 is considered human securin gene which can inhibit
sister-chromatid separation in vertebrates, thus may contribute to cell-cycle
and tumorigenesis. The authors used phage display to identify the interaction
between hPTTG1 and p53, and they carried out a series of functional a |
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s*****y
发帖数: 32 | 5 最近实验需要在人的细胞里做抑制p53信号通路。结果用慢病毒载体过表达p53或者
p14ARF的shRNA
后，细胞增殖明显受影响。大约在六七天左右细胞开始死亡。到后面一个细胞都不剩。
但control组转
none targeting shRNA的细胞生长正常。实验是在WI38和HFL1（都是人的胚肺纤维细胞
系）做
的。这不符全逻辑啊。不是抑制p53信号通路后，细胞增殖会加快的吗？有没有谁在人
的细胞里抑制过
p53表达的？ |
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m********2
发帖数: 317 | 6 p53免疫共沉淀以及其结构
老板让我免疫共沉淀p53，然后测其结构。我对这一个领域不了解，想问问大家。
第一，有没有好用的kit or protocol来免疫共沉淀p53。
第二，免疫共沉淀出来的p53能否用来测结构。
第三，解构需要的蛋白量是多少?
谢谢大家， |
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m****g
发帖数: 530 | 7 一个严格的监测平衡系统可以确保了抑癌基因p53能够严格监控细胞生长，而且不会破
坏健康的细胞。
索尔克生物研究所（Salk Institute for Biological Studies）的科学家一项
最新的研究表明，这个系统需要进行精确地
调节，而且很细小的变化就会使其失去平衡。他们研究得出，至少存在两个负调控因子
（negative regulator）-Mdm2蛋
白和Mdmx蛋白，这两个调控因子可以阻止p53对正常细胞的破坏。只要轻微地增加Mdmx
的量就可以抑制p53的活性。
研究人员还发现，试验小鼠可以有效地抵抗了辐射的有害影响，但是对致癌因子诱导的
淋巴瘤的发生却很敏感。
该项研究的第一作者，博士后研究生Yunyuan解释说，我们的试验表明这个平衡
系统是多么的精细和不稳定，细微改变
以及等量的Chernobyl辐射就会使小鼠的致癌基因被激活而导致肿瘤发生。他们的这项
研究结果刊登在七月份的《Cancer
Cell》上，可以帮助我们理解有些肿瘤对辐射或化疗耐受的原因，为抗癌疗法提供了新
的线索。
P53可以控制基因表达从而抑制细胞分裂 |
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m****g
发帖数: 530 | 8 生物体中某些成熟细胞可以通过阻断抗肿瘤途径使细胞无限增殖，并快速高效转化成干
细胞样细胞（stem-like cells）。
这项研究结果表明，细胞的重新编译与癌细胞的形成有不可分割的联系。
之前有多位科学家尝试过利用多种技术研究细胞的多能性，但这些实验中，即
使1%的成熟细胞经重新编译，能成功转
化为诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS cells）的试验都非常
少。
在该项研究中，Yamanaka通过沉默p53通路将其试验的成功率提高了大约100倍
。研究人员通过敲除掉p53通路中的
几个基因，利用携带着四个常见的重新编译因子的病毒，成功的将10%的皮肤细胞转化
为iPS细胞。而且，对携带二因子、
三因子的病毒载体，或是质粒载体来说，阻断p53通路且不改变基因组的条件下，也能
使转化成功率显著提高。
此外，该研究还揭示了肿瘤形成机制。因为在核酸重新编译以及癌症形成的过
程中，p53途径都具有重要的作用。
参阅文献：
1. Takahashi, K. & Yamanaka, S. Cell |
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h********n
发帖数: 4079 | 9 see these 2 papers about recovery of p53 in lung cancer mouse models:
Selective activation of p53-mediated tumour suppression in high-grade
tumours
Nature 2010, page 567
Stage-specific sensitivity to p53 restoration during lung cancer progression
Nature, 2010, page 572 |
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w**********o
发帖数: 128 | 10 谢谢你的回复，你的意思是说我用regular p53 antibody检测出来的就是这个细胞系中
的本身的野生型的p53，而那些突变的在WB中没有体现出来了？（或者是说这种rugular
antibody,特异性没有那么强，所有的P53都反映出来了呢）
情况 |
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o**i
发帖数: 1165 | 11 I am not an expert of cancer biology.
To my knowledge, wt p53 could exist in immortal cell lines, such as large T
transformed cells.
And I was taught, n years ago, that p53 could be induced by several factors,
such as DNA damage, viral infection and stress blablabla.
Your antibody probably cannot discriminate mutate from wt.
What assure you that p53 got mutated anyway? Am I missing something here.
说英文真XX累啊 老夫有待提高啊
normal |
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k****n
发帖数: 42 | 12 就是说cell line 是只表达p53 mutant， 还是既表达mutant p53 , 也表达WT P53,
thanks! |
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H*****e
发帖数: 120 | 13 I have a p53 question co-ask. In a genomic seminar a few weeks ago, I
learnt that p53 mutation is highly frequent in human, but it is hard to find
mouse p53 mutation. Any one know the leterature for this conclusion (I
know human part but not mouse part)? |
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s******8
发帖数: 233 | 14 刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
请求建议 |
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l*****k
发帖数: 587 | 15 This is a pretty cool paper,
1. The experiment they used to show securing binding of P53 affects ability of
P53 to bind DNA, I think it is a long shot to have that conclusion, there are
plenty of other alternative explanations. However, their in vivo experiments
are very convincing.
2. Can anyone tell me how many AA can phage display vectors successfully
express?
A recent paper by ES. Lander and TR. Golub in nature genetics (Jan 2003) “A
molecular signature of metastasis in primary solid tumors” |
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l*********1
发帖数: 351 | 16 本人做蛋白质工程的，对癌症治疗方面了解很少。设计稳定p53和抑制p53降解的小分子
药物有搞头吗？谢不吝赐教。 |
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t******y
发帖数: 716 | 18 楼主的生物学基础知识有待提高。p53被检测到很正常。抗体能够识别的目标序列长度
也就10个氨基酸左右，即使有突变，大部分情况也能被普通抗体识别。这种实验没有必
要做p53的RT-PCR。 |
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r***e
发帖数: 2539 | 19 Do you mean mouse spontanous tumors have low frequency of p53 mutation? Then
curiously, what is the common mechanism of p53 pathway inhibition in mouse?
find |
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a*****n
发帖数: 2835 | 20 我刚从别的实验室要过来的，形态有点不是很像MEFs，同时要了TSC2 P53 double KO
MEFs，P53 KO MEFs用来做对照的。两种细胞形态差别太大，不知道是不是有问题。 |
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r***e
发帖数: 2539 | 21 哈哈，p53在293T中被stabilized by sv40 t-antigen.
做p53非常tricky，要读很多文献，先掌握基本情况。
新手不建议跳坑。
ml. |
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r***e
发帖数: 2539 | 22 很多做p53的人用U2OS。
p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。 |
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r******k
发帖数: 446 | 23 最近做P53这个蛋白 发现抗体时好时坏。。。。。。一会能做出来 一会不行 非常崩溃
。 我用的santa的。。大神们都用啥？？？
而且我高表达一个mut P53，用WT的去检测应该没啥问题吧？ |
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i*********0
发帖数: 915 | 24 unspecific 太多？你检测是人还是小鼠的样品？好像目前没有很好的小鼠的p53
antibody。你要是有p53-/-的样品就好了。 |
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r******k
发帖数: 446 | 25 就是我overexpress p53的一个mutation进到hela cell，然后做western。 我不知道那
些是unsepecific bands 还是因为我lysis buffer不强 p53有dimer之类的没打开。。 |
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s****l
发帖数: 395 | 26 anti-p53 monoclonal antibody (Santa Cruz, Pab240) |
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l***m
发帖数: 26 | 27 我倾向于找到p53 mimic peptide |
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f********n
发帖数: 6465 | 28 只要生物没有产业化一天,生物这行就没有什么搞头.
具体到P53,原来都已经讨论过了,肿瘤抑制之类的多数都是
老板之间合伙呼悠科研经费. |
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d******u
发帖数: 178 | 29 Myc-Arf-p53。不过一般Myc sensitize the cell to apoptosis。 |
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X******n
发帖数: 24 | 30 Reh细胞，用的santa cruz p53 FL393, 往细胞里加polyIC,或TNFalpha,作positive
control.
我还想做老鼠的spleen sample,有没有好用的抗鼠抗体推荐一个？ |
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r***e
发帖数: 2539 | 31 你这个FL393能用，要强一点可以试试vector lab 的一个多抗CM-5，死贵。
另外你有什么文献说TNFa能活化p53，麻烦告诉我一声。 |
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l********g
发帖数: 400 | 33 mouse 的 p53 抗体很多, 不知哪个公司的效果最好. 请知道的推荐一个好抗体.
谢谢. |
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r***e
发帖数: 2539 | 34 cm-5，多抗，只认老鼠的p53。
santa cruz fl-393，都认，但是人的强些。 |
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l******o
发帖数: 62 | 36 需要写个跟自己研究不相关的综述, 刚刚pubmed了一下Cancer p53, 居然有4w多片文献
%#$@, 哪位好心人能指点这方面研究的大牛, 以及必读文献, 谢谢啦! |
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w***a
发帖数: 4361 | 37 p53这个烂坑，你写了也没人看啊，还是换个topic吧 |
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w***a
发帖数: 4361 | 38 一个基因研究了几十年，发了好几万篇paper，
结果只能是大家自说自话，自娱自乐。
几乎任何有关p53的结论，你花几分钟时间就可以找到
提供反例的paper驳斥之。 |
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s******8
发帖数: 233 | 39 现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
什么cell line好做p53啊？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 40 Re LZ:
try Stem Cell line: H9 hESCs
cited from
Das B. et al. (2012)
HIF-2a Suppresses p53 to Enhance the Stemness and Regenerative
Potential of Human Embryonic Stem Cells.
Stem Cells. 30: 1685-95.
>
hESC Culture and Induction of Hypoxia
Due permissions were obtained to culture hESCs both at Department
of Medicine, Stanford University (Stem Cell Research
Oversight protocol #285, director: BD) and at Department of
Laboratory Medicine and Pathobiology, Hospital for Sick Children.
BGO1 and H9 hESCs... 阅读全帖 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 41 p53这个蛋白被做烂了
几乎每一个氨基酸都被摸过了
前几年，还有个尾巴lys的methylation(acetylation) 还发了一篇 N or S article，
你可以想象被研究到什么程度 |
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m***f
发帖数: 8 | 42 Dear all,
I'm trying to express p53 with N-term or C-term tag. I don't know if that's
going to affact it's function in vivo. Does anyone have experience with this
. Please attach reference if you can. Thank you very much!
Cheers,
momuf |
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D***a
发帖数: 516 | 43 santa cruz:
p53(DO-1): sc-126 |
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r******k
发帖数: 446 | 44 我也用的这个 但是我用的1：1000. 从来没检测到內源p53. 是不是应该用1：100. |
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m********2
发帖数: 317 | 45 我们发现p53在两种不同的条件下功能不同，所以想看看其结构是否有什么不同 |
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z*******2
发帖数: 2643 | 46 (-)阴性是人体细胞的正常状态
(+)阳性是人体细胞的非正常状态
雌激素受体，孕激素受体， PS2蛋白,转移抑癌基因等因素呈阴性，正常。
P21 抑癌基因， PCNA周期蛋白， P53 抑癌基因， HER-2/neu基因等因素呈阳性，
非正常。
一．指导乳腺癌内分泌治疗的标志物
1．ER（雌激素受体）、PR (孕激素受体)：ER、PR的检测实现了内分泌预见性的治疗。
乳腺癌一线内分泌治疗ER、PR均阳性者有效率为60%～70%。ER阳性PR阴性或ER阴性PR阳
的乳腺癌患者有效率20%～30%；ER阴性病人有效率仅为5%左右。说明ER、PR阳性的乳腺
癌患者对内分泌治疗尤为显著。
ER、 PR不仅是一项很重要的乳腺癌内分泌治疗的预先性标志物，而且也是一项预示预
后的标志物。恶性程度较低的高分化乳腺癌组ER、PR阳性率明显高于低分化癌组；淋巴
结转移组ER、PR阳性率低于无转移组；ER、PR阴性者预后差。研究表明ER、PR均为判断
乳腺癌患者预后较好的指标。
2．AR (雄激素受体)：AR检测水平与孕酮类药物有效率呈正相关，而与PR水平无关。乳
腺癌中AR大多与ER、PR同时表达，只有少... 阅读全帖 |
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w***r
发帖数: 709 | 47 "Super p53" mice exhibit enhanced DNA damage response, are tumor resistant
and
age normally.
García-Cao I(1), García-Cao M, Martín-Caballero J, Criado LM, Klatt P,
Flores JM,
Weill JC, Blasco MA, Serrano M.
Author information:
(1)Spanish National Center of Biotechnology, Department of Immunology and
Oncology, Campus de Cantoblanco, Madrid E-28049, Spain.
The tumor suppressor p53 is critical in preventing cancer due to its ability
to
trigger proliferation arrest and cell death upon the occurrence... 阅读全帖 |
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w***r
发帖数: 709 | 48 1. Nature. 2002 Jan 3;415(6867):45-53.
p53 mutant mice that display early ageing-associated phenotypes.
Tyner SD(1), Venkatachalam S, Choi J, Jones S, Ghebranious N, Igelmann H, Lu
X,
Soron G, Cooper B, Brayton C, Park SH, Thompson T, Karsenty G, Bradley A,
Donehower LA.
Author information:
(1)Cell and Molecular Biology Program, Baylor College of Medicine, Houston,
TX
77030, USA.
Comment in
Nature. 2002 Jan 3;415(6867):26-7.
The p53 tumour suppressor is activated by numerous stressors to ind... 阅读全帖 |
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d****n
发帖数: 5 | 49 近年来，当国内某些网站和媒体还在争议着中医是否科学，却不知在国际上，近三十多
年来中医阴阳学说已在现代生物医学界风靡，国外的生物医学科学家们津津乐道地研究
着中国古代的哲学思想，来寻找生命科学的理论突破口。他们已阴阳学说运用在现代医
学包括分子生物医学的各个分支领域，用来阐述和分析医学生物界各种的生理功能调节
和病理的变化，从而在更高的层次归纳总结生物体内的机能活动，组织结构及其内稳态
的相互关系，并为科学研究提供前瞻性的理论指导。
阴阳学说在现代医学中的兴起
在七十年代， 当时Goldberg ND教授发现了cAMP与cGMP（环磷酸鸟苷）通常呈拮抗性，
有共同参与调节生物细胞的作用，首次提出了细胞功能调节的“阴阳学说”假设。这一
观点引起了许多学者的兴趣，生物医学界相继发表了不少有关cAMP和cGMP的这种拮抗性
调节与阴阳对立消长的学术论文。此后在八十年代，科学家们试图将阴阳学说运用于医
学各个领域。其中1986年Marx JL在《科学》杂志上发表了“细胞生长调控的阴和阳”
，可以说是阴阳学说第一次在世界顶级科学刊物上被得到了认可，确立了阴阳学说的科
学性，及在现代生物医学中的运... 阅读全帖 |
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y****g
发帖数: 36950 | 50 容易得癌症的基因是有遗传的，只不过看这个人生活的环境和生活方式是不是容易诱发
出来吧！
在 rs1042522 位点上携带 C 型等位基因的人群抗癌能力较强，而在该位点上携 带 G
型等位基因的人群抗癌能力弱
rs11540652，也称为arg248gln或r248q，在p53肿瘤抑制基因的一个单核苷酸多态性。
研究证实与 P53 密切相关的癌症有肝癌、肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、乳腺癌、卵
巢癌、 前列腺癌等多种常见癌症。
50%以上会出现 P53 基因的突变。不过P53过表达老鼠，表型是早衰 概括来讲，P53 基
因编码蛋白的具体功能体现在三个方面： 监控细胞的生长速度，并调动其它蛋白抑制
细胞非正常生长； 调动周围蛋白来修复受损细胞的 DNA； 如果 DNA 受损严重，P53
编码蛋白就会诱导该细胞凋亡。 以确保体内细胞维持正常生理周期。 然而，P53 抗癌
基因的多态性也决定了它抗癌功能的强弱。通过大量的研究证实 当 rs1042522 位点 C
等位基因突变为 G 时，P53 抗癌基因的抗癌功能会变弱，
：
：主要是文盲。误以为癌症遗传。 |
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