a*******e
发帖数: 245 | 1 if you add lysozyme in lysis/purification, most probably it is the lysozyme.
道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白 |
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s********n
发帖数: 2939 | 2 Then I moved to culture more and lysed the cells using a sonicator, after
resuspending the pellet with 1x cold PBS/1% PI. After all these, I loaded
the supernatant and pellet side by side and stained by GelCode and a bulk of
protein (I assume it was protein) was detected in the pellet part.
你有没有在supernatant中检测到你的target protein？如何检测的？WB or activity?
从你的表述你好像没有做WB。
Then I tried 1L culture and repeated the 2nd experiment. This time, I
incubated the supernatant with glutathione sepharose 4b beads an... 阅读全帖 |
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m****m
发帖数: 395 | 3 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
了？大家说说有没有这种情况？
而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 4 pLysS只表达少量的Lysozyme用于抑制T7 RNA polymerase，而且表达出来的lysozyme在
胞内而不是细胞外，无法作用在细胞壁上。所以在lysis buffer里加lysozyme是必需的。
只不过我觉得lysozyme对于inclusion body本身的溶解应该没什么作用吧，它的作用估
计只是让细胞降解的更彻底，释放出更多的inclusion body而已。
of |
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W*********e
发帖数: 247 | 5 不是你蛋白的降解产物? 另外镍柱的特异性不好, 能拖下来很多杂蛋白
道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白 |
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a**y
发帖数: 464 | 6 14 kd的杂带在Ni column很常见，35 mM 能洗掉
道lysozyme没被洗掉吗？按理
lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白 |
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m**********2
发帖数: 6568 | 7 there are lots of proteins with multiple His residues. they bind to Ni-NTA.
道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白 |
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a*******e
发帖数: 245 | 8 make sense. because that band is lysozyme, if supplemented with lysozyme in
lysis.
Some people even get crystals, but later on it proved to be lysozyme crystal.
this |
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n***w
发帖数: 2405 | 9 Hi, all,
I am using Rosetta-Gami DE3 pLySs to expression my fusion protein which is
predicted as 91kDa.
I first did the expression assay and found protein expression was induced
after adding IPTG by testing the whole cell lysate. (bacteria at certain
time points, add 2X sample buffer, boil, SDS-PAGE).
Then I moved to culture more and lysed the cells using a sonicator, after
resuspending the pellet with 1x cold PBS/1% PI. After all these, I loaded
the supernatant and pellet side by side and stain... 阅读全帖 |
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c******i
发帖数: 4091 | 10 发信人: chichazi (吃叉子), 信区: NextGeneration
标 题: 包皮到底有什么用？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 21 14:25:55 2014, 美东)
The foreskin has numerous protective, sensory, and sexual functions.
· Protection: Just as the eyelids protect the eyes, the foreskin
protectsthe glans and keeps its surface soft, moist, and sensitive. It also
maintains optimal warmth, pH balance, and cleanliness. The glans itself
contains no sebaceous glands-glands that produce the sebum, or oil, that
moisturizes our skin.11 The foreskin produc... 阅读全帖 |
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c******i
发帖数: 4091 | 11 The foreskin has numerous protective, sensory, and sexual functions.
· Protection: Just as the eyelids protect the eyes, the foreskin protects
the glans and keeps its surface soft, moist, and sensitive. It also
maintains optimal warmth, pH balance, and cleanliness. The glans itself
contains no sebaceous glands-glands that produce the sebum, or oil, that
moisturizes our skin.11 The foreskin produces the sebum that maintains
proper health of the surface of the glans.
· Immunological Defense: The m... 阅读全帖 |
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a*******g
发帖数: 33 | 12 有人会这样想，可是已经发表的论文都是这样的，仅用一个cre。在动物身上如果用两
个cre的话，那么lysozyme M没法表达，相当于把lysozyme也KO了。请问，你是否有更
多的论据呢？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 13 我就是用的BL21(DE3)pLysS strain，用0.4mM的IPTG诱导，表达4hr，蛋白产量很好。
T7 lysozyme是T7 RNA polymerase的natural inhibitor，它的表达是为了抑制在BL21(
DE3)里比较常见的leaky expression，但是这个表达量不至于抑制被IPTG诱导后的
expression。而且lysozyme不是蛋白酶，不可能降解你的蛋白。
你的蛋白如果用BL21(DE3)表达很好，说明你的蛋白对E.coli没有细胞毒性，你可以不
需要用BL21(DE3)pLysS来表达。
还有就是你看一下你用的是BL21系列还是BL21 Gold系列，这两个系列都有(DE3)和(DE3
)pLysS，但是我用BL21 Gold系列就碰到过表达不出来的问题。我说的BL21和BL21 Gold
都是Stratagene（现在的Agilent Genomics）的产品，不知道别的公司是不是也是这么
标识的。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 14 我以前在国内时候提细菌基因组用的方法，貌似对酵母也work,我以前就提过一次酵母
，确实work的很好，还记得gel上的照片贼亮贼亮的。那时候年轻啊！问过别人，说
lysozyme对yeast也能work.
Extraction of DNA from Bacteria and Yeasts
(This protocol was developed by Housepainter on February 09, 2010)
1.Inoculate 5 ml of medium with a single colony of transformed bacteria or
yeasts.
2.Pour 1.0 ml of the culture into a tube. Centrifuge at maximum speed for 30
seconds at room temperature. Remove the supernatant.
3.Resuspend the bacterial pellet in 1.0 ml 0.85% NaCl by vigorous vortexi... 阅读全帖 |
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s****9
发帖数: 932 | 15 If they express T cell receptor (e.g. CD3 or TCRbeta), they are bona fide T
cells. You can stimulate them with plated bounded CD3/CD28 to see whether
they can proliferate, which is a function indicator for T cells.
Regarding macrophage, you could stain a few typical macrophage marker, such
as F4/80, CD11b, lysozyme M as you mentioned. The morphology of macrophage
is quite different from T cells as well.
You do not need a reference. Instead, you should add some splenic T and
macrophage as posi... 阅读全帖 |
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s****n
发帖数: 8912 | 16 主要成分
胎盘的成分较复杂．胎盘球蛋白制品中含有多种抗体， 在临床上长期用于被动免疫．
人胎盘中含有干扰素（Interferon）以及巨球蛋白（称β-抑制因子）。
亦含有与血液凝固有关的成分：其中有类似凝[3]血因子Ⅻ的纤维蛋白稳定因子、尿激
酶（Urokinase）抑制物和纤维蛋白溶酶原活化物．
紫河车的使用方法：炖汤
人胎盘中含有的激素有：促性腺激素 A 和 B、催乳素、促甲状腺激素、催产素样物质
、多种甾体激素如雌酮、雌二醇、雌三醇、孕甾酮、雄甾酮、去氧皮质甾酮、11-去氢
皮质甾酮（化合物 A）、可的松（化合物 E）、17-羟皮质甾酮（化合物 F）等．人胎
盘催乳素与人垂体生长素的化学结构相关，有免疫交叉反应， 在垂体切除大鼠与生长
激素亦有明显的协同作用，因此也称为催乳素-生长激素．有报告认为， 胎盘催乳素有
生长激素样作用；亦有报告指出，胎盘激素在垂体切除大鼠无生长激素样作用。
人胎盘中还含有多种有应用价值的酶， 如： 溶菌酶（Lysozyme）、激肽酶（Kininase
）、组胺酶（Histaminase）、催产素酶（Oxytocinase）等．另外还含有红细胞生成素... 阅读全帖 |
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G*******r
发帖数: 657 | 17 大家都知道，将一枚生鸡蛋煮熟再简单不过，可如果逆向行之，把熟鸡蛋变回生鸡蛋，
难度堪比登天。但是，已经有科学家做到了。
据UCI News月刊报道，加州大学尔湾分校和澳大利亚的化学家们得到了一项惊天发现：
他们找到了一种创新的方法，将蛋白质分离，恢复到其原本状态。
加州大学尔湾分校化学、分子生物学和生物化学教授Gregory Weiss表示，在论文里，
我们描述了使用特殊设备将复杂的蛋白质分离出来，并重新复原的方法。我们将蛋白在
90摄氏度的水中煮20分钟，然后让其中的一项关键蛋白质重新归序，变回原本面貌。
当然，科学家们并不是对生蛋变熟蛋，再由熟蛋变生蛋的过程感兴趣，而是其中蕴藏的
巨大技术前景。该技术的最大作用，是大幅降低癌症治疗、食品生产的成本。据
ChemBioChem杂志估计，如果大规模商用，将为全球生物技术产业较少1600亿美元开支。
那科学家们是如何将熟鸡蛋变回生鸡蛋呢？
据介绍，当蛋在热水中煮过之后，在热量和化学反应催化下，蛋白中的一钟名为“溶菌
酶（lysozyme）”的透明蛋白质会凝固，并变成白色，生成新的化学结构。但在上述技
术试验中，Gregory Weiss和... 阅读全帖 |
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a*****i
发帖数: 2108 | 18 也就只有美国医生但凡碰到有点感染就尼玛开抗生素。这种细菌根本不是无解，楼上也
有人说到了。首先规律性服用含益生菌的食物，利用这些来压缩有害菌的生存空间；其
次可以研制专门的窄谱lysozyme来对付。 |
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r*s
发帖数: 2555 | 19 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: rbs (jay), 信区: Joke
标 题: 诺委会太不像话了
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 4 10:23:52 2017, 美东)
尼玛87篇参考文献就不能加一篇施教授或能教授的CNS？
References
1. Ruska, E., Nobel Lectures, Physics 1981-1990, Tore Frängsmyr and
Gösta Ekspong, Eds. (1993) World Scientific Publishing, Singapore
2. Marton, L. (1934) Electron microscopy of biological objects. Nature
133, 911-911
3. Althoff, T., Mills, D. J., Popot, J. L., and Kühlbrandt, W. (2011)
Arrangement of electron transport chain compone... 阅读全帖 |
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F*********o
发帖数: 2093 | 20 汗, 但是适量的盐对妈妈的肾脏是没有负担的啊, 而且也是身体需要的. 人体每天需要
1.5克盐, 如果达不到这个标准容易导致hyponatremia, 症状就是呕吐, 疲劳, 肌肉无
力等等.
母乳里盐的含量是超级低的, 这个含量对宝宝没有影响, 而且可以帮助宝宝防止脱水.
Composition of human breast milk
Fat total (g/100 ml) 4.2
fatty acids - length 8C (% ) trace
polyunsaturated fatty acids (%) 14
Protein (g/100 ml) total 1.1
casein0.4 0.3
a-lactalbumin 0.3
lactoferrin 0.2
IgA 0.1
IgG 0.001
lysozyme 0.05
serum albumin 0.05
ß-lactoglobulin -
Carbohydrate (g/100 ml)
lactose 7
oligosaccharides 0.5
Miner |
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p********2
发帖数: 9939 | 21 好了,找到了,晚上叫老公说去
Don't Shake the Milk
Linda J. Smith, BSE, FACCE, IBCLC
Why not?
Because shaking expressed mothers' milk (or boiling or freezing it)
denatures the shaped molecules of the protective proteins, leaving only the
pieces - the amino acids - the parts. Lactoferrin, lysozyme, and other
protective components work their protection magic when they are in their
original shaped molecular structure. Some components remain intact, even
during freezing, shaking or heating. They not only protect t... 阅读全帖 |
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x******1
发帖数: 593 | 22 来自主题: NextGeneration版 - 冻奶的营养 另外，有MM说冻过化了的奶一个小时内要喂完，否则就会坏掉，因为没有了杀菌细胞。
但是我觉得，照上表所说，溶菌酶（Lysozyme）的活性不受冷冻所破坏，所以应该也还
是比配方奶可保存时间长 |
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w*********t
发帖数: 3958 | 23 在kellymom上看到了，
大惊失色！偶之前暖奶后都会shake一下，保证温度均匀
不能shake！！请看项链和珠子的比喻
Don't Shake the Milk
Linda J. Smith, BSE, FACCE, IBCLC
Why not?
Because shaking expressed mothers' milk (or boiling or freezing it)
denatures the shaped molecules of the protective proteins, leaving only the
pieces - the amino acids - the parts. Lactoferrin, lysozyme, and other
protective components work their protection magic when they are in their
original shaped molecular structure. Some components remain intact, even
during freez... 阅读全帖 |
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l*****e
发帖数: 8596 | 24 是不是make sense，管用就行，据说还可以抗湿疹。我娃就是这么给他搞。
其实还是有科学道理的，奶本身是油在水里的分散系，有蛋白质稳定的。里边的油本身
就是一个很好地moisterizer,小娃不适合用护肤霜，所以用奶在皮肤表面形成一层保护
膜，不刺激还保湿。奶里还有lysozyme（溶菌酶）之类的好东西。有兴趣可以去google。而且有牌子用鲜奶制成的护肤品卖给大人用。
其实也不是很奢侈，做这些一口奶就够了 |
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b*s
发帖数: 82482 | 25 ascorbic acid又不是所有的营养物质。你把细胞结构破坏了，很多有破坏性质的酶会
破坏很多营养物质的，plant也有lysozyme一类的东西
问题是，你再假装看不见，大部分ascorbic acid终究会变成dehydroascorbic acid再
被吸收变回ascorbic acid |
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r*s
发帖数: 2555 | 26 尼玛87篇参考文献就不能加一篇施教授或能教授的CNS？
References
1. Ruska, E., Nobel Lectures, Physics 1981-1990, Tore Frängsmyr and
Gösta Ekspong, Eds. (1993) World Scientific Publishing, Singapore
2. Marton, L. (1934) Electron microscopy of biological objects. Nature
133, 911-911
3. Althoff, T., Mills, D. J., Popot, J. L., and Kühlbrandt, W. (2011)
Arrangement of electron transport chain components in bovine mitochondrial
supercomplex I1III2IV1. The EMBO Journal 30, 4652-4664
4. Letts, J. A., Fied... 阅读全帖 |
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f*********p
发帖数: 13 | 27 IPTG induces the expression of T7 polymerase (T7 pol is under the control of
lac, inducible by IPTG), which in turn translates your gene of interest
because it is under the control of T7 promoter and has to be processed by T7
pol, but not E.coli pol. without IPTG, T7 pol has very low basal expression
level, and your gene of interest will have some low basal expression too.
plysS expresses a low level of lysozyme, which functions as an inhibitor for
T7 pol, and thus, with no IPTG induction, inhib |
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m****m
发帖数: 395 | 28 NI柱特异性不好，那怎么办呢？
14 kd的杂带在Ni column很常见吗？，我是用35 mM 洗的，但是似乎没有完全洗掉
这么说不是LYSOZYME咯？ |
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a******g
发帖数: 71 | 29 我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA，lysozyme，ubiquitin和
cytochrome C。 |
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c****l
发帖数: 1086 | 30 谁是乡下医生Fleming吗？人家可是正规的科研人员，看这里
Sir Alexander Fleming (6 August 1881 – 11 March 1955) was a Scottish
biologist and pharmacologist. Fleming published many articles on
bacteriology, immunology and chemotherapy. His best-known achievements are
the discovery of the enzyme lysozyme in 1923 and the antibiotic substance
penicillin from the fungus Penicillium notatum in 1928, for which he shared
the Nobel Prize in Physiology or Medicine in 1945 with Howard Walter Florey
and Ernst Boris Chain
而且青霉素只是目前人类使 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 31 我的蛋白bl21(DE3)的细胞里0.5mM IPTG induction 表达很好。后来转到BL21(DE3
pLysS)里 加IPTG却不表达我试过
0.1-2mM的IPTG. 2hr, 4hr 和 o/n. 2mM IPTG O/N 好像有一点点表达。。 都是同样
的蛋白同样的hosting vector. 现
在怀疑是不是BL21(DE3 pLysS)里表达的lysozyme 把我的蛋白降解了? 不太可能啊！
大家有没有遇到类似的情况呢？ |
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g*****y
发帖数: 6325 | 32 是的lysozyme 降解多糖的。。 不应该降解我的蛋白。 我表达好的是bl21 gold. 但是
我最后是必须用plysS这个菌株的因
为这个菌株是从别的实验室拿来的还有另一个特别的属性是我需要的。 我现在想在没
有chlor resist 的LB培养这个菌株一
段时间直到它失去plysS这个vector. 不知道可行吗?
BL21(
DE3
Gold |
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s********n
发帖数: 2939 | 33 感觉是sonication的可能性很小，如果不放心你可以试试用detergent和lysozyme
lysis (BugBuster)。估计你的蛋白大部分是inclusion boday，GST增加fusion蛋白可
溶性的程度非常有限。 |
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s***m
发帖数: 6197 | 34 需要细胞里的总蛋白
只有10mL的细胞
实验室里找不到lysozyme
能不能就加点SDS把细胞煮煮破壁呢？
然后离心取上清
这样子可以吗？
有经验的同学介绍一下哈
谢谢啦。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 35 嗯，有可能饱和了。
我昨天把1st binding后的supernatant又加beads了，看好没好些今天。
我觉得N-lau还是挺好使的。能solubilize大部分pellet。
我500ml的culture提了差不多160ug的蛋白。。。
我下次买点你说的B-Per试试好了～ （不过看成分也差不多）
我现在的protocol基本上是：(For 500ml culture)
1. thaw pellet on ice
2. add 18ml GST buffer (配方见上)，add 1% PI, add 2ml lysozyme (10mg/ml)，
mix on ice for 30 seconds
3. pass thru 20G syringe to reduce viscosity, also add DNAse 40ul (1mg/ml).
4. sonication (it will become clear)
5. 10000rpm, 40min，4deg
6. collect supernatant for GST beads binding
不过我这次还是将G... 阅读全帖 |
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h**********r
发帖数: 671 | 36 EGTA换成EDTA可以不？实验室没有EGTA
要加lysozyme不？
另外怎么处理？37度30min?
多谢！ |
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s********n
发帖数: 2939 | 37 BugBuster + Lysozyme + Benzonase + protein inhibitor cocktail |
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k***r
发帖数: 100 | 38 I agree with Ankyrin, looks like endosomes and lysosomes (try EEA1 and some
lysozyme markers). Some times, truncated protein after translation it
misfolds and directly sent to lysosome for degradation. |
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d******1
发帖数: 709 | 39 其实就和加个lysozyme 一样。抗体容易结晶。
packing |
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i**y
发帖数: 71 | 40 Many enzymes lose activity upon heat and cannot refold without chaperones.
Lysozyme, alcohol dehydrogenase are among some of the commonly used models.
I measured heat inactivation of trehalase when I was in college, also very
easy. |
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B****w
发帖数: 48 | 41 不好意思只有一个包子的伪币了，请各位大侠原谅。
刚接触干细胞和免疫细胞，遇到一个问题。我把IPS细胞加药处理后，细胞好像分化为
了免疫细胞--看起来像巨噬细胞和T细胞。已经测了F4/80,CD11b，CD4,CD8，lysozyme
M.不知道进一步怎么证明他们就是巨噬细胞和T细胞。功能？还是有什么特异性的分子
标记？各位大侠可否给提供一两篇文献。十分谢谢！ |
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p****s
发帖数: 3153 | 42 我知道oregon有个做T4-lysozyme的院士，不知道oregon在生化排名第几？ |
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p****s
发帖数: 3153 | 43 我知道oregon有个做T4-lysozyme的院士，不知道oregon在生化排名第几？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 44 you can try Dynabeads
i.e.
PMID 22991688
Denisin AK et al.
Post-collection processing of Schirmer strip-collected human tear fluid
impacts protein content. (2012).
Analyst. 137: 5088-96.
recombinant human lysozyme 14 kDa, pI=10.2–11
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22991688 |
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l*******y
发帖数: 3987 | 45 没有太做过细菌方面的实验，现在有大约１０UL的体液，想检测里面的细菌DNA，而且
量太小也没有办法纯化。用什么LYSIS方法比较好？ 如果用碱裂解的话，是不是一定要
纯化？用LYSOZYME呢？如果不裂解，直接PCR的话，高温可以直接BREAK CELL WALL吗？
多谢！ |
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s******y
发帖数: 17729 | 46 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: rbs (jay), 信区: Military
标 题: 诺委会太不像话了 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 4 10:58:51 2017, 美东)
发信人: rbs (jay), 信区: Joke
标 题: 诺委会太不像话了
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 4 10:23:52 2017, 美东)
尼玛87篇参考文献就不能加一篇施教授或能教授的CNS？
References
1. Ruska, E., Nobel Lectures, Physics 1981-1990, Tore Frängsmyr and
Gösta Ekspong, Eds. (1993) World Scientific Publishing, Singapore
2. Marton, L. (1934) Electron microscopy of biological objects. Nature
133, 911-911
3. Althoff, T., Mi... 阅读全帖 |
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f****n
发帖数: 95 | 48 我在为含氟的丙烯酸酯/丙烯酰胺类高分子寻找good solvent,发现trifluoroacetic
acid (TFA)的溶解能力特别强，很好用。可是，高分子（白色粉末）溶解于新鲜的TFA
之后溶液由无色透明慢慢变为淡黄色透明。
是不是因为TFA是强酸有所谓的发烟现象？浓盐酸就是淡黄色，因为含有少量杂质Cl2
。另外， 含卤素或含硝基的化合物容易变颜色,是少量变质导致的吗？
谢谢！
p.s.
查到有这么一句：“olutions of proteins in trifluoroacetic acid prepared in
vacuo
are clear and colourless; on exposure to air, a purple colour develops.”不
解中···
Nature 174, 509 (11 September 1954); doi:10.1038/174509a0
Anhydrous Trifluoroacetic Acid as a Solvent for Proteins
JOSEPH J. KATZ
Chemistry Di... 阅读全帖 |
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r*********s
发帖数: 1027 | 49 发信人: rainingcats (喵喵), 信区: Pre_Resident_Club
标 题: Re: 【读书笔记】 医学十大发现
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jun 5 03:50:42 2011, 美东)
第八章 Nikolai Anichkov与胆固醇
这一章我实在没兴趣，讲的是1913年，俄国人Anichkov发现高胆固醇喂养的兔子，会得
动脉粥样硬化。我觉得这个发现被选入十大的唯一原因是，作者是冠心病专家，偏爱心
脏病方面的研究。
第九章 Alexander Fleming与抗生素
1875年丁达尔想看看细菌在空气中的分布，是均匀的弥漫呢，还是一团一团的。他放置
了一百根含培养液的试管，敞开口暴露在空气中，过了一段时间，有些试管变得混浊，
说明细菌在空气中不是均匀分布的。24小时之后，丁达尔发现有些试管表面开始生长一
种漂亮的真菌真菌，真菌和细菌互相角力，最终都是真菌胜利。丁达尔没有继续研究下
去，因为那时候人们还不知道细菌会致病。后来人们知道他发现的就是青霉菌。
20多年后，有个法国医学生发现灰绿青霉有抑制细菌的作用，1925年有报道青霉菌能... 阅读全帖 |
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A*******s
发帖数: 9638 | 50 "Empty Nose" Syndrome
What Is Empty Nose Syndrome?
What are Turbinates?
Turbinate Surgeries
How do you prevent ENS?
Treatment
What Is Empty Nose Syndrome?
The nasal turbinates are shelf-like structures in the nasal cavity (which
begins where the inside of your nose enters your head). They serve to
provide moisture, warmth, and airflow for breathing, and many of the body's
natural defenses against infection. There are a variety of different
problems associated with the turbinates. Sometimes the t... 阅读全帖 |
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